SHR肾脏组织肌球蛋白轻链磷酸酶水平的研究

通过比较12周龄的自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）及其对照组Wistar Kyoto（WKY）肾脏组织的MLCP的130、38、21kD三个亚单位含量差异,探讨肾脏组织MLCP与SHR高血压病理机制之间的关系。在4℃的环境下,取SHR与WKY大鼠各10只断头处死,迅速取其肾脏,称重速冻后将血管磨成匀浆,置于缓冲液中并通过离心提取蛋白质,校正两组总蛋白的浓度后,分别应用SDS-PAGE、Western印迹杂交和化学发光的方法测定SHR与WKY肾脏组织MLCP的130、38、21kD三个亚单位的含量,对显影结果进一步进行吸光度扫描分析。进行两组间,t检验。发现SHR和WKY大鼠肾脏组织MLCP的130、38和21kD三个亚单位的含量有着明显的差异,SHR的MLCP38和21kD亚单位的含量明显低于WKY大鼠（p〈0·01）,SHR的MLCP130kD亚单位含量则高于WKY大鼠（p〈0·05）。提示肾脏组织MLCP结构或功能的异常可能与SHR高血压的病理机制有关。     

低氧运动对大鼠血清VEGF含量及心肌VEGF基因和蛋白表达的影响

目的:观察低氧和不同运动强度对大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)含量及心肌VEGF基因和蛋白表达的影响。方法:SD大鼠随机分成6组:常氧对照组(NC),低氧对照组(HC),常氧低强度运动组(NEL),低氧低强度运动组(HEL),常氧高强度运动组(NEH),低氧高强度运动组(HEH)。NC、NEL和NEH组在常氧环境下生活,HC、HEL和HEH组在氧含量14.1%的低氧环境下生活。NEL和HEL、NEH和HEH组运动强度分别为15.2 m/min和26.8 m/min,跑台坡度均为10°,40min/天,6天/周。各组大鼠经实验在运动组最后一次运动后24h取血和心脏,检测VEGF含量,运用RT-PCR和WesternBlotting技术检测心肌VEGFmRNA和蛋白表达量。结果:血清VEGF含量随缺氧程度的加深有逐渐下降的趋势,且HEH组下降最为显著(P﹤0.01);RT-PCR和Western Blotting心肌VEGFmRNA和蛋白结果随缺氧程度的加深表达量呈逐渐升高趋势。结论:(1)低氧、运动以及低氧运动都能使血清VEGF含量减少,而此时心肌VEGF基因和蛋白表达均增强。推测是肌组织对循环中VEGF的摄取、利用增加,减少了血清VEGF含量;(2)VEGF的基因和蛋白表达程度与缺氧刺激程度关系密切;(3)缺氧相关因子含量和表达量的变化可作为机体对缺氧适应能力评价的指标。     

加昧四物汤对SHR心肌组织基因表达谱的影响

本文观察加味四物汤对自发性高血压大鼠（SHR）的心肌组织基因表达谱的影响。提取实验组和对照组SHR心肌组织RNA,用Cy-5、Cy-3逆转录荧光标记制作cDNA探针与表达谱基因芯片杂交,Scan Array4000扫描仪扫描杂交信号荧光强度,ImaGENE3．0软件分析扫描结果,筛选比率在0．5至2．0之间非差异表达基因和比率在0．5到2．0范围之外差异表达基因。结果表明阳性基因重叠有18条,其中高表达的基因有4条,低表达的有14条。该方作用靶点较多,可上调或下调SHR的某些与生物酶、血管活性物质、心肌纤维化、脂肪酸代谢有关基因的表达,这可能是其产生药理作用的重要因素。     

圣脑康丸对高血压大鼠降压、调脂的作用研究

探讨圣脑康丸(SNKP)对高血压模型大鼠血压、血脂的调节及对主要器官的保护作用,增加该组方的适应症以扩大其临床应用范围。给予自发性高血压大鼠(SHR)SNKP,连续治疗8周,用无创血压测量仪经鼠尾测量血压;采用全自动生化分析仪测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-TC)和高密度脂蛋白(HDL-TC);采用玻片法测定凝血时间,用吸收分光光度法血清离子,并统计脏器指数。自SNKP治疗5周起,大鼠收缩压和舒张压均不同程度的降低,对心率有一定调节作用;8周后TC,LDL-TC及TG的含量明显降低,HDL-TC显著升高,凝血时间延长,血清钠钾比和钙磷比均降低,左心室重量指数和左心室厚度降低,逆转高血压引起的心脏指数升高。SNKP能明显降低SHR大鼠血压,调节血脂,提示心脏有保护作用。     

