miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的探讨miR-375靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法选择对数生长期的人子宫内膜癌Ishikawa细胞,随机分为5组,模拟剂组转染miR-375模拟剂,模拟剂NC组转染miR-375模拟剂NC,抑制剂组转染miR-375抑制剂,抑制剂NC组miR-375抑制剂NC,对照组为未转染的Ishikawa细胞。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测Ishikawa细胞增殖及凋亡情况;利用Western blot技术检测IGF-1表达水平。结果转染后48 h与96 h,模拟剂组比模拟剂NC组细胞的增殖能力下降,抑制剂组比抑制剂NC组细胞的增殖能力增强(P0.05)。转染48 h后,模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,miR-375 NC组显著低于模拟剂组,抑制剂NC组显著高于抑制剂组(P0.05)。转染48 h后,IGF-1蛋白在模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,miR-375 NC组显著高于模拟剂组,抑制剂NC组显著低于抑制剂组(P0.05)。结论过表达的miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。     

胃癌组织中miR-1258的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制研究

目的研究胃癌组织中微小RNA-1258(miR-1258)的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制。方法采用回顾性研究,收集108例胃癌组织标本及其对应的癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR对miR-1258在两组中的表达水平进行检测。采集胃癌细胞,将其分为空白对照组(未转染的SGC-7901细胞)、阴性对照组(转移阴性miRNA模拟物)及实验组(转染miR-1258模拟物)。采用MTT实验检测miR-1258对三组细胞增殖能力的影响,并通过Transwell小室实验检测miR-1258对三组细胞侵袭能力的影响;建立裸鼠胃癌肺转移的动物模型,分析miR-1258对三组细胞转移能力的调节机制。结果相比癌旁正常组织,miR-1258低表达于胃癌组织(P 0. 01)。空白对照组细胞增殖能力明显升高,其次为阴性对照组,而实验组细胞增殖能力明显减缓(P 0. 05)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组SGC-7901细胞侵袭能力明显下降(P 0. 01)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组小鼠肺部转移癌灶数量明显减少(P 0. 01)。结论 miR-1258低表达于胃癌组织,促使miR-1258高表达具有阻滞胃癌细胞侵袭和转移的作用,提示其可能具有肿瘤抑制剂的作用,有望成为胃癌的新型肿瘤标志物,在临床治疗中可作为潜在靶点,具有重要的临床意义。     

miR-148a 抑制胃癌MGC803细胞的生长研究

目的 观察miR-148a 对胃癌MGC803 细胞生长和细胞周期的影响.方法 实时定量PCR 检测miR-148a 在胃癌细胞中的表达.MGC803 细胞转染miR-148a 后,MTT 分析、生长曲线、集落生成实验观察BGC823 细胞的生长情况,同时进行细胞周期测定.结果 miR-148a 在胃癌MGC803 细胞中低表达.MGC803 细胞在转染miR-148a 后,生长明显受到抑制,细胞周期在G1 期发生阻滞,转染miR-148 组G1 期比率(71.52% ±3.43%)较对照组(47.46% ±3.12%)明显升高,P ＜0.01.结论 miR-148a 能够影响细胞周期,从而抑制胃癌MGC803 细胞的生长.     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

MicroRNA-3963促进小鼠间充质干细胞成脂分化

目的:探讨MicroRNA-3963调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)的成脂分化能力。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,将miR-3963mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染MSC细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-3963的表达量及转染效率,并于转染后进行成脂诱导分化培养14 d后应用油红染色检测脂滴形成情况,应用q-PCR和Western blot方法从转录水平和蛋白水平检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达。结果:q-PCR检测结果表明,转染miR-3963 mimic可显著上调miR-3963表达(P0.001),而转染miR-3963inhibitor可显著下调miR-3963表达(P0.001)。油红染色结果表明,过表达的或敲减miR-3963表达的M SC进行成脂诱导分化培养14 d后,转染miR-3963 mimic可明显促进MSC的脂滴形成。q-PCR和Western blot检测结果显示,转染miR-3963 mimic可显著促进成脂基因C/EBPα和PPARγ的表达;而转染miR-3963 inhibitor则其成脂分化能力较对照组显著降低。结论:miR-3963可调控小鼠骨实质来源的MSC的成脂分化能力,且可促进小鼠MSC的成脂分化。     

