聚合酶链反应(PCR)方法检测远缘链球菌

目的 :建立一种快速、特异、敏感的远缘链球菌PCR检测方法。方法 :根据已发表的远缘链球菌葡聚糖酶基因 (dexA)的特异片断设计一对寡核苷酸引物 ,对 12种变形链球菌群中包含a～h 8种血清型的细菌及 2 3种常见的口腔菌中进行PCR扩增 ,扩增产物电泳鉴定 ,并对特异片断进行回收 ,测序。结果 :变形链球菌群标准菌株中 ,只有远缘链球菌 (血清d、g型 )产生特异的扩增片断 ,测序结果与已发表的文献结果完全一致 ,且显示了极高的灵敏性 ,≥ 2× 10 2 个细胞均可以用该方法检出。结论 :PCR方法可以用于快速灵敏的检测远缘链球菌 ,比传统的培养鉴定方法显示了更大的优越性     

套式PCR检测唾液中变形链球菌及远缘链球菌

目的 探索一种快速、简便地从人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌的方法。方法 分别以变形链球菌gtfI和远缘链球菌gtfB基因设计两组成套引物，首先用套式PCR（二次PCR）检测变形链球菌和远缘链球菌标准株和临床株，然后用套式PCR直接从唾液中检测这两种细菌。结果 变链菌（血清型c,e,f)的标准株及临床株第1次PCR扩增产物为517bp，第2次扩增产物为468bp；远缘链球菌（血清型d,g)及道勒链球菌（血清型h)的标准株及临床株第1次PCR扩增产物为712bp，第2次扩增产物为663bp;其他异种菌均不能扩增出产物，因此该PCR检测具有高度的特异性。细菌纯培养物及唾液PCR检测的敏感性分别是：第1次PCR为10^5CFU，第2次PCR为10^3CFU。结论 套式PCR能快速在人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌。该检测方法有望运用于临床检测，对揭示两种细菌与龋病发生关系的研究具有一定价值。     

小沟聚合物探针实时检测变形链球菌和远缘链球菌

目的　寻求一种快速检测变形链球菌(S.mutans)和远缘链球菌(S.sobrinus)的方法,研究变形链球菌群在儿童猛性龋患者口中的分布。方法　设计并合成针对S.mutans和S.sobrinus葡糖基转移酶基因(gtf)的特异性引物和小沟聚合物探针(MGB探针),对9株变形链球菌群参考菌株直接提取DNA及扩增纯培养后提取DNA分别进行检测,比较二者检测结果的异同。采集92例猛性龋儿童菌斑样本,用MGB探针进行实时检测。结果　采用MGB 探针可以特异性地鉴别S.mutans和S.sobrinus,直接检测和扩增纯培养后的定性检测结果完全一致,前者荧光出现的时间略迟。92例猛性龋患儿中S.mutans检出率为96.7%,S.sobrinus检出率为32.6%,所有检出S.sobrinus的菌斑样本均可检出S.mutans。结论　采用特异性MGB探针方法可以对菌斑中S.mutans和S.sobrinus进行实时检测, 提高检测效率。     

变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株超微结构观察

目的：探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟突变后,其超微结构变化及氟化物对细菌结构的影响。方法：将变形链球菌和远缘链球菌分为3组：A为正常对照组;B为加氟孵育组;C为耐氟菌株组。透射电镜观察3组细菌的超微结构。结果：与正常亲代菌株相比,加氟孵育后的菌株及耐氟菌株菌体出现不同程度超微结构改变,包括胞浆电子密度减低,细胞肿胀,内容物外溢,远缘链球菌链状结构消失等。结论：变形链球菌和远缘链球菌与氟共同孵育及耐氟突变后,其超微结构发生了改变,表现为自溶活动及解链活动增强。     

