外源性非酶糖基化终末产物对大鼠视网膜血管短期作用观察

目的观察外源性非酶糖基化终末产物(AGEs)在视网膜中对血管内皮生长因子(VEGF)受体(Flt-1)的表达和对视网膜血管的影响。方法应用鼠血清白蛋白(RSA)体外孵育AGEs,并于尾静脉注射至健康大鼠体内,每日1次,连续2周,随机分为AGEs组和RSA对照组。通过眼底荧光血管造影(FFA)观察视网膜血管有、无渗漏,采用Envision系统免疫组织化学法检测视网膜Flt-1的表达,通过视网膜超薄切片和透射电镜观察视网膜血管超微结构改变。结果2周后FFA显示大鼠视网膜均未出现荧光渗漏、积聚现象,未发现有毛细血管无灌注区。视网膜内核层中出现棕黄色Flt-1阳性染色细胞,AGEs组的阳性细胞[(25.18±3.44)个]较RSA对照组多50%[(18.74±4.11)个,P<0.05]。AGEs组大鼠视网膜毛细血管基底膜电子密度轻度增高,周细胞、内皮细胞胞浆内线粒体发生肿胀、膜破裂;RSA对照组未发生超微结构的改变。结论AGEs可作为独立因素参与视网膜血管及其细胞的损害过程,并与VEGF有一定的联系。     

高糖及晚期糖基化终末产物环境对血管内皮细胞血管样结构形成的影响

目的观察高浓度葡萄糖和晚期糖基化终末产物（AGEs）干预对体外培养血管内皮细胞的损伤后愈合、血管样结构形成能力和相关血管化调控因子表达的影响。方法根据培养液中添加不同浓度的葡萄糖和AGES-BSA,将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为高糖组（30mmol／LD-葡萄糖）、AGEs组（150mg／LAGE-BSA）、高糖＋AGEs组（30mmol／LD-葡萄糖＋150mg／LAGE-BSA）和正常组（5mmol／LD-葡萄糖）,另设甘露醇组（30mmol／L甘露醇）,电子细胞基质阻抗判断法（ECIS）测定HUVECs损伤模型增殖曲线,倒置显微镜下观察HUVECs在Matrigel基质中血管样结构的形成情况;ELISA法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-2（Ang-2）的表达,荧光显微镜下观察HUVECs中血管生成素受体Tie2的表达。结果ECIS法测定结果显示：各组HUVECs增殖曲线形态相似,反映愈合率的斜率无明显差别。倒置显微镜观察发现：高糖组、AGEs组和高糖＋AGEs组形成血管样结构的长度显著小于正常组（P〈0．05或P〈0．01）。ELISA检测结果显示：与正常组比较,高糖组、AGEs组和高糖＋AGEs组细胞培养上清液中Ang-2水平显著升高,VEGF水平显著降低（P〈0．05）。荧光显微镜观察发现：Tie-2受体在正常组HUVECs的细胞膜和细胞质中均有表达,在AGEs组的HUVECs中仅表达于细胞核中。结论在高糖和（或）AGEs环境下,血管内皮细胞血管样结构形成能力受到抑制,其机制可能与Ang-2表达上调、VEGF表达下调以及Tie-2受体在细胞内不同部位的差异性表达有关。     

糖基化终产物及其受体系统与糖尿病肾病

糖基化终末产物(AGEs)是持续高血糖状态下多种蛋白质非酶糖基化反应的终末产物。AGEs通过与其受体(RAGE)结合,激活细胞内信号通路、增强氧化应激,诱导细胞因子、炎性介质的释放,促进糖尿病肾病的发生、发展。阻断AGEs-RAGE系统在糖尿病肾病中的作用,对糖尿病肾病的防治具有重要意义。     

终末糖基化产物在糖尿病微血管病变中的作用

终末糖基化产物(AGEs)是持续高血糖状态下多种蛋白质非酶糖基化反应的终末产物。现在研究认为AGEs通过非受体依赖途径和受体途径,引起微血管基底膜增厚,促进血管内血栓形成及与AGEs受体结合后引起慢性细胞活化作用、组织损伤及血管舒张功能的降低等,从而导致肾小球硬化、肾脏肥大、视网膜水肿、视网膜出血、微血管瘤形成和血管阻塞等。阿司匹林、赖氨酸、氨基胍等药物能够抑制AGEs的合成,为糖尿病并发症的治疗提供有意义的线索。     

