TLR4信号通路与炎性反应

Toll样受体(TLR)是一类天然免疫受体,最早发现其与果蝇胚胎背、腹侧的发育有关。随着研究的深入,哺乳动物体内也发现有类似同源性受体,并统一称TLR家族。TLR的分布十分广泛,可以识别某些病原体或其产物所共有的特定结构。TLR4是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,而TLR4/CD14信号通路是介导内毒素诱导的炎性反应的重要通路。营养性肥胖、动脉粥样硬化、心肌梗死、哮喘等所引起的非细菌性炎性反应也与TLR4相关。本文就TLR4信号通路与炎性反应的研究进展进行综述。     

脂多糖致感染性脑水肿大鼠脑组织TLR4 mRNA表达的变化

目的:观察脂多糖(LPS)致感染性脑水肿模型大鼠脑组织中TLR4 mRNA表达的动态变化,探讨TLR4在感染性脑水肿中的作用.方法:1月龄SD大鼠25只,随机分为2组.对照组(5只)颈内动脉注射0.1 mL生理盐水,颈外静脉注射伊文思蓝(EB),6 h后断头处死;LPS组(20只)颈内动脉注射100 μg LPS,颈外静脉注射EB,分别于注射6、12、24、48 h后各取5只大鼠断头处死.取脑,用干湿重法测定脑组织含水量,甲酰胺法测定EB含量,RT-PCR 法检测脑组织TLR4 mRNA的表达量.结果:LPS注射后大鼠大脑血管周围间隙增宽,炎性细胞浸润;胶质细胞肿胀,神经元周隙增宽.对照组无上述水肿表现.LPS注射6 h后大鼠脑组织含水量、EB含量升高,TLR4 mRNA表达降低;12 h时脑组织含水量、EB含量升高达峰值,24 h、48 h时逐渐降低至正常水平;注射LPS 12 h后,脑组织TLR4 mRNA表达量降至最低,24 h和48 h时逐渐恢复.大鼠脑组织EB含量、含水量与TLR4 mRNA表达量均呈负相关(r分别为-0.604,-0.535,P均<0.05).结论:TLR4在脑水肿发展过程中可能有特殊的保护作用.     

脂多糖对正常人肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-кB通路的影响

目的：探讨脂多糖( LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞( HiBECs)中TLR4-NF-кB通路的影响。方法 HiBECs常规细胞培养后,加入不同浓度的LPS(0．1、1、4、8、10μg/mL),刺激不同时间(3、6、9、12、24 h),用Realtime RT-PCR分析细胞内TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果 LPS刺激HiBECs后TLR4和NF-κB mRNA表达水平均增加,HiBECs在受到LPS(4μg/mL)刺激后TLR4和NF-κB mRNA表达水平随时间延长而增加,于6小时达高峰,之后下降。以相同时间(6 h)刺激HiBECs后,TLR4和NF-κB mRNA表达水平随LPS浓度增高而增加,LPS浓度为4μg/mL时达高峰,之后下降。结论 LPS可以激活HiBECs中的TLR4-NF-кB通路,并且有时效和量效依赖关系。     

TLR4 mAb对人正常肝内胆管上皮细胞LPS-TLR4-NF-κB通路的影响

目的对脂多糖( LPS)及Toll样受体4单克隆抗体( TLR4 mAb)作用于体外培养的人肝内胆管细胞( HiBEC)后其TLR4 mRNA和核转录因子-κB( NF-κB) mRNA的表达情况进行了研究。方法体外培养HiBEC,采用 RT-PCR 法检测经LPS和不同浓度的TLR4 mAb作用后,HiBEC细胞株中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达情况。结果 LPS可以上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达( P<0．05);而 LPS 作用于 TLR4 mAb 处理后的 HiBEC 中其TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达下调;高质量浓度TLR4 mAb使NF-κB mRNA的表达下调更明显( P<0．05)。结论LPS 能上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达;而 TLR4 mAb 则能拮抗 LPS 对 HiBEC 的刺激作用,下调TLR4 mRNA和NF-κB mRNA 的表达。     

吸入不同浓度NO对脂多糖所致大鼠急性肺损伤TLR4表达的影响

目的 观察正常大鼠气道Toll样受体4(TLR4)的分布及脂多糖(LPS)对大鼠气道TLR4分布的影响,以及吸入不同浓度NO对TLR4表达的影响.方法 气管内滴注LPS复制大鼠急性肺损伤模型,观察6 h后的病理变化,免疫组化法观察气道内TLR4的变化,以及分别吸入10×10-6,20×10-6,40×10-6, 100×10-6mg/L的NO对大鼠气道内TLR4 mRNA表达的影响.结果 免疫组化和实时荧光定量PCR结果显示TLR4在正常组大鼠气道内有广泛分布和表达.LPS急性肺损伤组大鼠病理检查显示支气管、肺内炎症程度均明显高于正常组,免疫组化及荧光定量PCR结果显示主支气管和肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达明显升高.NO 20×10-6mg/L组病理检查结果显示气管和主支气管的炎症程度明显减轻,免疫组化及荧光定量PCR结果提示肺内细支气管上皮细胞内TLR4的表达量较LPS损伤组明显降低.结论 TLR4在大鼠气道内广泛分布,LPS刺激可使TLR4的表达增加,吸入适当浓度NO可降低由LPS引起的肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达的升高.     