MicroRNA-146b-5p对小鼠骨片来源的间充质干细胞成脂分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146b-5p(miR-146b-5p)对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,应用q-PCR检测成脂诱导过程中miR-146b-5p表达量的变化。将miR-146b-5p mimic或inhibitor及其阴性对照转染细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-146b-5p的表达量及转染效率;并于转染培养14 d后进行油红染色,应用q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达量,Western blot检测PPARγ的表达量。结果:成功分离出小鼠骨片来源的MSC,miR-146b-5p在成脂诱导过程中随诱导天数的增加呈现上升趋势。转染miR-146b-5p mimic可上调miR-146b-5p表达(P0.001),而转染miR-146b-5p inhibitor可显著下调miR-146b-5p表达(P0.01)。培养14 d后油红染色结果表明,转染miR-146b-5p inhibitor可以抑制成脂分化,而转染miR-146b-5p mimic可促进成脂分化。诱导14 d后,与对照组相比,mimic组高表达PPARγ、C/EBPα(P0.01);与诱导组相比,inhibitor组低表达PPARγ、C/EBPα(P0.05)。mimic组PPARγ的表达量升高,而Inhibitor组则相反。结论:miR-146b-5p在小鼠MSC成脂肪分化过程中高表达,并可促进小鼠骨片来源的MSC向脂肪细胞分化。     

长链非编码RNA HOTAIR靶向调控miR-206对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA HOTAIR对人胃腺癌细胞(AGS)增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测正常胃上皮细胞(GES-1)与胃癌AGS细胞中HOTAIR的表达水平,以及si-RNA HOTAIR(si-HOTAIR)转染胃癌AGS细胞后HOTAIR及微小RNA-206(miR-206)的表达水平。生物信息学预测HOTAIR与miR-206的结合位点,荧光素酶报告实验验证二者靶向关系。将细胞分为对照组、si-HOTAIR组、si-HOTAIR+miR-206抑制剂组,采用CCK-8、平板克隆形成实验检测各组细胞的活性和增殖能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平,免疫印迹实验检测相关抗凋亡蛋白CDK9的表达水平。结果与正常人胃黏膜上皮GES-1细胞相比,AGS细胞中HOTAIR的表达量显著增高(P 0. 001),miR-206的表达水平显著降低(P 0. 01)。转染si-HOTAIR的AGS细胞中HOTAIR表达量显著降低(P 0. 01),miR-206表达水平显著增高(P 0. 01)。实验结果显示,miR-206模拟物(miR-206 mimics)能显著降低野生型HOTAIR质粒的荧光素酶活性(P 0. 01)。与对照组相比,si-HOTAIR组细胞增殖能力显著降低,凋亡能力显著提高(P 0. 001);与si-HOTAIR组相比,si-HOTAIR+miR-206抑制剂组细胞增殖能力显著增高,凋亡能力显著降低(P 0. 01)。实验结果显示,si-HOTAIR能显著降低CDK9的蛋白水平表达,miR-206抑制剂能显著减弱si-HOTAIR对CDK9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向调控miR-206促进胃癌细胞的增殖,抑制胃癌细胞的凋亡。     

miR-100对大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的:探讨MicroRNA-100(miR-100)对大鼠骨髓间充质干细胞(r BMMSC)迁移能力的影响。方法:分离培养r BMMSC,采用流式细胞术检测r BMMSC表面标志物CD105、CD45、CD34、CD29和CD44的表达。用miR-100类似物或抑制剂转染r BMMSC,应用实时定量PCR检测转染后细胞miR-100表达量。迁移实验测定转染后细胞迁移能力,观察miR-100对细胞迁移能力的影响。ELISA法定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平。结果:经鉴定所分离的细胞确定为r BMMSC。用miR-100类似物或抑制剂转染r BMMSC后,与对照组相比,转染miR-100类似物的细胞miR-100表达显著上调(P<0.01),转染miR-100抑制剂的细胞miR-100表达显著下调(P<0.01)。在迁移实验中,转染miR-100类似物可显著抑制r BMMSC迁移(P<0.01),而转染miR-100抑制剂可显著增强r BMMSC迁移(P<0.01)。转染miR-100类似物组、转染miR-100抑制剂组的培养上清中,SDF-1浓度与对照组相比未见明显变化(P>0.05)。结论:miR-100可显著抑制r BMMSC的迁移,但与趋化因子SDF-1无明显关系。     

