表皮生长因子对人小细胞肺癌细胞Survivin表达的影响及其机制

目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人小细胞肺癌NIC-H446细胞中凋亡抑制因子Survivin表达的影响及其调控Survivin的机制.方法 噻唑蓝(MTT)法测定EGF对细胞增殖率的作用.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)方法测定EGF对NIC -H446细胞Survivin表达的影响.Western blot方法测定EGF对NIC-H446细胞p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、磷酸化JNK (p-JNK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)信号通路蛋白的表达影响.结果 EGF可促进NIC-H446细胞增殖,具有浓度-时间依赖性.与对照组(0.36±0.06、0.57 ±0.15)比较,EGF组Survivin mRNA(0.69±0.12)和蛋白(0.89±0.19)表达明显升高(P＜0.01).与对照组(0.29±0.08)比较,EGF组p-p38MAPK蛋白表达水平(0.68±0.27)明显上升(P＜0.01),其他蛋白表达均无明显变化.EGF+ SB203580组Survivin蛋白表达(0.56±0.17)、p-p38MAPK蛋白表达(0.41±0.11)显著低于EGF组(0.92 ±0.21、0.72 ±0.19,P＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义.结论 EGF通过活化p38MAPK信号通路上调小细胞肺癌细胞中Survivin的表达,促进细胞增殖,这可能是小细胞肺癌发展的重要机制.     

利用RNAi技术下调VEGF表达对血管瘤内皮细胞的影响

目的：培养人血管瘤内皮细胞（HemECs）,利用RNA干扰技术下调HemECs中VEGF的表达,观察其对血管瘤内皮细胞的影响。方法：利用组织块法培养HemECs,鉴定、筛选和纯化后,分为A、B、C三组,分别为转染组、空脂质体组和对照组。利用脂质体法将pGCsi U6/Neo/dsRED-VEGF真核表达质粒转染到内皮细胞中。通过荧光显微镜大体观察转染效率和细胞生长情况、ELISA法检测细胞分泌VEGF蛋白和MTT法检测质粒转染对HemECs的影响。结果：转染组第五天转染细胞达到总细胞80%以上,但是细胞凋亡逐渐增加。第七天细胞稀少,漂浮死细胞增多。转染阳性细胞减少,细胞整体状态差。转染组培养上清中VEGF蛋白浓度在转染的第1、3、5、7天分别为141.3±7.82、92.34±5.71、68.07±5.95及40.65±6.71pg/ml。MTT法检测各组490nm的OD值在1、3、5、7天均有统计学差异（P〈0.05）。结论：转染后的细胞活性降低,通过对其分泌的VEGF蛋白的测量发现,转染组VEGF蛋白明显下降,同时,细胞活力受到影响,漂浮的死细胞增多。这些都可以说明,VEGF在血管瘤内皮细胞生长、增殖之中起着非常重要的作用,这也为我们治疗血管瘤提供一个新的靶点。     

下调HDAC6表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨下调HDAC6表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响及其分子机制。 方法：分别用HDAC6 siRNA和阴性siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞,以未处理的MCF-7细胞为空白对照,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞HDAC6与p21基因和蛋白的表达,CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测细胞增殖与细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡。 结果：干扰效果验证结果显示,HDAC6 siRNA转染能有效降低MCF-7细胞HDAC6 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）,而阴性siRNA无此作用（P>0.05）。与空白对照组比较,HDAC6 siRNA组细胞增殖受到明显抑制,细胞G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞的凋亡率明显增加（均P<0.05）;阴性siRNA组无上述改变（均P>0.05）。HDAC6 siRNA组细胞p21 mRNA与蛋白的表达均较空白对照组和阴性siRNA组明显升高（均P<0.05）。 结论：下调HDAC6的表达能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与升高p21表达有关。     

