脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2 CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.     

脐血CD3AK和LAK细胞免疫学特征的比较研究

γIL-2激活的脐血杀伤细胞(LAK)体内外抗肿瘤已有报道,而Anti-CD3McAb作为免疫增强剂,在骨髓、外周血的过继免疫中已取得明显疗效,脐血单个核细胞(MNC)能否被Anti CD3McAb激活为抗肿瘤的杀伤细胞(CD3AK)?是否比其LAK有更多的活性?为探讨这些问题,本实验采用γIL-2+Anti-CD3McAb和单纯γLI-2刺激脐血MNC,观察其表面抗原及细胞因子的变化,并探讨两者对K562和HL-60白血病细胞株的杀伤作用.     

原发性肝癌肝动脉导管灌注CD_3AK细胞与化疗栓塞联合应用的疗效观察

观察肝动脉导管灌注CD3AK细胞联合TAE治疗晚期HCC的效果。方法：40例晚期HCC分为两组，实验组20例，采用肝动脉导管灌注CD3AK细胞联合TAE治疗；对照组20例，单纯TAE治疗。并检测两组AFP及T细胞亚群的变化。结果：实验组与对照组有效率分别为45％、30％（P＜0．01），治疗后实验组CD4、CD4／CD8比值明显升高（P＜0．01），而对照组则轻度下降。AFP两组均明显下降，以实验组为著（P＜0．005）。结论：肝动脉导管灌注CD3AK细胞联合TAE治疗晚期HCC，是一种最有希望的方法。     

CD3AK细胞的研究进展

过继免疫疗法是目前治疗恶性肿瘤的一个重要辅助治疗方法。它是指体内回输免疫活性细胞,从而达到杀伤恶性肿瘤细胞的目的。与其他抗肿瘤药物相比,它可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并且调节和增强机体的免疫功能。用于过继免疫疗法的免疫活性细胞必须具有较强的细胞毒活性和增殖力,目前常用的有抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CDlmon-odonal antibody activated killer cells,CD3AK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activated killer cells,LAg)及细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,aKl)[1~3]。其中研究最多最重要的就是CD3AK细胞。本文拟就其研究进展作一综述。     

CD＿3AK与LAK细胞生物活性的比较

采用正常人外周血单个核细胞,经抗ＣＤ３单克隆抗体预刺激后,加入白细胞介素２继续激活的ＣＤ３ＡＫ细胞,与常规ＬＡＫ细胞的生物活性进行了比较。结果表明,ＣＤ３ＡＫ细胞的体外增殖能力,存活时间及细胞活性明显高于ＬＡＫ细胞细胞表型的检测发现ＣＤ３ＡＫ细胞的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋表型高于ＬＡＫ细胞,而ＣＤ１６＋表型低于ＬＡＫ细胞（ｐ＜０．０ｌ）。认为ＣＤ３ＡＫ细胞是一种非ＮＫ型ＹＭ细胞毒活性的肿瘤杀伤细胞,为应用ＣＤ３ＡＫ细胞过继免疫疗法提供了有价值的参考依据。     

CD3AK细胞及其抗肿瘤研究进展

抗ＣＤ３抗体激活的杀伤细胞－ＣＤ３ＡＫ是一种新型抗瘤免疫活性细胞。Ｔ细胞经抗ＣＤ３单克隆抗体激活后，采用极低剂量ＩＬ－２维持即可长期活性增殖，发挥明显的抗肿瘤细胞效应。依诱导培养过程中ＣＤ３单抗持续存在与否，形成ＣＤ３ＡＫ＾＋和ＣＤ３ＡＫ＾－两种亚类，其作用及方式亦有所差异。ＣＤ３ＡＫ的体内外广谱、高效抗肿瘤作用明显优于ＬＡＫ细胞，临床初步应用亦显示出良好疗效。     

CD3AK细胞治疗原发性肝癌的实验及临床应用研究

目的观察CD3AK细胞体外杀瘤活性及其治疗中晚期原发性肝癌的效果。方法采用抗CD3单克隆抗体（CD3McAb）辅以少量rlL—2和PHA诱导外周血淋巴细胞制备CD3AK细胞。体外实验用MTT法测定其对K562、Hela—3和H7402肿瘤细胞株杀瘤活性，然后应用于临床，将140例中晚期肝癌患者随机分为三组，A组5l例（CD3AK细胞十化疗），B组45例（单纯化疗），C组44例（单用CD3AK细胞治疗）。结果CD3AK细胞体外对K562、Hela－3和H7402细胞株杀瘤率分别为78．54％、34．09％和64．37％，抗肿瘤效应的最佳时期在培养的第7～10天之间；临床治疗部分缓解率（PR）A、B、C组分别为45．1％、17．7％和20．5％，A、B两组比较有显著性差异（P＜0．o1）。结论CD3AK细胞是继LAK细胞后又一为有效的杀瘤细胞，临床应用安全可靠、有效，在中晚期肝癌辅助治疗中有着良好的应用价值，合理结合其它疗法可增强疗效。     