血清miR-126和miR-1323水平与食管癌关系及诊断价值

目的探讨血清miR-126和miR-1323在食管癌发生、发展中的作用及其对食管癌的诊断价值。方法食管癌患者87例为食管癌组,食管良性病变患者87例为食管良性病变组,体检健康者45例为健康对照组,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-126和miR-1323相对表达量;观察食管癌患者血清miR-126和miR-1323相对表达量与临床病理指标的关系;绘制ROC曲线,评估血清miR-126和miR-1323相对表达量诊断食管癌的效能;将对数生长期人食管癌EC9706细胞分为正常培养组、miR-126模拟剂组、miR-126抑制剂组、miR-1323模拟剂组和miR-1323抑制剂组,正常培养组细胞正常培养,miR-126模拟剂组、miR-126抑制剂组、miR-1323模拟剂组和miR-1323抑制剂组分别转染miR-126模拟剂、miR-126抑制剂、miR-1323模拟剂和miR-1323抑制剂。转染后24、48、72 h时,采用CCK-8法检测5组细胞增殖率;转染后72 h采用Transwell小室试验检测迁移细胞数。结果食管癌组血清miR-126相对表达量(0.92±0.35)低于食管良性病变组(1.52±0.48)和健康对照组(1.76±0.52),食管良性病变组低于健康对照组(P0.05);食管癌组血清miR-1323相对表达量(3.74±0.98)高于食管良性病变组(2.14±0.87)和健康对照组(1.63±0.64),食管良性病变组高于健康对照组(P0.05)。血清miR-126、miR-1323相对表达量的最佳截断值分别为1.16、2.78时,诊断食管癌的AUC分别为0.836(95%CI:0.773～0.888,P0.001)、0.883(95%CI:0.826～0.927,P0.001),灵敏度分别为75.9%、83.9%,特异度分别为80.5%、81.6%;二者联合检测诊断食管癌的AUC(0.974)高于miR-126和miR-1323单独检测(P0.05)。食管癌组血清miR-126和miR-1323相对表达量在性别、年龄、肿瘤部位和病理类型上差异无统计学意义(P0.05),在临床分期、肿瘤直径、分化程度和淋巴结转移上差异有统计学意义(P0.05)。miR-126模拟剂组和miR-1323抑制剂组转染72 h时迁移细胞数和转染48、72 h时细胞增殖率小于正常培养组(P0.05);miR-126抑制剂组和miR-1323模拟剂组转染72 h时迁移细胞数和转染48、72 h时细胞增殖率大于正常培养组(P0.05)。miR-126模拟剂组和miR-1323抑制剂组转染72 h时迁移细胞数和转染48、72 h时细胞增殖率小于miR-1323模拟剂组和miR-126抑制剂组(P0.05),miR-126模拟剂组与miR-1323抑制剂组、miR-126抑制剂组与miR-1323模拟剂组比较差异均无统计学意义(P0.05);5组细胞转染72 h时细胞增殖率高于转染24、48 h时(P0.05),转染48 h时高于转染后24 h时(P0.05),5组细胞增殖率均随转染时间延长而增高。结论 miR-126和miR-1323参与了食管癌的发生、发展过程,联合诊断食管癌具有较高的诊断效能,其表达水平可预测食管癌的临床分期及预后,对临床食管癌放、化疗方案的选择有一定价值。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