氧化苦参碱对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察氧化苦参碱(OXY)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法测定OXY对A549人肺癌细胞活力的作用.流式细胞术测定A549细胞凋亡率.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Westem blot方法测定OXY对A549细胞B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白表达的影响.Western blot方法测定OXY对A549细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响.结果 OXY可抑制A549细胞增殖.与对照组[(5.63±0.76)％]比较,OXY组细胞凋亡率[(13.26±2.15)％]上升(P＜0.01);与对照组(1.02±0.27、0.23±0.04)比较,OXY组bax mRNA(1.61±0.19)和蛋白(0.71±0.10)表达上升(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较(0.94 ±0.14、0.64±0.09),OXY组bcl-2mRNA(0.42±0.05)和蛋白(0.21±0.04)表达下降(P＜0.01).与对照组(0.29±0.03)比较,OXY组p-JNK表达水平(0.66 ±0.06)明显升高(P＜0.01),其他蛋白表达均无明显变化.与OXY组(0.66±0.07、0.28±0.03、0.65±0.08)比较,同时给予OXY和p-JNK抑制剂SP600125组bax蛋白表达(0.39±0.05)下降,bcl-2表达(0.50±0.08)上升,p-JNK蛋白(0.26 ±0.04)表达下降(P＜0.01).结论 OXY碱可诱导A549细胞凋亡,可能与升高p-JNK水平有关.     

ThD下调Hep-G2细胞骨桥蛋白的表达对其侵袭转移能力的影响研究

目的了解ThD对体外肝癌细胞侵袭转移以及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法应用细胞常规培养方法培养人肝癌细胞株Hep-G2,CCK-8法检测不同药物浓度及不同作用时间下ThD对肝癌细胞增殖的影响,细胞划痕试验验证ThD对肝癌细胞侵袭转移的能力的影响。用免疫细胞化学的方法检测用药组和对照组肝癌细胞中OPN的表达情况,Western blot法检测不同药物浓度及作用时间下肝癌细胞中OPN表达量。结果与对照组相比在作用24、48、72 h,ThD400μg/ml用药组对细胞生长均有抑制作用(P0.01),并且抑制率和作用时间呈正相关。ThD用药组细胞迁移率在作用24、48、72 h后同对照组相比,P值均0.05,差异有统计学意义。用药组同对照组免疫细胞化学染色积分为1.728±0.051、2.328±0.245,t值为-5.354,P0.01。ThD用药组对细胞OPN表达有抑制作用,与对照组相比在作用24、48、72 h时,P值均0.01,并且抑制率和作用时间呈正相关。结论 ThD对Hep-G2细胞的增殖、迁移及OPN的表达产生抑制作用,并且作用效果同药物浓度及作用时间呈正相关。     

PPAR－γ激动剂对炎症状态下人系膜细胞LOX－1表达的影响

目的研究过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPAR－γ)激动剂15－脱氧前列腺素J₂(15d－PGJ₂)对炎症因子白细胞介素1β(IL－1β)作用下人肾小球系膜细胞(HMC)氧化低密度脂蛋白(Ox－LDL)植物血凝素样受体1(LOX－1)表达的影响。 方法激光共聚焦显微镜观察IL－1β对HMC脂质摄取的影响;实时定量PCR和Western印迹方法检测不同剂量的PPAR－γ激动剂15d－PGJ₂对IL－1β诱导的LOX－1表达的影响。 结果激光共聚焦显微镜检查发现5 ng/ml的IL－1β促进HMC摄取荧光标记的Ox－LDL;IL－1β能够促进HMC的LOX－1 mRNA和蛋白表达,15d－PGJ₂呈剂量依赖性抑制IL－1β诱导的LOX－1表达。与单纯IL－1β(5 ng/ml)刺激组相比,15d－PGJ₂浓度2.5、5、10 μmol/L处理组细胞LOX－1 mRNA表达分别下调为73.13%、66.54%、35.23%;15d－PGJ₂浓度5、10 μmol/L处理组细胞LOX－1蛋白表达分别下调为82.39%、63.17%。 结论炎症因子IL－1β促进HMC摄取Ox－LDL;PPAR－γ激动剂15d－PGJ₂剂量依赖性抑制IL－1β诱导的LOX－1 mRNA和蛋白表达,对炎症因子导致的系膜细胞脂质失衡可能具有保护作用。     

