干粉培养基在禽多杀性巴氏杆菌病活疫苗培养中的应用

正商品化干粉培养基在培养中应用越来越广泛,给细菌培养提供充分营养需求,简化培养基制备过程,并可使批间次差异减少。1菌种及原材料1.1菌种禽多杀性巴氏杆菌G190E40弱毒株,效检用禽多杀性巴氏杆菌C48-1强毒株。1.2培养基青岛海博公司,巴氏杆菌干粉培养基,批号:2015121.3试验动物3~4月龄的健康易感鸡2菌种制备2.1基础种子G190E40株冻干菌种用灭菌2~5mL pH7.4     

不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌菌苗抗原的免疫原性比较试验

为比较不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌抗原的免疫原性,对禽多杀性巴氏杆菌标准强毒株C48-1株采用固体表面培养法和液体高密度发酵法制备疫苗并进行了免疫对比试验.结果表明,固体表面培养法制备的抗原菌体形态结构较均一,抗原成分稳定一致,并且含有较丰富的荚膜;而液体高密度发酵法制备的抗原形态结构大小不一,抗原成分不够稳定一致,含荚膜也较少.将两种方法制备的抗原按相同工艺制备成禽霍乱蜂胶灭活疫苗,效力检验结果显示二者差异极显著,固体表面培养法制备的疫苗免疫后14 d和90 d时保护率均为80%～100%,平均93%;液体高密度发酵法制备的疫苗免疫后14 d和90 d时保护率分别为40%～60%、60%～80%,平均为53%和67%.     

禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制

利用禽巴氏杆菌C48-1、C48-2强毒株、禽大肠杆菌O78和O1血清型强毒株及克雷伯菌临床分离株制苗,通过疫苗对鸡的免疫效力试验、疫苗最小免疫剂量试验、疫苗产生坚强免疫力时间的测定、疫苗免疫期的测定和疫苗保存期的测定等,研制出禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗.结果该三联灭活疫苗安全可靠,免疫原性良好,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫7 d后产生坚强保护力,疫苗对上述疾病的保护率为100%,免疫期为6个月,4 ℃条件下保存期为9个月.     

应用16S rRNA基因测序法鉴定禽多杀性巴氏杆菌的研究

应用 16SrRNA基因测序法对以疫苗标准强毒株C4 8_1和弱毒疫苗代表株G190E4 0为阳性对照株和分离鉴定的 2株禽源多杀性巴氏杆菌Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1株 ,进行 16SrRNA基因序列分析。结果表明 ,2株分离菌与对照的强弱毒株之间的同源性为 10 0 %。后经Blastn分析Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong /2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0株与已发表 11株多杀性巴氏杆菌同源性高达 10 0 % ,与已发表的 34株多杀性巴氏杆菌同源性均超过 98% ,同时与其它巴氏杆菌种如溶血巴氏杆菌等同源性均低于 96 % ,进一步证实Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1分离株均为多杀性巴氏杆菌。生化实验鉴定表明Chicken/guangxi/ 2 0 0 0_1、Chicken/guangdong / 2 0 0 2_1、C4 8_1、G190E4 0菌株均为subsp .Multocida亚种。     

禽巴氏杆菌病B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗株的选育

禽巴氏杆菌 B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗株是由一株代号为B_(26)的本地鸭源强毒株经含0.1%血红素马丁汤培养基连续传1200代获得的。该弱毒株经血斜连传30代或易感鸡体连传5代无返强现象;以3000万活菌免疫鸡可抵抗强毒攻击。该弱毒株具有良好的安全性和免疫原性.     