微RNA-449a在胃癌中的表达及其功能研究

目的探讨微RNA（miRNA）－449a在胃癌中的表达及其功能。方法采用逆转录荧光定量聚合酶链式反应PCR）检测miRNA-449a在胃癌组织和配对的正常组织中的表达,分析miRNA-449a与临床病理参数之间的关系。并将miRNA-449a模拟物转染胃癌细胞后进行细胞增殖分析。结果74．63％的癌组织中miRNA-449a表达下降．miRNA-449a在胃癌组织中的表达明显低于配对正常组织,差异有统计学意义（t=2．04,P〈0．05）。miRNA-449a表达在胃癌的肿瘤大小和胃癌临床分期（TNM）各组间均存在明显差异,差异有统计学意义（X2分别=9．69、9．41,P均〈0．05）,而miRNA-449a表达在不同性别和年龄之间的差异均无统计学意义（X2分别=0．04、0．01,P均〉0．05）。与阴性对照比较．miRNA-449a模拟物明显抑制胃癌细胞的增殖,差异有统计学意义（t=2t．67,P〈0．05）。结论miRNA—449a在胃癌组织中呈低表达,抑制胃癌细胞增殖,可能发挥抑癌基因的作用。     

miR-212在老年前列腺癌患者中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭、转移的影响机制研究

目的探讨miR-212在老年前列腺癌患者中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭、转移的影响机制。方法选择2017年10月至2019年10月于厦门市第五医院行手术确诊的前列腺癌患者60例,经病理档案室收集其癌组织标本及配对癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR检测前列腺组织miR-212的相对表达水平。将购自上海北诺生物科技有限公司的前列腺癌PC-3细胞24株随机分为空白组(不作任何处理)、对照组(转染空白miR-212对照)、miR-212组(转染miR-212 mimics),每组各8株;检测并比较3组转染后前列腺癌细胞增殖率、侵袭能力和转移率;采用荧光素酶报告实验验证miR-212下游靶基因。结果miR-212在前列腺癌组织中呈低表达,在癌旁正常组织中呈高表达,前列腺癌组织中的miR-212相对表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05)。转染miR-212后,PC-3细胞增殖、侵袭、转移均受到抑制。miR-212组PC-3细胞增殖率、侵袭能力、转移率低于对照组、空白组(P<0.05);空白组和对照组比较,PC-3细胞增殖率、侵袭能力、转移率差异无统计学意义(P>0.05)。miR-212组与上皮-间质转化(EMT)-WT(野生型)共转染后细胞荧光活性显著低于对照组与EMT-WT共转染后细胞荧光活性(P<0.05);空白组与对照组比较,与EMT-WT共转染后细胞荧光活性差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、对照组、miR-212组与EMT-MUT(突变型)共转染后细胞荧光活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-212在前列腺癌组织中呈低表达,上调miR-212的相对表达水平可抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭、转移能力,其作用与EMT密切相关。     

MiR-101在乳腺癌中的表达及其意义

目的:探讨miR-101在乳腺癌组织中的表达变化。方法:收集乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以qRT-PCR方法测定miR-101在乳腺癌组织中的表达变化。在乳腺癌细胞中转染miR-101 mimics、mimics control,以qRT-PCR方法检测上调效果,MTT方法测定细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭数目变化,蛋白质印迹法测定细胞中cleaved caspase-3和MMP-2蛋白表达变化。结果:miR-101在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05)。与miR-NC比较,miR-101细胞中miR-101表达水平升高,细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移数目下降,细胞内的cleaved caspase-3蛋白水平表达升高,MMP-2蛋白表达水平减少(P<0.05)。结论:MiR-101在乳腺癌组织中表达下调,上调miR-101抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞凋亡。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的　探讨下调微小核糖核酸（ miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法　实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测 miR-572,第 10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因 (phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶 2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（ HGC-27, AGS和 SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞 GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株 AGS细胞中加入 miR-572 inhibitor后, CCK8检测细胞活力; Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例; qPCR检测 miR-572, PTEN和 AKT2的表达量。结果　miR-572和 AKT2在胃癌细胞系 HGC-27（6.97±1.62,4.98±1.34）,AGS（7.21±1.32, 5.39±1.14）和 SGC-7901（5.97±1.44,4.02±1.02）中较正常胃黏膜上皮细胞 GES-1表达升高（ 1.00±0.24,1.00±0.21）, PTEN表达降低（ 0.49±0.16,0.39±0.11,0.54±0.33 vs 1.00±0.13）,差异均有统计学意义 (t=2.727~3.197,均 P＜ 0.05);与对照组比较,转染 miR-572 inhibitor后,miR-572和 AKT2在 AGS中表达下调 (P＜ 0.05),PTEN表达上调 (P＜ 0.05); CCK8实验结果显示转染 miR-572 inhibitor后,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞活力降低 (P＜ 0.05);Transwell实验发现,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞的侵袭和迁移能力降低 (P＜ 0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组相比 miR-572抑制剂组细胞的凋亡比例降低 (P＜ 0.05)。结论　下调 miR-572可抑制胃癌细胞的凋亡、侵袭和迁移,其机制可能是通过 PTEN/AKT2信号通路。     