重度龋儿童远缘链球菌基因多态性研究

目的 采用随机引物聚合酶链反应(arbitrarily primed-polymerase chain reaction,AP-PCR)法初步探讨远缘链球菌在重度低龄儿童龋(severe early childhood caries,S-ECC)儿童与无龋儿童口腔中基因型分布的情况,分析其与婴幼儿龋发生之间的关系.方法 选取北京市海淀区和西城区14所幼儿园178名42～54个月龄儿童,S-ECC(患龋牙数≥5)组87例,无龋组91人.嚼蜡法采集刺激性唾液进行分离培养,典型菌落行革兰染色、生化鉴定并保种,提取基因组DNA,PCR鉴定变形链球菌和远缘链球菌,AP-PCR法对远缘链球菌临床分离株行基因型分析.结果 S-ECC组远缘链球菌检出率18%(16/87),显著高于无龋组的3%(3/91),差异有统计学意义(P＜0.01).53株远缘链球菌临床分离株共检出22种基因型,S-ECC组个体基因型为1～3种,无龋组均为1种;此外,S-ECC组3名个体间存在相同基因型的菌株.S-ECC组基因型数与龋失补牙数间存在相关性(r=0.50,P＜0.05).结论 S-ECC儿童远缘链球菌检出率明显高于无龋儿童,且菌株间存在基因多态性,个体携带基因型的种类数与其致龋性间存在相关性;远缘链球菌无关个体间存在相同基因型的菌株.     

变形链球菌和远缘链球菌致龋性的研究近况

变形链球菌和远缘链球菌是人类牙齿的主要致龋菌。近年研究表明两种细菌的生物学特性存在一定差异，远缘链球菌与龋病的活跃性密切相关，本文对两种细菌的流行病学、粘附机理、多的合成产酸酸耐酸进行了综述，为今后龋病病因学研究，抗龋疫的制备提供参考。     

聚合酶链反应检测同源性变形链球菌

目的：建立一种简便,快速,具有特异性检测和识别变形链球菌的方法。方法：根据葡聚糖基因设计的具有特异性针对变形链球菌的寡核苷酸引物,通过聚合酶链反应扩增一个１８８ｂｐ的ＤＮＡ片段以检测变链菌株和从人的口腔提取的菌斑和唾液标本。结果：这种聚合酶链反应的方法检测变链菌具有特异性和敏感性。结论：葡聚糖酶聚合酶链反应适合于特异性的检测和识别变形链球菌。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测远缘链球菌的实验研究

目的：建立一种实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitaive PCR,FQ PCR)方法，准确快速的定量检测唾液中的远缘链球菌。方法：在定性PCR检测的基础上设计一对特异引物，以及一条TqaMan标记的寡核苷酸探针，对己知数量的标准远缘链球菌株6715以及30名临床龋病儿童唾液样本核酸模板进行PCR扩增，并用培养鉴定的方法对30例唾液样本进行对照检测。结果：经FQ PCR检测，10^6-10^2拷贝的标准菌模板均可以用该方法检出，且循环阈值（Ct值）与起始拷贝数的对数相关性好，r=-0.999609。30例唾液样本中，13例可以检出并准确定量，培养鉴定的方法结果有11例阳性。结论：实时荧光定量PCR方法可以用于快速灵敏的定量检测远缘链球菌，比传统的培养鉴定方法显示了更大的优越性。     

高发龋和无龋儿童菌斑中变形链球菌及远缘链球菌的任意引物PCR检测

目的采用任意引物聚合酶链反应（arbitrarily primed-polymerase chain reaction，AP-PCR）法探讨高发龋和无龋儿童牙菌斑致龋菌的检出情况，分析变形链球菌及远缘链球菌与乳牙龋齿发生的关系。方法从20例高发龋患儿和20名无龋儿童的牙菌斑中分离、鉴定变形链球菌和远缘链球菌，以Shiroza的DNA提取方法提取细菌基因组DNA，以形态学、生化和AP-PCR的方法鉴定变形链球菌和远缘链球菌。结果AP-PCR法检测发现高发龋患儿变形链球菌和远缘链球菌的检出率分别为100％和40％，而无龋儿童两种细菌的检出率分别为75％和5％，差异有统计学意义。结论用AP-PCR法检测发现高发龋患儿变形链球菌和远缘链球菌的检出率均明显高于无龋儿童，口腔中定植的变形链球菌和远缘链球菌是乳牙龋高发的危险因素。     

中药五倍子对变形链球菌及远缘链球菌抑制作用的体外研究

目的：研究五倍子及其主要成分鞣酸在体外对变链菌及远缘链球菌的抑制作用，并摸索适宜剂型和浓度。方法：本实验采用纸片扩散法研究五种浓度五倍子煎剂，五倍子浸剂，鞣酸标准品抑制变链菌及远缘链球菌生长的作用。结果：65.2mL/L以上浓度五倍子煎剂，浸剂，鞣酸对变链菌及远缘链球菌生长均有抑制作用，其中五倍子浸剂抑菌作用最强。抑菌作用随着各剂型浓度的增国而增强。结论：五倍子可以抑制变链菌及远缘链球菌生长，其中浸剂效果最优，鞣酸组效果较差，可初步推测五倍子中含有其他协同鞣酸抑菌的成分。     