鸡IL-18对禽多杀性巴氏杆菌DNA疫苗的免疫佐剂作用

为了探索鸡IL-18在禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗中的免疫佐剂作用，分别用共表达鸡IL-18基因和禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗、鸡IL-18真核表达质粒pcDNA3／cIL-18与禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗混合物、禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗肌肉注射5周龄鸡，首免后每周采取外周血及外周抗凝血，应用ELISA和MTT法分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果鸡IL-18能够明显增强禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗的免疫原性，显著提高免疫鸡的体液免疫和细胞免疫水平，并且鸡IL-18与禽多杀性巴氏杆菌H基因共表达时的免疫佐剂作用最强，能强有力地抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击。结果表明，鸡IL-18可作为DNA疫苗的一种理想的免疫佐剂。     

禽霍乱蜂胶灭活疫苗的制苗及电镜观察

禽霍乱是严重危害养鸡业发展的重要疾病，以多杀性巴氏杆菌（C48-1）辅以蜂胶乙醇提取物制备的禽霍乱蜂胶灭活疫苗，经十多年实验室规范化试验和大量的应用初中证明，该疫苗在保护率、免疫期、产生免疫力时间早等方面均取得了突破性进展，发明人沈志强认为蜂胶以专有技术处理后形成许多小颗粒，能够与菌体结合，从而起到贮存佐剂的作用。     

禽多杀性巴氏杆菌C48—1成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究

将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H（OmpmH）的重组菌pGEX—ompmH／BL21大量培养，在最佳诱导条件下诱导表达，表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化，得到OmpmH基因的原核表达产物，将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗，用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡，首免后每周采血检测抗体，二免后第2周用10LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果显示，OmpmH具有良好的免疫原性，能诱导鸡体产生特异性抗体，可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击，免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。     

禽多杀性巴氏杆菌强毒株及其经盐类浸提胞壁荚膜抗原后电镜显微结构的观察

禽多杀性巴氏杆菌是引起鸡、鸭和鹅等多种禽类的一种急性败血性传染病病原菌。制成的菌苗在安全性或免疫性等方面还不十分理想。近年来国外不少学者曾就禽巴氏杆菌细胞壁荚膜及免疫性进行了研究,我国对该菌菌体及其荚膜抗原性本身的研究还不多。我们曾用2.5％NaCl溶液自禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)强毒株浸提出一种保护性荚膜抗原,已经证明这种粗提荚膜抗原对鸡、鸭安全和具有良好的免疫保护力。有关对该菌的超微结构及其提取菌体胞壁的荚膜后的形态变化,目前在国内还未见有正式报道。为了给今后免疫研究工作提供依据,我们曾将我国的一株禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)强毒株用     

限铁培养禽巴氏杆菌制备灭活疫苗及其免疫效果分析

为控制禽多杀性巴氏杆菌病的流行,通过对禽巴氏杆菌标准菌种A群NCTC1502进行限铁培养,制备稳定性和安全性较好的甲醛油乳剂灭活疫苗,免疫江汉鸡,监测其抗体消长规律和免疫效力。结果:禽巴氏杆菌限铁培养制备的灭活疫苗稳定性和安全性好,对江汉鸡可产生高效的免疫保护力,免疫保护率达100%,显著高于非限铁培养制备的灭活疫苗(80%)。试验表明利用禽巴氏杆菌标准菌种进行限铁培养所制备的疫苗可有效防控禽霍乱。     

Newcastle disease vaccination: A comparison of vaccines and routes of administration in Pakistan

Twelve-day-old chickens were vaccinated once with different Newcastle disease (ND) vaccines ( F, La Sota and Mukteswar) by two different routes (intraocular and drinking water). Chickens from a seventh group were uninoculated controls. At weekly intervals for 7 weeks after vaccination, 20 chickens from each vaccinated group and 20 chickens from the control group were examined for the production of haemagglutination-inhibition (HI) antibodies and for protection as assessed after challenge with velogenic, viscerotropic ND virus.

La Sota ND vaccine used intraocularly ranked the best and Mukteswar vaccine by the drinking water route the worst for their HI antibody titres prior to challenge. Differences between the treatments in protection were examined. For all three vaccines intraocular vaccine produced higher protection than drinking water vaccine. An inverse relationship between prechallenge and postchallenge HI titres was also recorded.     