CD3AK细胞的体外诱导及生物学特征的研究

采用抗CD3单克隆抗体(anti-CD3McAb)和基因重组人白细胞介素2(rIL-2)、植物血凝素(PHA)共同诱导人外周血单个核细胞(PBMC)制备CD3AK细胞,应用APAAP法、吉姆萨染色法分析CD3AK细胞的表型、核型等免疫生物学特征.结果表明,微量的niti-CD3AK(终浓度30～50ng/ml)辅以少量的rIL-2(100 U/ml)和PHAS(100μg/ml)共同培养,就能诱导和扩增CD3AK细胞,细胞扩增倍数随着anti-CD3McAb的使用浓度增大而增高,当anti-CD3McAb的使用浓度提高到500ng/ml时,CD3AK细胞扩增倍数可达800倍以上,显著高于LAX细胞的扩增倍数,细胞常呈集落生长.CD3AK细胞的表型分析结果,CD3~ ,CD4~ ,CD8~ 的CD3AK细胞比率分别为(72 ±14)%,(29±4)%,(47±23)%,提示CD3AK细胞是一类以CD3~ ,CD4~ ,CD8~ 细胞为主的异质细胞群,并具     

Preparation and Bioactivity Assay of CD3AK Cell from Lmbilical Cord Blood：—Clinic Report of 10 Tumor Cases

Objective To study the anti-tumor effect of CD3AK cell prepared from umbilical blood,to explore the short-term curative effect on tumor cases and seek better immune index for biotherapy.Methods IL-2 and IL-2 CD3Ab were used to induce LAK cells and CD3AK cells isolated from umbilical blood mononuclear cells(UBMC).The expanding number and bioactivity of LAK cells and CD3AK cells were examined at different time points after culture,the NK activity of peripheral blood mononuclear cells(PBMC)of 10 cases of malignant tumor were determined before and after CD3AK cell adopting immune therapy as well.Results The number and bioactivity(NK killing K562 cell)of LAK and CD3AK cells reached their peaks on 11 th day.The number of LAK and CD3AK cells were 18 folds and 24 folds of that before culture;The NK activities of LAK and CD3AK against K562 were 2.6 folds and 3.2 folds of those before culture respectively.The nK activity for killing K562 cells of malignant tumor patient‘s PBMC was increased from 63%-81% by CD3AK cell transfusing,rising mean 28%.Conclusion (1)The UBMC is a potential and better source of predecessor for LAK and CD3AK;(2)The NK activity of LAK and CD3AK cells from UBMC reached their peaks at 11 th day after culture,and the NK aftivity of CD3AK cells in much greater than that of LAK cells;(3)The NK activity of malignant tumor patient‘s PBMC can be obviously elevated by transfusing CD3AK cell(4)The test of NK activity of PBMC of malignant tumor patient may become an objective immune index for tumor biotherapy.     

CD3AK细胞生物学特性及抗肿瘤作用研究

过继输注体外激活的抗肿瘤效应细胞直接或间接地介导体内肿瘤消退是肿瘤生物治疗研究的重要课题之一。８０年代初,ＮＩＣ的Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等人发现的ＩＡＫ细胞及其在实验动物和人类肿瘤治疗中抗肿瘤作用的证实将这一工作推进到了一个新的阶段。迄今在用于过继免疫治疗的各种抗肿瘤效应细胞中,ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞已引入临床。但近年来的研究观察表明,ＬＡＫ细胞只对少数肿瘤有效,多数肿瘤疗效不佳。ＴＩＬ细胞的抗肿瘤作用虽然优于ＬＡＫ细胞,但由于前体细胞来源困难,临床推广应用受到一定的限制。因此,目前有关的研究工作随…     