定量聚合酶链反应检测致龋性变形链球菌

目的 创建一种临床定量检测致龋性变形链球菌的分子生物学方法。方法 采用靶基因与参照基因同步扩增法，根据变形链球菌葡聚糖酶（dexA)基因序列，设计一对特异性引物，以pET23b质粒DNA为参照基因。对196名儿童的唾液样品进行定量PCR检测并进行常规培养法的对比研究。结果 196份唾液样品定量PCR检测致龋性变形链球菌≥10^8CFU/L，唾液的检出率为91.3%。与常规培养计量法的对比符合率为94.9%。结论 变形链球菌PCR定量检测是一种早期发现龋病活性的新方法，具有快速可靠、特异性强、符合率高等特点，有广泛的临床应用前景。     

变形链球菌和远缘链球菌的可溶性多糖和不溶性多糖的测定

目的 :对变形链球菌和远缘链球菌产生的可溶性多糖和不溶性多糖进行测定。方法 :酚硫酸法。结果 :发现变形链球菌产生的可溶性多糖显著高于远缘链球菌 ,而远缘链球菌产生的不溶性多糖高于变形链球菌。结论 :表明在对牙面的粘附作用中远缘链球菌更依赖于蔗糖及其产生的不溶性葡聚糖 ,而变链菌则较少依赖于葡聚糖 ,而可能主要依赖于唾液的介导。     

随意引物PCR法鉴别口腔变形链球菌的初步研究

目的 :探讨口腔变形链球菌族细菌中各个种和血清型的关系。方法 :采用随意引物PCR法对变形链球菌 (血清型c ,d ,f)及与其同源性相近的血链球菌标准菌株进行PCR扩增 ,建立口腔变形链球菌基因图谱。结果 :变形链球菌与血链球菌基因图谱差异较大 ;变形链球菌各个种基因图谱有差异 ;属于同一个种的变形链球菌不同血清型的菌株基因图谱虽相似但有差异。结论 :运用随意引物PCR法可鉴别不同种或同一种中血清型不同的变形链球菌。提示 :随意引物PCR法是一种鉴别口腔变形链球菌比较简便、准确的方法。     

不同人群唾液中变形链球菌的定量检测及其意义

目的 建立定量检测唾液样本中变形链球菌和细菌总数的方法 ,比较变形链球菌和细胞总数的存在与不同人群中龋齿患病率的关系.方法 针对染色体DNA印迹法检测变形链球菌中出现的14 kb的HaeⅢ酶切片段,合成特异性引物(Sm~*),运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术定量检测变形链球菌;对单纯随机抽样方法 抽取的99份唾液标本按照龋齿牙数是否为0分为龋齿组和无龋组,龋齿组72人,无龋组27人(包括从未患过龋齿者和曾患龋齿但已经过治疗和填充的无新鲜龋齿者),分别进行变形链球菌和细菌总量的检测及统计学分析.结果引物Sm~*仅对变形链球菌有特异性,定量PCR可检测的下限为0.1 μg/L;细菌总数在龋齿组和无龋组分别为51.4×10~8个/L和221.6×10~8个/L,变形链球菌占细菌总数比值分别为0.0193和0.0059,细菌总数和变形链球菌所占比值在两组间差异有统计学意义(P=0.022).结论 引物Sm~*可用于变形链球菌的定量检测;唾液中变形链球菌与总细菌数的比值与龋齿患病率相关.     

聚合酶链反应检测致龋性变形链球菌

本研究旨在应用聚合酶链反应检测致龋性变形链球菌。针对血清C型变形链球菌的spaP基因序列合成特异性引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增spaP基因片段的方法检测变形链球菌各菌株和口腔多种常居菌。结果只有变形链球菌血清C型产生了扩增产物,呈现单一的192bpDNA条带。这种方法使过去不能检出的微量靶序列(3个cfu)得以检出,具有高度的特异性和敏感性。用本方法检测50例口腔菌斑标本,有44例呈阳性结果。提示该检测技术是一种快速、准确检测变形链球菌的新方法。