山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立及应用

为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位~652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739 bp的目的片段后,再用限制性内切酶Bsp1407Ⅰ进行酶切分析,疫苗株可以切成135 bp和604 bp 3个片段,广西分离株可以切成135、226、378 bp 3个片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

新城疫CHR株与La Sota株2种疫苗近期免疫效力比较试验

鸡新城疫CHR 株冻干疫苗中试产品3 批以及La Sota 株冻干疫苗( 符合质量要求) , 以5 种免疫途径: 肌注、滴鼻、喷雾、饮水、拌料分别接种11 日龄雏鸡。每批疫苗每种途径接种1 组, 20 只/ 组, 共20 组。雏鸡群免疫前血凝抑制抗体(HI) 效价为1∶2-13 , 于14 d 、28 d 后再测HI抗体水平, 并分别用10 000 鸡胚半数致死量(ELD50) 新城疫标准强毒北京株攻击。从而检测2 种疫苗用5 种免疫途径免疫后在不同时间的近期免疫效力。结果表明, 近期内CHR 株疫苗HI抗体呈上升趋势, 而La Sota 株疫苗HI抗体先升高后下降; CHR 株疫苗以饮水和拌料途径效果较好, 其它3 种途径效果相似。接种后14 d 攻毒, 2 种疫苗均能较好保护强毒攻击; 28 d 后, CHR 株保护率高于La Sota 株。     

猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中猪流行性腹泻(PED)疫苗株与野毒株ORF3的特点设计特异性引物,建立能够快速区分PEDV疫苗株与野毒株的RT-PCR检测方法。建立的RT-PCR检测方法能够对PEDV疫苗株与野毒株扩增出特异性片段,其大小分别为278 bp和327 bp。该方法具有快速、特异、通用等特点,可用于实验室快速诊断、野毒株的区分,为该病的诊断及免疫防控提供参考依据。     

基于US区缺失位点猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别诊断方法的建立

依据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒全基因组序列,针对gI、gE、28K、TK四个基因序列,设计、合成了5条引物,并对野毒株SA株、gI-/gE-/PRVSA双基因缺失株和Bartha K61疫苗株进行了扩增,得到2061bp、1323bp、801bp和963bp特异性目的条带,其中BarthaK61疫苗株基因组检测最小浓度为136pg/μL。建立了针对野毒株和两种疫苗株的鉴别诊断方法。     

桑树根际固氮细菌的分离鉴定及固氮酶活力测定

利用固氮细菌可降低桑园化肥使用量和提高桑叶产量与品质。采用选择性培养基,从桑树根际分离获得24个具有固氮能力的细菌分离株,以rep-PCR基因指纹分析聚类为18个聚类群。经固氮酶活性测定,PA19、PA2和PK1菌株具有较强的固氮酶活性。利用菌落形态特征观察及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,对3株细菌进行鉴定的结果是:PA19菌株为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium sp.),PA2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),PK1菌株为土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)。     

Blocking ELISA's for the distinction between antibodies against European and American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

A double blocking ELISA was developed in order to satisfy the need for large scale serological screening for PRRS and simultaneous distinction between infection with European and American strains of PRRSV in pig herds. The Immunoperoxidase monolayer assay (IPMA) and the double blocking ELISA enabled distinction on serological basis between infection with European and American strains of PRRSV. The distinction was possible from about day 7 after infection of pigs with PRRSV. The double blocking ELISA enabled the distinction at later stages of infection compared to the IPMA, irrespective of the strain involved.     

鸡传染性法氏囊病病毒SD株毒力测定

从一个免疫失败鸡场中分离到一株鸡传染性法氏囊病病毒野毒株,命名为SD株.经血清学试验、鸡胚接种、病毒形态观察等证实了分离物为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV).测定病毒效价ELD50达到10-6.5/0.2 mL;动物回归试验表明,该SD株接种4周龄鸡后引起鸡群发病率为100%,病死率达85%,剖检可见法氏囊呈"紫葡萄样...