基于LPS/TLR4信号通路探讨酒精性肝病进展的相关机制

目的 关于酒精性肝病(ALD)进展的关键靶点研究具有重要意义.文中基于脂多糖(LPS)/Toll样受体4(TLR4)信号通路,探讨ALD大鼠进展的相关机制.方法 将大鼠给予乙醇12周建立ALD大鼠模型,80只大鼠随机分为ALD组(ALD模型)、LPS阻断组(ALD模型,MP12静脉注射)、TLR4阻断组(ALD模型,N...     

相思藤醇提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的作用研究

目的:研究相思藤醇提物对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用.方法:取SD大鼠,灌胃给予50％CCl4花生油溶液(1mL/kg)复制肝纤维化模型.将肝纤维化大鼠随机分为模型组、阳性组(秋水仙碱)及相思藤醇提物高、中、低剂量组,每组10只,另设正常组大鼠10只.各给药组灌胃给予相应药物治疗40 d.正常组、模...     

高糖环境对肝星状细胞TLR4表达及脂多糖诱导的炎症因子表达的影响

目的研究高糖环境对肝星状细胞Toll样受体4(TLR4)表达及脂多糖（LPS）诱导的炎症因子表达的影响。方法体外培养
大鼠肝星状细胞株HSC-T6,采用高糖刺激,Western blot及RT-PCR检测细胞TLR4蛋白及mRNA表达;低糖或高糖培养基预处
理肝星状细胞24 h 后采用LPS（100 ng/ml）刺激,2 h 后Western blot 检测NF-κB核转位,24 h 后RT-PCR 检测MCP-1 和IL-6
mRNA表达,ELISA检测细胞上清两种炎症因子的浓度。结果高糖环境可上调肝星状细胞TLR4 蛋白及mRNA表达（均为P<
0.01）,且呈明显的时效-量效关系。高糖可促进肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）,并促进MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<
0.01）。高糖预处理可增强LPS诱导的肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）、MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<0.01）。结论高
糖可上调肝星状细胞TLR4的表达,并可促进脂多糖激活NF-κB而增加炎症因子表达及分泌。
     

阿托伐他汀对老年脑梗死病人TLR4信号通路及认知功能的影响

目的探讨老年脑梗死合并认知功能障碍病人Toll样受体4（TLR4）信号通路的变化,以及阿托伐他汀在调节该通路中的作用及对认知功能的影响。方法选择老年脑梗死合并认知功能障碍病人98例,随机分为观察组和对照组,各49例。对照组在常规治疗基础上,应用阿司匹林肠溶片治疗,观察组在常规治疗基础上采用阿司匹林肠溶片联合阿托伐他汀治疗,分别于治疗前及治疗后6个月比较2组病人认知功能状况、血清氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、TLR4和核转录因子（NF）-κB、肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6的表达情况以及不良反应发生情况。结果治疗后,2组TC、TG、LDL-C、HDL-C、ox-LDL、hs-CRP、TGF-β1、TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-6与治疗前比较差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）;且观察组TC、TG、LDL-C、ox-LDL、hs-CRP、TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-6低于对照组,HDL-C、TGF-β1高于对照组（P < 0.01）。治疗后,2组MMSE、MoCA评分均较治疗前提高,且观察组高于对照组（P < 0.01）。2组病人不良反应:肝肾功能异常、头晕头痛、皮疹、肌痛、胃肠道反应的发生率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论TLR4信号通路参与了老年脑梗死合并认知功能障碍的发生过程,阿托伐他汀治疗可通过调节TLR4信号通路对其发挥脑保护作用。     

福辛普利拉对脂多糖诱导的单核细胞TLR4表达的抑制作用

目的 研究福辛普利拉（Fos）对人白血病单核细胞系THP1 Toll样受体4（TLR4）表达的抑制作用.方法 培养THP1细胞,并将其浓度调整为1×10~＋/mL,分为8组：对照组（正常THP1细胞）、脂多糖（LPS）刺激组（THP1细胞＋LPS）、DMSO组（THP1细胞＋LPS＋DMSO）及Fos干预组（THP1细胞＋LPS＋Fos,Fos质量浓度分别为0.25、0.5、1、5、10 μmol/L）.分别采用Real-time PCR法检测THP1细胞TLR4 mRNA的表达;Western blotting检测TLR4和NF-kB蛋白的表达;流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达.结景LPS刺激组THP1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达均高于对照组（P〈0.05）;Fos干预组TLR4 mRNA和蛋白的表达均低于LPS刺激组,其中1、0.5 p.mol/L的Fos作用最明显.LPS刺激组NF-kB蛋白表达明显高于各Fos干预组（P〈0.05）.结论 Fos能有效下调LPS诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制NF-kB的活性.     