晚期糖基化终末产物与糖尿病周围神经病变关系新进展

世界糖尿病患者的人数在不断增加,其中糖尿病主要并发症——糖尿病周围神经病变(DPN)严重影响患者的生存质量。晚期糖基化终末产物(AGEs)的累积影响DPN的发生、发展过程。体内AGEs可以通过影响炎症信号通路、氧化应激、多元醇途径等导致DPN,治疗DPN的思路主要是减少或抑制AGEs的累积,阻断AGEs与各致病通路及途径对DM患者神经组织的交叉破坏作用。在DPN的治疗方面祖国医学中的方剂、中药及其提取物发挥了很好的治疗作用。     

血中VEGF,IGF-1与2型糖尿病视网膜病变关系的研究

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、胰岛素样生长因子-1(insulin-likegrowthfactor-1)与2型糖尿病视网膜病变发生发展的关系。方法用酶联免疫吸附分析双抗体夹心法、放射免疫分析法分别测定32例正常对照组、29例无视网膜病变的2型糖尿病组(non-diabeticretinopa-thy,NDR)、30例单纯糖尿病视网膜病变组(backgrounddiabeticretinopathy,BDR)和28例增殖性糖尿病视网膜病变组(proliferativediabeticretinopathy,PDR)血浆中VEGF与血清中IGF-1的含量。用t检验、直线相关分析进行组间差异性比较。结果VEGF与IGF-1在NDR组明显高于正常对照组(P<0.01);BDR组和PDR组明显高于NDR组(P<0.05);NDR和BDR两组VEGF与IGF-1之间呈显著正相关(r =0.371;r =0.364,P<0.05)。结论VEGF和IGF-1是促进糖尿病性视网膜病变发病和视网膜新生血管形成的重要因素。     

2型糖尿病患者血中胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子水平与糖尿病视网膜病变的关系

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子V(EGF)水平与2型糖尿病视网膜病变的关系。方法用放射免疫分析法、ELLSA法分别测定42例正常对照组(CG组)、52例无视网膜病变的2型糖尿病组(NDR组)和57例有视网膜病变的2型糖尿病组(DR组)血清中IGF-1、血浆中VEGF的含量。用t检验、直线相关分析进行组间差异性比较。结果IGF-1、VEGF含量糖尿病组(DM组)明显高于CG组(P<0.01);IGF-1、VEGF含量DR组明显高于NDR组(P<0.05);NDR和DR2组之间VEGF与IGF-1呈显著正相关(P<0.05)。结论VEGF和IGF-1是影响糖尿病视网膜病变的重要因素。     

血管内皮生长因子及其磷酸化受体系统在背景型糖尿病视网膜病变大鼠中的表达

目的　血管内皮生长因子 (VEGF)是糖尿病诱发的视网膜新生血管形成的主要媒介。为探讨VEGF及其高亲和力酪氨酸激酶受体 (VEGFR :Flt 1、Flk 1)是否参与了背景型糖尿病视网膜病变 (BDR)的发生。方法　采用斑点杂交和免疫组织化学技术检测了链脲菌素诱导的糖尿病大鼠模型中视网膜VEGFmRNA和蛋白表达的丰度及分布。免疫沉淀和免疫印迹分析了Wistar鼠视网膜血管磷酸化Flt 1和Flk 1表达情况。消化铺片和电镜定量分析评估DR。结果　形态观察显示病程 6月的糖尿病动物视网膜病变尚未突破内界膜 ,其血管床无细胞性毛细血管数目仅较正常对照组轻微上升 ,而深层毛细血管基底膜异常则较对照组显著为高 (P <0 .0 5 )。虽然糖尿病视网膜VEGF蛋白表达分布与对照组无异 ,但在血管壁、内核层、外丛状层糖尿病大鼠VEGF表达上调 ,糖尿病组视网膜VEGFmRNA水平也较对照组显著升高 (1.4 2± 0 .0 8任意光密度单位VS 0 .92± 0 .0 5任意光密度单位 ,P <0 .0 1)。另外 ,在糖尿病视网膜血管磷酸化Flt 1和Flk 1表达也明显上调。结论　本文结果提示VEGF VEGFR系统在BDR大鼠视网膜表达上调 ,此可能参与了BDR特征性毛细血管渗漏等病理生理过程。     