肾透明细胞癌COX-2、VEGF表达及其相关性研究

目的 探讨肾透明细胞癌（CRCC）的环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）表达及互相之间的关系。方法 收集经手术病理证实的CRCC石蜡包埋切片32例和正常肾组织切片10例,采用免疫组化S-P法检测COX-2、VEGF表达。结果 CRCC组中COX-2、VEGF表达明显高于正常肾组织组（P〈0．01）;CRCC的COX-2、VEGF两者呈正相关（相关系数为0．609,P〈0．01）。结论 COX-2主要通过促进肿瘤新生血管形成等机制参与CRCC的发生和发展过程,为CRCC临床诊断、治疗和预后判断提供了新思路。     

急性白血病患者血清VEGF水平与临床关系的研究

通过检测AL患者血清中VEGF的含量,探讨AL患者血清VEGF含量变化与治疗疗效的关系。使用ELISA法检测42例AL患者治疗前后血清VEGF水平。其中,对25例初治AL患者治疗前后、10例复发AL患者复发前后、7例难治AL患者及AL患者各亚型VEGF水平进行分析并与正常对照组比较,同时对VEGF水平与骨髓涂片有核细胞中原始幼稚细胞数及其它临床化验指标之间的相关性进行分析。所有数据均采用SPSS13.0统计软件分析处理。1）初治AL患者治疗前血清VEGF水平（109.60±36.81）pg/mL,明显高于对照组（59.45±20.20）pg/mL,差异有统计学意义（P〈0.01）。AL患者完全缓解CR组VEGF水平（78.87±17.66）pg/mL,与对照组无明显差异（P〉0.05）。AL患者CR组化疗前血清VEGF水平（101.09±32.44）pg/mL,未完全缓解NR组化疗前血清VEGF水平（131.48±40.76）pg/mL,NR组高于CR组,但差异不显著（t=1.96,P〉0.05）;2）复发AL患者完全缓解及复发后VEGF水平分别为（98.84±24.47）pg/mL和（133.48±60.96）pg/mL,差异不显著（t=1.82,P〉0.05）;3）难治AL组VEGF水平（125.16±54.45）pg/mL,明显高于对照组和初治组CR期AL患者（P〈0.01）;4）VEGF水平与骨髓中白血病细胞数正相关（r=0.52,P〈0.01）,与患者的年龄、FAB分型、外周血白细胞计数及血红蛋白含量均无相关。初治AL患者血清VEGF水平明显高于对照组,完全缓解后恢复至接近正常,复发时再次升高,难治者VEGF水平比初治者明显增高。外周血VEGF水平与白血病治疗疗效相关,检测VEGF对AL患者判断病情、预测复发、指导治疗有一定意义。     

红景天苷上调大鼠心肌梗死后心肌组织VEGF的表达

目的:探讨红景天苷对大鼠心肌梗死后心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控作用及其可能机制。方法:建立大鼠心梗模型后,随机分为模型组、红景天苷3个不同剂量组,每组8只大鼠,另设假手术组8只。术后48 h,红景天苷组分别给予低、中、高,即10,20,40 mg·(kg·d)-1灌胃;模型组和假手术组给予生理盐水20 ml·(kg·d)-1灌胃。4周后处死大鼠,取大鼠心肌组织,反转录PCR(RT-PCR)法测定VEGF mRNA的表达。应用免疫组化和免疫印迹法分析左心室心肌组织VEGF蛋白的表达情况。结果:RT-PCR结果表明,和模型组相比,红景天苷各剂量组VEGF mRNA的表达均明显升高(P<0.01)。免疫组化和免疫印迹分析结果表明,和模型组相比,红景天苷各剂量组心肌组织胞浆中VEGF蛋白的表达均显著升高(P<0.01)。结论:红景天苷通过上调VEGF的表达而促大鼠心肌梗死后心肌组织的血管新生。     