鞘氨醇激酶1表达下调对肿瘤Hela细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察鞘氨醇激酶1(SphK1)表达下调对肿瘤Hela细胞增殖和细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 将SphKl siRNA和对照siRNA转染肿瘤Hela细胞,转染后将细胞分为3组:未转染组、siRNA对照组和SphK1 siRNA组.应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot技术检测转染SphK1 siRNA后SphK1 mRNA和蛋白的表达.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术分别检测3组细胞增殖和细胞凋亡的变化.进一步利用Westem blot技术检测与细胞增殖和细胞凋亡密切相关蛋白的表达.结果 SphK1 siRNA组中SphK1 mRNA和蛋白的相对表达水平(分别为0.153±0.037和0.123±0.037),显著低于未转染组(分别为1.000±0.000和0.688±0.049)和siRNA对照组(分别为0.932±0.039和0.673±0.057)(P＜0.05).细胞增殖结果表明,与未转染组和siRNA对照组比较,SphK1 siRNA组中Hela细胞的增殖明显受到抑制(P＜0.05).流式细胞结果表明,SphK1 siRNA组中Hela细胞早期凋亡细胞数比率为(23.85±0.72)％,显著高于未转染组(11.67±1.02)％和siRNA对照组(11.85±0.71)％,差异有统计学意义(F=211.451,P＜0.05).Western blot检测结果表明,SphK1 siRNA组中p21、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3( Caspase-3)和Caspase-9蛋白的相对表达水平(分别为0.381±0.025、0.406±0.041和0.374±0.035),显著高于未转染组(分别为0.127±0.039、0.064±0.023和0.115±0.039)和siRNA对照组(分别为0.125±0.034、0.060±0.018和0.126±0.038)(P＜0.05).结论 SphK1可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的增殖抑制和细胞凋亡可能与p21、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的上调密切相关.     

肝癌转移机制的分子细胞遗传学研究

目的 探索肝癌转移的分子细胞遗传学机制。方法 应用比较基因组杂交技术（com-parative genomic hybridization,CGH)技术分析10对肝细胞癌原发癌及其转移癌灶的染色体变化。结果（1）肝癌中常见的染色体扩增包括1q(10/10)、8q(6/10)及5q(3/10),4例肝癌原发癌及6例转移灶中发现1q12-q22狭小区域的明显扩增。（2）常见的染色体缺失为4q(7/10)、1q(6/10)（且多局限于lpter-p35)、17q(5/10)、19q(4/10)、16q(4/10)及8p(3/10)。（3）转移癌灶中各染色体异常的比例略高于原发癌,但最有意义的发现是8例转移癌灶（8/10,80%）中存在8p的缺失,而原发癌中仅3例（3/10.30%）存在8p缺失（P=0.03),5例肝细胞癌在其获得转移表型时存在8p的缺失。（4）加一重要发现是在所有10对肝癌的原发癌及其转移癌灶中均存在1q的扩增,并在部分癌灶中发现小区域的明显扩增。结论 染色体8q的缺失可能与肝癌的转移特性有关,8q可能存在抑制肝癌转移的基因,1q12-q22可能存在与肝癌发生发展有关的癌基因。     

PET及MRI评价肿瘤乏氧及下游分子表达的进展

实体肿瘤生长导致局部组织缺氧微环境改变,缺氧诱导因子(HIFs)为其中最重要的调节因子。在乏氧情况下,受HIF-1α调控的下游靶基因主要有血管内皮细胞生长因子(VEGF)及葡萄糖转运体1(GLUT-1)基因等。近年来,随着多模态PET及MR成像在肿瘤诊断中的广泛应用,多项研究证实成像所得参数与肿瘤乏氧相关分子的表达存在相关性。本文对PET及多种功能MRI序列检测肿瘤内HIF-1α及其下游的靶基因VEGF及GLUT-1分子表达情况进行综述。     

下调星形细胞上调基因1表达对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨下调星形细胞上调基因1(AEG-1)对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的方法,将乳腺癌MCF-7细胞分别转染AEG-1siRNA(AEG-1siRNA)和阴性对照siRNA(阴性对照组),以无处理的MCF-7细胞为空白对照组。验证转染效果后,分别采用流式细胞术与Westernblot检测各组细胞的凋亡以及凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达。结果:与空白对照组细胞比较,AEG-1siRNA组MCF-7细胞AEG-1蛋白表达明显降低、细胞凋亡率明显升高、caspase-3和caspase-9蛋白表达明显上调(均P0.05);阴性对照组与空白对照组间以上各项指标均无统计学差异(均P0.05)。结论:下调乳腺癌细胞AEG-1的表达能促进caspase-3和caspase-9的表达,从而诱导乳腺癌细胞凋亡,因此,AEG-1在乳腺癌细胞中可能起了抑制细胞凋亡的作用,机制可能与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。     

Osteopontin RNAi对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响

目的 观察乳腺癌细胞MDA-MB-231 osteopontin (OPN) RNA靶向干扰效果.方法 采用OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立OPN基因沉默细胞株,采用RT-PCR、蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测乳腺癌细胞OPN表达量的变化,侵袭试验检测OPN下调对细胞侵袭能力的影响,MTT法测细胞增殖能力的改变,裸鼠成瘤后观察OPN RNA干扰对肿瘤细胞生长的影响及对移植瘤乏氧程度的影响.结果 与MDA-MB-231细胞相比,OPN沉默细胞在常氧和乏氧状态下OPN表达均显著下调(均P＜0.05),OPN稳定沉默细胞侵袭力和增殖能力下降(均P＜0.01),OPN RNAi能明显抑制裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05),且移植瘤内乏氧程度降低(P＜0.05).结论 OPN RNA干扰可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞侵袭力和增殖能力,降低移植瘤的乏氧程度.     