何首乌肝损伤的研究进展

近年国内外关于口服何首乌及其成方制剂导致的肝损伤问题报道日益增多,本文主要对何首乌炮制工艺、可能性毒性成分及其肝损伤的转化研究方面进行综述,并对何首乌相关性肝损伤的进一步研究提出建议。     

何首乌肝损伤的研究进展

近年国内外关于口服何首乌及其成方制剂导致的肝损伤问题报道日益增多,本文主要对何首乌炮制工艺、可能性毒性成分及其肝损伤的转化研究方面进行综述,并对何首乌相关性肝损伤的进一步研究提出建议。     

何首乌3种组分的提取及其清除DPPH自由基作用的研究

目的分离何首乌二苯乙烯苷、蒽醌、多糖3种组分,比较它们清除DPPH自由基的能力,揭示何首乌抗氧化可能的物质基础。方法采用溶剂萃取和柱层析分离提取何首乌二苯乙烯苷、蒽醌、多糖3种组分,并通过DPPH自由基清除试验,比较各组分清除自由基的能力。结果何首乌二苯乙烯苷组分清除DPPH自由基的IC50为1.42 mg/mL（以生药计,下同）;何首乌蒽醌组分清除DPPH自由基的IC50为2.67 mg/mL,何首乌多糖组分清除DPPH自由基的IC50为360 mg/mL。结论二苯乙烯苷和蒽醌是何首乌清除DPPH自由基的主要组分;何首乌多糖体外清除DPPH自由基的作用较弱。     

针刺负调控TLR4/TRIF信号通路关键因子对脑出血大鼠炎性反应表达的影响

目的探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠TLR4/TRIF信号通路关键因子Toll样受体4(TLR4)、TRIF(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-βTRIF)、TRAM(TRIF-related Adaptor Molecule,TRAM)、NF-κB(核因子κB)表达的影响。方法将72只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(简称针刺组)、TAK242组,每组按1 d、3 d、7 d时间节点分为3个亚组,每组6只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴干预,Longa评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;Western-blot法检测血肿组织TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达。结果神经行为学:与模型组比较,针刺组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05);TAK242组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.01);与针刺组比较,TAK242组于3 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05)。Western-blot结果:针刺组、TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0.01);TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于针刺组(P<0.01)。结论针刺可能通过负调控TLR4/TRIF信号通路中TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白的表达,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损症状,发挥脑保护作用。     

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的：探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL^-1)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法：体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^-1乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞...     

脂多糖对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4表达及细胞内活性氧产生的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及细胞内活性氧(ROS)产生的作用。方法:收集健康志愿者外周血标本和结核病患者外周血标本,各13例;取二者肝素抗凝血100μL,荧光探针DHR123或抗人anti-TLR4-PE荧光素标记抗体,全血染色后,流式细胞仪技术检测分析二者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平;再取二者抗凝血100μL于96孔培养板中,按如下分组进行处理:健康志愿者抗凝血为A组,结核病患者抗凝血为B组,结核病患者抗凝血+LPS 100 ng/mL为C组,每组6孔,培养24 h后,流式细胞仪技术检测单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。结果:结核病患者外周血单核细胞TLR4阳性表达率为(17.6±3.6)%,较健康志愿者的(30.0±2.4)%显著降低(P<0.01);结核病患者外周血单核细胞细胞内ROS水平(74.8±11.4)较健康志愿者(109.6±13.2)显著降低(P<0.01)。LPS刺激24 h后,C组单核细胞胞内ROS水平(182.1±11.3)与B组(127.6±14.1)相比差异有统计学意义(P<0.01);C组单核细胞TLR4阳性表达率为(62.1±3.3)%,与B组的(47.6±4.7)%差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LPS可促进结核病患者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。     