淋巴结来源的CD3AK细胞的增殖和表型变化分析

目的：研究肺癌清扫淋巴结的淋巴细胞，经CD3单克隆抗体激活后的杀伤细胞（CD3AK细胞）在体外的增殖和表型变化。方法：取肺癌清扫淋巴结，用机械方法分离成单细胞悬液，加CD3单克隆抗体和小剂量IL2共同培养，每隔1天用流式细胞术进行细胞表型分析及用台盼蓝活细胞计数法观察细胞增殖情况。结果：表型分析显示CD3，CD8，CD56，CD25增加。培养第8天淋巴细胞增殖达高峰，数量是培养前的2.33倍。结论：CD3单克隆抗体能明显激活各种T细胞增殖，使CD3AK细胞维持杀伤功能。     

CD3AK细胞介导的MHC非限制性溶瘤作用机制的初步研究

本研究表明体外激活扩增的CD_3AK细胞可以MHC非限制性方式杀伤MHC I类抗原阴性NK敏感的K562细胞和MHC I类抗原阴性NK不敏感的Daudi细胞,杀瘤机制与诱导靶细胞坏死和/或凋亡有关。     

CD3AK杀伤机理及其杀伤活性调控效应的初步研究

应用抗CD3单抗和人rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞制备人CD3AK细胞(CDAK).采用LDH释放法、ABC-CELISA法、流式细胞术等方法观察了CD3AK杀伤癌细胞的机理及人rIFN-α、rIFN-γ、rTNF细胞因子、化疗药顺氨氯铂(CDDP)和阿霉素(ADM)对CD3AK杀伤活性的调控效应.结果表明,①粘附分子ICAM-1/LFA-1参与CD3AK的杀瘤过程,并且rIFN-α、rTNF的促CD3AK杀伤效应亦是通过上述途径实现的.③CD3AK通过分泌可溶性杀伤因子间接杀伤癌细胞.③CD3AK通过膜相关TNF参与杀伤效应.④CD3AK介导癌细胞凋亡.⑤化疗药CDDP和ADM处理癌细胞后,提高其对CD3AK杀伤活性的敏感性,CDDP促杀伤效应与其上调癌细胞表面ICAM-1、HLA-ABC抗原表达有关.     

荷肿瘤抗原的DC细胞增强CD3AK细胞特异杀伤作用的研究

目的 探讨肺癌细胞株A549的肿瘤冻融抗原（Ag）负荷脐血来源树突状细胞（DC）（Ag＋DC）与CD3AK细胞混合培养制备的Ag＋DC＋CD3AK对肺癌细胞株A549特异杀伤活性的影响。方法 用脐带血单个核细胞（UBMC）分别制备DC细胞、CD3AK细胞,用肺癌细胞株A549的制备肿瘤抗原（Ag）,用Ag负荷DC制备Ag＋DC,再把Ag＋DC和CD3AK共培养制备Ag＋DC＋cD3AK细胞;用MTT法检测不同效应细胞：UBMC、CD3AK细胞,Ag＋CD3AK和Ag＋DC＋CD3AK细胞对A549肺癌细胞株的杀伤活性。结果 各种效应细胞对A549细胞的杀伤活性分别是：Ag＋DC＋CD3AK（62．11％）〉Ag＋CD3AK（50．34％）〉CD3AK（45．91％）〉UBMC（34．35％）,而且Ag＋CD3AK组的杀伤活性高于CD3AK组（P〈0．05）;Ag＋DC＋CD3AK组的杀伤活性更明显的高于CD3AK组（P〈0．01）。结论 Ag能增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性,肿瘤抗原负荷的DC（Ag＋DC）能进一步增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性,为CD3AK细胞的特异免疫治疗的临床应用提供了基础资料。     

CD3AK细胞肝瘤内注射结合TACE治疗中晚期原发性肝癌的近期疗效观察

目的：观察CD3AK细胞肝瘤内局部注射结合肝动脉插管化疗栓塞术（TACE）治疗中、晚期原发性肝癌的近期观察疗效。方法：对20例中、晚期原发性肝癌的外周血行CD3AK细胞培养后肝瘤内局部注射并结合肝动脉插管化疗栓塞术，并与同期24例中、晚期原发性肝癌单纯行肝动脉插管化疗栓塞术（TACE）相对照。结果：完全缓解（CR）1例，部分缓解（PR）15例，有效率RR（CR＋PR）80．0％，患者的细胞免疫功能明显提高（P＜0．01）。结论：CD3AK细胞局部注射结合化疗治疗中、晚期恶性肿瘤的近期疗效增加（P＜0．05），患者的细胞免疫功能明显提高，值得临床推广和应用。