糖尿病视网膜病变的发病机制

 糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病最主要的微血管并发症之一,是成人失明的重要原因。其发病机制复杂,多种生化异常牵涉其中,主要包括：多元醇途径亢进、蛋白激酶C激活、氧化应激增高、终末糖基化产物形成、生长因子和黏附分子表达增加等。本文就DR及其发病机制作一综述。     

晚期糖化终产物对离体血管平滑肌细胞的影响

探讨晚期糖化终产物对离体新生牛胸主动脉血管平滑肌细胞的影响及机制。方法：观察ＶＳＭＣ受ＡＧＥｓ刺激后其生长,超微结构和血小板源生长因子－Ａ（ＰＤＧＦ－Ａ）的变化以及维生素Ｅ对上述变化的影响。结果：ＡＧＥｓ促进ＶＳＭＣ生长,细胞内ＡＧＥｓ和ＰＤＧＦ－Ａ的免疫反应呈阳性,线粒体和粗面内质网增多。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞eNOS活性和表达的影响

目的　研究糖基化终产物 (AGEs)对内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的活性及蛋白表达的影响。方法　用糖孵育法制备糖基化修饰的牛血清白蛋白 (AGE BSA) ,用胶原酶法分离培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。将内皮细胞与不同浓度的AGE BSA在体外分别培养 3 ,6,12 ,2 4,48h ,用同位素二步色谱法检测基础状态下与组胺刺激后的eNOS活性 ,用蛋白免疫印迹法 (Western blotting)检测eNOS蛋白表达水平。结果　基础状态下 ,HUVECs的eNOS有部分激活 ,组胺刺激后eNOS活性明显增加 (P <0 .0 0 1)。AGE BSA明显抑制基础状态下的eNOS活性和组胺刺激后的eNOS活性增高(P <0 .0 0 1) ,这种抑制作用呈时间、浓度依赖性。AGE BSA与HUVECs共同孵育 2 4h后的eNOS表达水平明显降低 (P <0 .0 0 1) ,且随着孵育时间的延长 ,eNOS表达水平进一步降低 (P <0 .0 5 ,48hvs 2 4h) ,这种抑制作用与AGE BSA的浓度有关。结论　AGE BSA明显抑制eNOS基础状态和组胺刺激后的活性增高 ,AGE BSA明显抑制HUVECs的eNOS表达 ,AGE BSA对eNOS活性的抑制作用可能与降低eNOS表达有关。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠肾脏晚期糖基化终产物及其受体表达的影响

目的观察厄贝沙坦对糖尿病肾病（DN）大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGEs）表达的影响,探讨其对DN的肾保护作用机制。方法应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组：DN模型对照组、厄贝沙坦组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察24h尿蛋白定量、血清和肾组织AGEs含量变化,免疫组化法检测肾组织RAGEs的表达,RT-PCR法检测肾组织RAGEs mRNA的表达,光镜观察肾脏病理改变。结果应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量、血清及肾组织AGEs含量明显减少,肾组织RAGEs含量及其mRNA表达水平明显降低,肾脏病理改变显著减轻。结论厄贝沙坦对DN的肾保护作用机制与降低血清、肾组织AGEs水平以及肾组织RAGEs含量,抑制肾组织RAGEs mRNA表达有关。     

川芎嗪对糖基化终产物诱导人视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的研究川芎嗪对糖基化终产物(AGEs)诱导人视网膜色素上皮细胞(RPE)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法应用免疫组化法及免疫印迹法(western blot)检测不同浓度AGEs作用下RPE中VEGF的表达、同一浓度AGEs作用于RPE不同时间VEGF的表达、不同浓度川芎嗪对AGEs作用下RPE中VEGF的表达的影响。结果随着AGEs浓度的增加,RPE中VEGF的表达逐渐增加,以100mg/L最为明显;AGEs作用8h时,RPE中VEGF的表达较高;随着川芎嗪浓度的增加,AGEs作用下的RPE中VEGF的表达逐渐降低。结论AGEs可诱导RPE中VEGF的表达,川芎嗪可对抗这一作用,且具有浓度依赖性。     