复方苦豆子对自发性高血压大鼠血压及血清NO含量的影响

目的:探讨复方苦豆子(CK)对自发性高血压大鼠(SHR)血压及血清一氧化氮(NO)含量的影响。方法:42只SHR大鼠随机分为5组,SHR空白对照组(SHR组,n=8),CK高剂量组(CK-H组,n=8),CK中剂量组(CK-M组,n=9),CK低剂量组(CK-L组,n=9)及卡托普利组(Cap组,n=8)。另取8只Wister大鼠设为正常对照组(Wister组)。每日灌药一次,连续8周。根据体重随时调整给药量。观察药物对模型动物收缩压及血清NO含量的影响。结果:CK对模型动物有明显的降压作用,CK-H、M组与SHR组相比具有显著性差异(P<0.01);CK能升高模型动物血清NO含量,与SHR组相比,各组均有显著性差异(P<0.05),并呈一定的量效关系。结论:CK具有抗高血压作用,其作用可能与促进血清中的NO合成与释放有关。     

乳铁蛋白对口腔癌细胞中VEGF和bFGF表达的影响

目的探讨乳铁蛋白对口腔癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响.方法选用人口腔鳞癌细胞系CAL-27,分为0.006,0.013,0.025,0.050 g/L重组人乳铁蛋白实验组和空白对照组.应用RT-PCR法检测VEGF和b FGF mRNA表达水平;应用Western Blot法检测VEGF和b FGF蛋白表达水平.结果 CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF mRNA均随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF和b FGF mRNA表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF蛋白产物随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF,b FGF蛋白表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论乳铁蛋白可有效抑制口腔癌细胞系CAL-27细胞中VEGF,b FGF的转录和表达,进而抑制血管生成,可作为乳铁蛋白抗口腔癌的机制之一.     

鼠巨细胞病毒升高血压并引起血管平滑肌的增殖重塑

目的通过构建鼠巨细胞病毒(MCMV)腹腔感染小鼠模型,探讨鼠MCMV与血管平滑肌增殖重塑的关系。方法通过MCMV腹腔感染7月龄C57BL/6J小鼠模型,将C57BL/6J小鼠分为对照组与实验组(MCMV感染组),每组10只;在9月龄及12月龄时使用颈动脉测压比较两组血压变化情况,并分别留取胸主动脉组织切片进行HE、Masson染色,观察小鼠主动脉重塑及纤维化程度,利用image pro-plus软件计算主动脉胶原面积占全部面积比值,通过Western Blot检测血管重塑蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)、细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果 MCMV感染组小鼠血压升高,胸主动脉中膜增厚增加,胸主动脉胶原面积百分比增加,血管重塑蛋白由收缩表型向合成表型转化。结论 MCMV感染可引起小鼠血压升高,并导致胸主动脉重塑。     

2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响

为探讨正常血压Wistar大鼠(Wistar rat,WR)和自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive rat,SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察2-氨基乙基二苯硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。应用全细胞膜片钳技术方法,观察2-APB对WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果显示,(1)SHR收缩压明显高于正常WR,差异有统计学意义(P0.01)。(2)SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput高于WR,差异有统计学意义(P0.05)。(3)2-APB可以浓度依赖性的降低脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput(或者增加Rinput)。(4)2-APB抑制WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞Ginput的IC50分别为0.21μmol/L和0.83μmol/L,差异有统计学意义(P0.05)。(5)2-APB浓度≥100μmol/L时,WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput或Rinput与单个平滑肌细胞十分接近。由此可知,SHR较WR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接耦联力增强,2-APB可以浓度依赖地抑制WR和SHR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接,且对SHR的抑制效力较强。     

腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1,KDR转录抑制血管形成

本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明,Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR均可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的FLT-1mRNA和KDR mRNA水平.与对照组相比,FLT-1的mRNA水平下降为40%,KDR的mRNA水平下降为52%.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞增殖均有干扰作用,加入病毒9 d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为28×104/μL,Ad H1-siRNA/KDR干扰组为21.5×104/μL.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管均有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为10.25条,实验组Ad H1-siRNA/KDR每HPF形成微血管数量为7条.证明Ad H1-siRNA/FLT-1,Ad H1-siRNA/KDR均可干扰血管形成.     