ANP对人胃癌细胞AGS增殖的影响及其机制

目的:探讨心房钠尿钛(ANP)对人胃癌AGS细胞增殖的影响及其分子机制。方法:Westernblot检测NPR-A在AGS细胞上的表达;BrdU细胞增殖检测试剂盒检测ANP对胃癌AGS细胞增殖的影响;cGMP检测试剂盒检测ANP对胃癌AGS细胞cGMP水平的影响;Westernblot、RT-QPCR法检测ANP作用AGS细胞后KCNQ1的表达。结果:Westernblot显示NPR-A在AGS细胞上有表达。BrdU细胞增殖检测结果显示高浓度ANP(10-7及10-6mol/L)抑制AGS细胞增殖(P0.05),而低浓度ANP(10-10及10-9mol/L)促进AGS细胞增殖(P0.05)。cGMP检测结果显示高浓度ANP通过非cGMP依赖的途径抑制AGS细胞增殖,而低浓度ANP通过cGMP依赖的途径促进AGS细胞增殖。Westernblot及RT-QPCR结果显示高浓度ANP通过下调KCNQ1表达来抑制胃癌AGS细胞增殖,而低浓度ANP通过上调KCNQ1表达来促进胃癌AGS细胞增殖。结论:NPR-A在胃癌AGS细胞上有表达,高浓度ANP通过非cGMP依赖的途径抑制AGS细胞增殖,而低浓度ANP通过cGMP依赖的途径促进AGS细胞增殖。胃癌AGS细胞上存在Kv为KCNQ1,高浓度ANP通过下调KCNQ1表达来抑制AGS细胞增殖,而低浓度ANP通过上调KCNQ1表达来促进AGS细胞增殖。     

人近端肾小管上皮细胞黏附分子CD146表达对细胞凋亡的影响

目的：探讨人近端肾小管上皮细胞（HK-2）黏附分子CD146表达与细胞凋亡的关系。方法：体外培养的HK-2N胞在不同浓度葡萄糖和不同浓度甘露醇刺激下分别作用24h、48h、72h，经流式细胞仪（FCM）检测各组HK-2细胞CD146的表达和凋亡率的变化。结果：正常糖浓度下HK2微弱表达CD146，且延长作用时间对表达无影响；随糖浓度升高，CD146表达上调，细胞凋亡率也增高，延长刺激时间可促进CD146表达和细胞凋亡（P〈0．05）；当糖浓度达到40mmol／L，刺激时间达到48h，CD,46表达显著升高（P〈0．05），HK-2细胞凋亡率也显著上升（P〈0．05）；甘露醇对HK-2细胞CD146表达和细胞凋亡的促进作用较葡萄糖的作用显著降低（P〈0．01）。结论：HK-2组成性表达CD146，高糖诱导CD146表达，甘露醇诱导作用较高糖弱；高糖诱导HK-2凋亡，其凋亡作用与CD146表达增高联系密切，提示黏附分子CD146对细胞生存有重要影响。     

表柔比星及RNAi对乳腺癌细胞系c-FLIP表达的影响

恶性肿瘤化疗失败的主要原因是耐药,化疗药物和死亡受体有着共同的诱导细胞凋亡的途径,并对凋亡表现出交叉抵抗[1].因此采用RNAi技术沉默癌基因的同时有可能抑制耐药相关基因表达.本研究探讨表柔比星及RNAi共同作用对乳腺癌细胞系c-FLIP表达的影响.     