LPS-TLR4信号通路在慢性酒精摄入大鼠模型肝纤维化发生中的作用及其机制

目的: 通过检测慢性酒精摄入大鼠门静脉血中内毒素脂多糖(LPS)水平,探讨LPS-Toll样受体4(TLR4)通路在慢性酒精摄入大鼠模型肝纤维化发生中的作用及意义。方法: 24只雄性SD大鼠随机分为酒精组和对照组,分别喂养等热量的Lieber-Decarli酒精饲料和对照饲料,10周后采集大鼠门静脉血,留取肝组织标本。采用HE染色和Masson染色评估肝脏的组织学特点,分光光度法检测大鼠门静脉血浆内LPS水平,免疫组织化学法检测肝组织纤维母细胞特异蛋白1(FSP-1)和波形蛋白(vimentin)以识别肝星状细胞(HSCs),原位杂交方法检测肝组织中TLR4 mRNA表达水平。应用计算机图像分析系统检测FSP-1阳性HSCs和TLR4 mRNA阳性细胞的积分光密度值(IA)。采用RT-PCR法检测肝组织中白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达水平。结果: 与对照组比较,酒精摄入10周末酒精组大鼠肝脏出现中央静脉周围及肝血窦周边纤维化,肝脏TLR4 mRNA表达水平及FSP-1阳性激活HSC均有明显增加(P<0.01),大鼠门静脉血浆LPS水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,酒精组大鼠肝脏致炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。 Bivariate相关分析,10周末酒精组大鼠肝脏TLR4 mRNA表达水平与门静脉血浆LPS水平呈正相关关系(r=0.856,P<0.05)。结论: 慢性酒精摄入可引起大鼠肝脏TLR4信号通路活化,通过释放致炎因子和纤维源性因子在肝纤维化发病过程发挥重要的作用。     

老鼠簕对四氯化碳致肝纤维化大鼠Toll样受体4表达的影响

目的研究老鼠簕对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组。除空白对照组外,其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组分别于4周后给予相应的药物,空白对照组和模型对照组给予等容量的生理盐水,每日1次。8周后处死大鼠。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TLR4 mRNA的表达。结果 RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,模型对照组TLR4 mRNA表达增强(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0、2.0 g.kg-1)较模型对照组TLR4 mRNA表达减弱(P<0.05)。结论老鼠簕能够抑制肝纤维化大鼠肝组织TLR4的表达。     

降钙素基因相关肽对脂多糖诱导血管平滑肌细胞TLR4/NK-资B及炎症因子表达的影响

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对脂多糖（LPS）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）TLR4/NK-kB 及炎症因子表达的影响。方法贴壁法培养VSMCs,根据不同的处理方案,分为对照组、LPS 处理组、CGRP组、（LPS+CGRP）组及（LPS+CGRP+C8-37）组;ELISA 检测不同组VSMCs 中白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α ）和基因表达水平,免疫印迹法（Western blot）检测不同组VSMCs 中Toll 样受体4（TLR4）、I资Ba及p65蛋白表达水平。结果①LPS处理VSMCs后,随着LPS浓度的升高,IL-1β和TNF-α表达水平成梯度增加,并于1 000 ng/ml 时分泌水平最高（p <0.05）,在8 h时达到峰值（ p<0.05）;②CGRP 剂量依赖性降低LPS 诱导IL-1β和TNF-α的表达（p <0.05）,并于100 nmol/L 时达到低峰点（p <0.05）;③CGRP能抑制LPS 诱导的细胞TLR4 蛋白的积累（p <0.05）,抑制IkBa 与p65 蛋白的磷酸化水平（p <0.05）;④CGRP阻断剂C8-37可以逆转CGRP对LPS刺激的VSMCs中IL-1β和TNF-α表达（p <0.05）,拮抗CGRP对TLR4和NK-kB 的抑制（p <0.05）。结论CGRP 通过抑制TLR4 蛋白的积累,阻断NF-κB 信号蛋白IkBa 与p65的磷酸化,进而削弱LPS 诱导的细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的激活,抑制LPS 诱导的VSMCs 炎症的激活。     

心理应激对大鼠氧化应激的影响及TLR4的作用

目的 观察心理应激对大鼠氧化应激和炎症反应的影响,探讨心理应激在动脉粥样硬化病变形成中的作用、机制.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NC)、无应激组(NS)、生理应激组(PS)和心理应激组(ES),每组各10只,并制作心理应激模型.于末次应激结束后采集血标本,检测血清SOD活力和MDA含量、放免法测定血清TNF-α水平; HE染色观察大鼠主动脉形态学变化；免疫组化法测定主动脉TLR4表达.结果 (1)血清学指标显示ES组大鼠较其他三组出现了明显的氧化应激损伤(血清SOD活力明显下降而MDA含量明显升高,均P＜0.05)和炎症反应(血清TNF-α升高,P.＜0.05)；同时HE染色发现ES组大鼠主动脉出现早期动脉粥样硬化性改变；(2)ES组大鼠主动脉TLR4表达较其他三组明显上调(P＜0.05).结论 氧化应激有可能在AS形成的早期,通过激活TLR4释放TNF-α等炎性因子促进血管壁的炎症反应,进而导致AS形成.