结肠癌患者血清中IL-8和VEGF的检测及临床意义

目的探讨白介素-8（IL-8）和血管内皮生长因子（VEGF）血清水平与结肠癌的关系．方法选择结肠癌住院患者64例,所有病例均经病理检查确诊．用ELISA法测定结肠癌患者术前、术后与健康者血清中IL-8和VEGF含量,采用方差分析进行组间两两比较．结果结肠癌患者血清IL-8和VEGF含量明显高于正常对照组（P〈0．05）,DukesC,D期结肠癌患者血清IL-8和VEGF含量明显高于A,B期（P〈0．05）;肿瘤根治术后血清IL-8和VEGF含量较术前明显降低（P〈0．05）,但仍高于正常对照组（P〈0．05）．结论检测血清IL-8和VEGF含量对于结肠癌病情估计和预后判断有重要意义．     

VEGF纳米抗体的筛选、表达及特异性检测

血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异性的促血管内皮细胞生长因子,与肿瘤侵袭、转移、预后和复发密切相关。本研究为表达筛选与VEGF具有亲和特异性的纳米抗体,首先利用VEGF免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,构建噬菌体文库;并多次淘洗筛选到与VEGF有亲和力的克隆,筛选到10个与VEGF有亲和力的VHH基因片段。然后通过软件分析其亲水性、分子质量等理化性质,发现这10个Nb_VEGF蛋白均为亲水性蛋白,其分子质量在20.1～20.7 kDa之间。同时在大肠杆菌中重组表达这10个抗体蛋白,经Ni金属螯合亲和层析纯化后的Nb_VEGF的蛋白纯度均大于80%。最后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测蛋白的抗原特异性和亲和力。结果表明:有3个纳米抗体Nb_VEGF-3、Nb_VEGF-7和Nb_VEGF-10能与VEGF特异性结合,且Nb_VEGF-3的亲和力与阳性对照一致,其他纳米抗体均无VEGF抗性。本研究成功筛选并表达了3个具有VEGF特异性的纳米抗体,且其中Nb<...     

鱼油饲料对自发性高血压大鼠血压血脂心肌收缩力及动作电位的影响

雄性8个月龄自发性高血压大鼠20只,其遗传性高血压及心肌肥大已稳定形成。对照组10只,饲标准饲料,连续80天。实验组10只动物饲混有10％鱼油(C_(20):5n-3,12-20％)的标准饲料80天。每周测量大鼠尾部血压、心率两次。实验开始后第20天,实验组动脉收缩压从210±6mmHg下降到190±10mmHg。此后60天内,稳定在185±10mmHg,比原血压水平降低12％(P<0.05)。对照组的血压,在80天内稳定在210±15mmHg。实验组总胆固醇为73±9mg/dl,较对照组(108±12mg/dl)降低32％(P<0.05);甘油三酯为105±24mg/dl,较对照组(220±58mg/dl)降低51％(P<0.06)。 用标准微电极和张力换能器在左、右心室乳头肌上同时记录动作电位和等长收缩力。结果表明,实验组左心室乳头肌APD_(50)(83±11.2msec)较对照组(112±10.8msec)缩短22％(P<0.05)。APA、RP和APD_(90)没有显著性改变。值得注意的是,尽管统计学上无显著性差异,但实验组的V_(max)较对照组有降低的趋势。右心室乳头肌AP各参数在两组间无明显差异。两组动物心室乳头肌等长收缩力峰值及达峰值的时程也无明显差别。 以上结果提示,10％鱼油对SHR有降低血压,降低血液胆固醇及明显降低甘油三酯的作用。使肥大心肌APD_(50)缩短,对心肌收缩力各参数未见明显影响。     