糖化终末产物对内皮细胞氧化应激的影响

目的研究糖化终末产物(AGEs)对猪髂动脉内皮细胞(PIEC)氧化应激的影响。方法不同浓度AGEs干预PIEC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力变化。运用活性氧(ROS)捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果随着AGEs浓度的增加和作用时间的延长,PIEC活力明显下降(P<0.05);细胞活力下降与作用浓度及时间呈显著正相关(r=0.927,P<0.01)。经DCFH-DA孵育后流式细胞仪检测显示,AGEs处理组细胞内DCF平均荧光强度较空白对照组明显升高。结论AGEs抑制内皮细胞活力,使细胞内ROS生成明显增加,直接诱导内皮细胞的氧化应激。     

肝细胞生长因子抗糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的：探讨肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，分为实验对照组、糖基化终产物及糖基化终产物＋肝细胞生长因子组，采用MTT法测定各组血管内皮细胞生长抑制率；瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化、流式细胞术测定细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Ban、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定caspase-3活性。结果：糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变，内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系，肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率；肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高，而促凋亡基因Bax表达无明显变化；caspase-3活性显著降低。结论：肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡，其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制caspase-3的激活．     

迷迭香酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用

目的探讨迷迭香酸对高糖诱导下人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用。方法将人视网膜血管内皮细胞按培养方案分为对照组、迷迭香酸组、高糖组、联合组。Transwell法观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA检测各组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blotting法与qRT-PCR技术检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)与凋亡相关蛋白Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)的表达水平。结果迷迭香酸组与对照组各项指标差异均无显著性(P＞0.05)。与对照组比较,高糖组人视网膜血管内皮细胞迁移能力及细胞凋亡水平显著增加,炎症指标IL-6、IL-8与TNF-α的含量增加,VEGF、Caspase-3、BAX蛋白及mRNA水平增加,Bcl-2蛋白及mRNA水平降低(P＜0.05)。与高糖组比较,联合组迁移细胞数量、细胞凋亡水平、IL-6、IL-8与TNF-α的含量、VEGF、Caspase-3与BAX的蛋白及mRNA水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA水平增加(P＜0.05)。结论迷迭香酸可抑制高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的迁移及凋亡状态,其机制可能与调控VEGF有关。     

晚期糖基化终产物修饰人血清白蛋白对人血管内皮细胞的生长抑制作用

目的　探讨晚期糖基化终产物 (AGE)在糖尿病难愈创面形成和发展中的作用机制。方法　将人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白 (AGE HSA)在体外共同培养。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、锥虫蓝排斥实验和活细胞计数检测AGE HSA对血管内皮细胞的生长抑制作用。采用AnnexinVFitc和碘化丙啶 (PI)染色 ,通过流式细胞仪检测细胞凋亡百分率 ,同时应用荧光共聚焦显微镜观察凋亡或死亡细胞AnnexinVFitc和PI的荧光染色 ;利用透射电镜和光镜观察AGE HSA对内皮细胞的形态学影响。结果　内皮细胞经 12 .5、2 5和 5 0 μg/mlAGE HSA干预 2d后 ,各干预组细胞数与对照组比较无明显差异 (均P >0 0 5 ) ,而于 4d和 6d后明显低于对照组 ,细胞增殖抑制率显著上升。内皮细胞经 10 0或 2 0 0 μg/mlAGE HSA干预 6、12、2 4、4 8h后 ,MTT法测其吸光度A值在各时相点均显著低于对照组 (P <0 0 1) ,同时内皮细胞出现特异性的凋亡形态学变化 ,AnnexinVFitc阳性和 /或PI阳性的细胞逐渐增多 ,流式细胞仪测定的各时相点凋亡细胞百分率均显著高于对照组 (P <0 0 1) ,且凋亡或死亡细胞数量随AGE HSA作用时间及浓度的增加而增多。结论　AGE HSA能抑制内皮细胞增殖 ,并可以诱导其凋亡 ,而且与作用时间及浓