microRNA-138通过靶向作用于CCND1抑制结肠癌细胞增殖

目的探讨人结肠癌细胞SW620中细胞周期蛋白1(CCND1)的表达情况及其异常表达对细胞增殖的影响,阐述microRNA-138(miR-138)在SW620增殖中的可能机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)以及Western blot确定结肠癌组织和癌旁组织中CCND1的表达情况;随后采用qT-PCR检测结肠癌组织内miR-138的表达,并通过统计学分析miR-138与CCND1表达的相关性,培养SW620细胞并转染miR-138模拟物(mimics)后验证miR-138与CCND1的相关性,在SW620细胞内进一步转染miR-138模拟物后,Transwell和MTT检测不同处理组中细胞增殖和迁移能力的改变情况;继续转染CCND1 siRNA后,探索miR-138影响细胞生物学过程的可能机制。结果结肠癌组织中,与相应癌旁组织相比,CCND1表达显著升高,miR-138表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-138mimics后,与空白对照组(未转染组)相比,细胞迁徙能力下降,同时增殖降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染CCND1 siRNA后,与未转染组相比,miR-138表达变化无显著差异(P>0.05),而细胞侵袭能力和增殖能力较未转染组相比显著改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌组织中CCND1异常升高可能与miR-138的表达降低有关,且miR-138影响SW620细胞的迁移和增殖能力可能是通过影响CCND1的表达实现的。     

SNRPA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及Snail1信号通路的影响

摘要：目的?检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达，分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法?通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证，以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况，并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒，采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性；Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力；western blot检测相应蛋白质的表达；敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果?SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外，在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高，而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中，敲减SNRPA后，其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05)，且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中，转染SNRPA过表达质粒后，其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中，转染Snail1 siRNA后，其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中，SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后，与对照组相比，其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论?SNRPA在胃癌组织中高表达；SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-152通过调控FOXR2表达抑制人前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨人前列腺癌PC-3细胞中miR-152调控叉头框蛋白R2(FOXR2)对细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌PC-3细胞中miR-152、FOXR2 mRNA的相对表达水平,Western blot检测FOXR2蛋白水平。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor或FOXR2-siRNA转染PC-3细胞后,观察细胞增殖能力的变化。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor分别与FOXR23′UTR双荧光素报告基因质粒共转染PC-3细胞,检测荧光素酶活性。miR-152 mimics和miR-152 inhibitor转染PC-3细胞后,检测miR-152、FOXR2 mRNA的相对表达水平及FOXR2蛋白水平。结果与RWPE-1细胞比较,PC-3细胞中miR-152的相对表达水平显著降低(P=0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著升高(P=0.003、0.003)。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor或FOXR2-siRNA转染PC-3细胞后,细胞增殖能力分别显著降低、升高、降低(P=0.022、0.029、0.006)。miR-152 mimics和FOXR23′UTR野生型质粒共转染后荧光素酶活性被显著抑制(P=0.001),而共转染miR-152 inhibitor可显著增加荧光素酶活性(P=0.001)。与对照组比较,miR-152 mimics转染PC-3细胞后,miR-152的相对表达水平显著升高(P<0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著降低(P<0.001、0.001),细胞活性显著降低(P=0.013);miR-152 inhibitor转染PC-3细胞后,miR-152的相对表达水平显著降低(P<0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著升高(P<0.001、P=0.007),细胞活性显著升高(P=0.018)。结论miR-152可通过负调控FOXR2表达发挥抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖的作用。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。