黄芪对两肾一夹高血压大鼠肾脏AngⅡ水平及血压的影响

观察两肾一夹(2K1C)高血压大鼠血压、肾脏血管紧张素II(AngⅡ)的变化。了解甘肃定西黄芪对大鼠肾脏AngⅡ水平的影响,并观察黄芪的降压效果。40只♂Wistar大鼠随机分4组:正常对照组(n=10);2K1C高血压组(n=10);2K1C+黄芪(20g/kg·d)组(n=10);2K1C+黄芪(10g/kg·d)组(n=10)。用放射免疫分析法测定肾脏组织局部AngⅡ水平,鼠尾动脉容积法测量大鼠收缩压,统计。1)正常对照组肾脏组织局部AngⅡ水平低于其他各组(380.21±58.21 vs 956.99±170.53,657.94±90.22,814.57±102.60;P=0.000),2K1C+黄芪(20g/kg·d)组血浆AngⅡ水平低于2K1C高血压组;2)2K1C高血压大鼠血压较各组均升高(P=0.000),2K1C+黄芪治疗组血压较2K1C高血压组均有不同程度降低(P=0.000),2K1C+黄芪(20g/kg·d,10g/kg·d)两组间血压差异无统计学意义(P=0.926)。2K1C高血压大鼠肾脏组织中AngⅡ水平升高,2K1C+黄芪组血浆AngⅡ水平有所下降,黄芪具有良好降压效果且呈剂量依赖性。     

新辅助化疗对子宫内膜癌患者血清VEGF及MMP-9的影响

目的探讨新辅助化疗对子宫内膜癌患者疗效及血清VEGF及MMP-9的影响.方法将84例子宫内膜癌患者随机分为两组,研究组患者术前使用新辅助化疗,术后常规化疗,对照组患者术后常规化疗.比较两组患者治疗前后血清VEGF、MMP-9、肿瘤标记物CA125及CA19-9的变化,观察手术时长和术中失血量、术后18个月内两组患者的复发及生存情况,进行比较分析.结果研究组治疗后血清VEGF,MMP-9及CA125的水平明显低于对照组(P0. 05).术后18个月,研究组复发率为11. 9%,对照组复发率为26. 1%,研究组复发率明显低于对照组(P0. 05),两组术后生存率均为100%.结论子宫内膜癌患者实施新辅助化疗后再行手术,血清VEGF及MMP-9水平降低更显著,术后复发率更低.     

再生障碍性贫血中VEGF和MVD的相关性研究

目的：研究再生障碍性贫血患者血管内皮生长因子（VEGF）的表达,微血管的生成与疾病病理临床改变的关系。方法：用免疫组织化学染色方法检测35g4再生障碍性贫血患者和35例正常人的骨髓蜡块的VEGF表达情况,并用CD34标记血管内皮细胞,对VEGF和微血管密度（MVD）的表达进行平均光密度测定。结果：再生障碍性贫血骨髓的VEGF表达低下,MVD也降低,与正常对照组比较有显著差异（P〈0．05）。VEGF和MVD的表达呈显著正相关（r=0．988,P〈0．01）。结论：VEGF在再生障碍性贫血中的下调可能和MVD的改变有着密切的关系,针对血管生成的治疗可成为再生障碍性贫血治疗的另一新途径。     

树鼩VEGF全长编码序列的克隆及分子特征分析

树鼩作为研究人类疾病的良好动物模型,近年来引起广泛关注.研究采用RT-PCR技术,从树鼩的肺组织中克隆到血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的编码序列,并对其三级结构进行了预测.结果显示该基因开放阅读框全长645 bp,编码214个氨基酸.序列比对及三级结构预测显示,树鼩VEGF与人的VEGF有较高的相似性,预示树鼩可能会是研究人类血管相关疾病的良好模型.     

手术前后血管内皮生长因子、血小板活化因子水平与非小细胞肺癌的关系

目的：探讨非小细胞肺癌患者手术前、后血清血管内皮生长因子（VEGF）、外周血血小板活化标志物的动态变化规律及其与非小细胞肺癌（NSCLC）的关系。方法：用EUSA法检测120例非小细胞肺癌患者手术前、后血清VEGF水平和60例健康体检者VEGF水平；同时用流式细胞术（FCM）检测其外周血血小板活化标志物水平。结果：①NSCLC患者手术前、后VEGF水平和血小板活化标志物水平均显著高于正常对照组（P〈0．01）；②NSCLC患者手术后第7天血清VEGF水平显著高于术前和术后第1天水平（P〈0．01）；而血小板活化标志粉水平则相反；③NSCLC患者血清VEGF和外周血血小板活化标志物水平与有无淋巴结转移和TNM分期有密切关系（P〈0．05）。结论：NSCLC患者血清中VEGF和外周血血小板活化标志物水平都升高。且与NSCLC的分期有密切关系．它们可作为动态检测NSCLC患者病情进展、判断预后的拳考指标。