Periostin在小细胞肺癌中的表达及其对化疗耐药性的影响

目的检测Periostin在人小细胞肺癌(SCLC)细胞株及临床组织标本中的表达差异,探究其对SCLC患者化疗耐药性的影响。方法通过检测Periostin m RNA及蛋白在人SCLC H69与H69AR中的表达差异,借助Periostin重组质粒转染上调H69细胞中Periostin的表达,比较转染后的H69细胞在不同浓度的化疗药物(顺铂,依托泊苷)中的存活率与空载对照组的差异。检测临床SCLC化疗敏感和耐药患者病理标本的Periostin免疫组织化学结果。结果 Periostin在H69AR内的m RNA表达水平显著高于H69(1.49±0.21 vs.0.81±0.11,P0.05),Periostin蛋白在H69AR内的表达水平显著高于H69(3.29±0.41 vs.1.34±0.20,P0.05)。Periostin重组质粒转染H69细胞后,在相同浓度的化疗药物(顺铂,依托泊苷)中存活率显著提高,处理主效应(P0.05)。临床SCLC组织标本中Periostin阳性表达率为67.44%,而且化疗敏感组低于耐药组(13/24 vs.16/19,χ~2=4.359,P=0.037)。结论 Periostin在SCLC细胞敏感株H69中的表达明显低于耐药株H69AR,Periostin在SCLC组织中过表达可增强化疗耐药性,还需进一步研究其机制。     

Yes相关蛋白在胃腺癌中的表达及其下调对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的 检测Yes相关蛋白(YAP)在人胃腺癌、胃腺瘤及正常胃黏膜组织中的表达,探讨YAP对胃癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测YAP在78例人胃腺癌、39例人胃腺瘤及46例正常人胃黏膜组织的表达.利用建立慢病毒小发夹RNA(shRNA)靶向YAP基因的胃癌SGC-7901细胞株,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白表达水平.噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell试验检测YAP下调对胃癌细胞增殖和转移的影响.结果 YAP在69.23％的胃腺癌组织中高表达,与正常胃黏膜(0.33 ±0.15)和胃腺瘤(0.42 ±0.20)比较,YAP mRNA在胃腺癌(1.74±0.46)的表达水平明显增高(P＜0.001).体外实验显示,YAP下调减少PCNA和MMP-2蛋白的表达,并抑制胃癌细胞增殖活性和转移能力.结论 YAP在人胃腺癌组织中高表达,并且YAP下调抑制胃癌细胞的增殖和转移.     

微环境乏氧上调胰腺癌细胞HIF-1α表达并诱导凋亡

目的 探讨CoCl2诱导缺氧对体外培养的胰腺癌PC-2细胞缺氧诱导因子-1(HIF-1α)表达变化及诱导凋亡作用.方法 以50、100、150、200μmol/L不同浓度CoCl2处理PC-2细胞模拟肿瘤体内乏氧模型,MTT法检测不同浓度、不同时间CoCl2处理后的PC-2细胞生长情况;透射电镜下观察乏氧微环境作用下的PC-2细胞超微结构的改变;免疫细胞化学和RT-PCR方法 检测乏氧微环境对PC-2细胞HIF-1α基因表达的影响;AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 不同浓度CoCl2对胰腺癌PC-2细胞生长曲线有不同程度的改变,对数生长期和平台期提前,对数期缩短.随着CoCl2浓度增加,曲线越趋于低平.透射电镜下可见线粒体肿胀,染色质边集等凋亡早期表现,少见凋亡小体.免疫细胞化学和RT-PCR结果 显示,化学缺氧剂COCl2模拟的乏氧微环境可引起胰腺癌PC-2细胞HIF-1α表达的上调;流式细胞仪检测结果 显示,正常对照组、100、150、200 μmol/L CoCl2不同浓度组PC-2细胞凋亡率分别为10.77%、34.32%、40.17%和52.30%.结论 CoCl2对胰腺癌PC-2细胞具有一定的凋亡诱导作用,同时也缩短了细胞正常的生长期,细胞形态发生相应改变,可能与上调HIF-1α的表达有关.     

血管生成素1在非小细胞肺癌中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨血管生成素1(ANGPT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法:收集40例NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织、NSCLC细胞系(A549、HCC827、H460和H1299)和人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)行研究检测。转染ANGPT1真核表达质粒至A549细胞(pc-A...     

AngⅡ对肾小球足细胞nephrin表达的影响及其机制

Nephrin是特异表达于肾小球足细胞及裂孔膜上的结构和功能蛋白,Nephrin的正常表达与定位对于维持肾小球持滤过屏障结构和功能的完整性、防止蛋白尿的发生具有重要作用。AngⅡ在肾脏局部水平的升高可以影响Nephrin的表达,破坏足细胞的正常结构和功能,并导致蛋白尿的产生。