人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆

用新鲜的人绒毛膜组织提取总RNA,并通过逆转录反应合成cDNA第一链,利用人工合成的一对寡核苷酸引物,采用PCR技术特异性地扩增人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG—β)cDNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为500bp,与预计的片段长度相符,将此片段刊用T—A载体克隆至PCRⅡ质粒上并进行全序列分析,结果显示克隆片段包含hCG—βcDNA5’端和3’端的非编码区及完整的编码区。     

人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆初步报告

用新鲜的人绒毛膜组织，抽提组织总ＲＮＡ并通过逆转录反应合成ｃＤＮＡ第一链。利用人工合成的一对寡核苷酸引物，采用ＰＣＲ技术特异性地扩增ｈＣＧ－β ｃＤＮＡ。琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为５００ｂｐ，同预计的片段长度相符。将此片段利用Ｔ－Ａ载体克隆至ＰＣＲⅡ质粒上并进行全序列分析，结果显示克隆片段包含ｈＣＧ－β ｃＤＮＡ５＇端和３＇端非编码区及完整的编码区。     

人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克隆、表达及纯化

目的 从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素α亚基(HCGα)cDNA，构建表达载体并进行了表达、纯化，为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用作前期准备。方法 提取新鲜人绒毛膜组织总RNA，利用RT—PCR技术扩增出HCGα cDNA，克隆于表达载体PGEX4T-1，酶切鉴定后测序，测序证实序列正确，并转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达融合蛋白GST-HCGα。超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化，沉淀包涵体经变性：透析复性等处理，用SDS—PAGE电泳、Western印迹分析产物。结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示RT—PCR扩增片段大小约280bp，同预计片段相符。SDS—PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有36kd左右的一条明显新增条带，与预期分子量相符，Western印迹证实此结果。融合蛋白主要以包涵体形式存在。结论 成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGα cDNA，克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，表达产物有较好的免疫特异性。     

重组人绒毛膜促性腺激素β-亚基(hCGβ)抗血清对hCG生物活性能力的影响

该文将重组hCGβ免疫C57BL小鼠，观察了抗hCG抗血清对hCG诱发的睾丸间质细胞分泌睾酮和雌幼SD大鼠子宫增重的影响。结果表明：重组hCGβ抗血清可不同程度抑制hCG诱发的睾丸间质细胞分泌睾酮和雌幼sn大鼠子宫增重，提示重组hCGβ抗血清与hCG形成的复合物缺乏生物活性，重组hCGβ抗血清具有中和hCG的生物活性能力。     

人源分子佐剂C3d3促进人免疫活性细胞抗绒毛膜促性腺激素β亚基的免疫效应

目的探讨3个拷贝人源分子佐剂C3d(hC3d3)与绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原免疫原性的影响。方法用L-亮氨酸甲基酯(L- LME)或B细胞磁珠阴性分离试剂盒对人PBMC进行细胞分离纯化;实验分成B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞4组。分别应用1、10及100 nmol／L不同浓度的hCGβ、hCGβ-hC3d3及美洲商陆(PWM)等抗原体外作用于以上细胞10～12 d,采用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞的增殖情况;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中抗hCGβ抗体的分泌水平;而酶联免疫斑点法(ELISpot)可测定各种抗原刺激后特异抗体分泌的细胞数量。结果与hCGβ相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性。应用100 nmol／L的不同抗原培养12 d后,取培养上清液进行ELISA检测,经hCGβ及PWM刺激后,上清液中均未检测到抗hCGβ特异性抗体;经hCGβ-hC3d3培养后则在B T细胞及PBMC组中见低水平抗hCGβ抗体。采用ELISpot法分析抗hCGβ特异性抗体生成细胞,经hCGβ刺激的细胞仅有数个散在的阳性细胞;而经hCGβ-hC3d3刺激后,阳性细胞明显增多(P<0．05)。结论hC3d3明显促进人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性。     

人内皮抑素cDNA克隆和初步表达

目的：克隆人内皮抑素基因,获得初步表达产物,为进一步研究打下基础,方法：用RT－PCR方法从中国汉族人正常肝组织扩增出内皮抑素cDNA,T／A插入puCm-T载体,测序,,再插入表达载体pKPL-3a,转化大肠杆菌POP2136,42度诱导表达,SDS－PAGE分析表达蛋白,结果：中国人内皮抑素cDNA开放阅读框架全长552bp,编码184个氨基酸,其85位谷氨酸和98位天冬氨酸密码子的第三位碱基出现改变,但编码的氨基酸不变,结论：构建了中国人内皮抑素的克隆载体和表达载体,初步表达了约20kD人重组内皮抑素。     

血清人绒毛膜促性腺激素β亚基、孕酮、甲胎蛋白、肌酸激酶及肌酸激酶／孕酮值在异位妊娠早期诊断中的价值

目的 探讨血清人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-HCG)、孕酮(P)、甲胎蛋白(AFP)、肌酸激酶(CK)及CK/P在异位妊娠早期诊断中的价值.方法 取93例异位妊娠患者(异位妊娠组)和40 名宫内早孕妇女(正常早孕组)静脉血,采用化学发光免疫分析法测定血清β-HCG、P、AFP水平,采用酶动力分析法测定CK水平.结果 异位妊娠组的血清β-HCG、P的常用对数值分别为1.694-0.70和1.24士0.33,显著低于正常早孕组的3.104-0.57和1.815=0.18(P值分别＜0.05、0.01);异位妊娠组的血清AFP、CK/P的常用对数值分别为0.32±0.24和1.68±0.37,显著高于正常早孕组的0.18士0.32和1.14±0.22(P值均＜0.01);异位妊娠组的CK较正常早孕组略有升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血清β-HCG、P及CK/P对异位妊娠的早期诊断具有一定价值.     

人伴侣蛋白CCTβ亚基全长cDNA的分离与鉴定

目的获得人伴侣蛋白CCTβ亚基全长cDNA序列,为进一步研究伴侣蛋白在蛋白质折叠中的功能提供理论依据.方法采用“同源杂交筛选策略”,运用生物信息学方法结合PCR等分子生物学实验技术,从人cD-NA文库中分离目的片段,并测序鉴定.结果从人的睾丸组织cDNA文库中分离出一条新的cDNA片段,将它与计算机拼接的片段整合后,获得一全长为1935bp的序列,该序列含有一个长1680bp的开放阅读框,编码535个氨基酸,并且在其3'末端有典型的PolyA加尾信号.结论基于从该cDNA推导的蛋白质与小鼠的CCTβ亚基氨基酸序列同源度性达97%,由这个新基因所编码的推导蛋白可能就是人的CCTβ亚基.     

人伴侣蛋白CCTβ亚基全长cDNA的分离与鉴定

目的 获得人伴侣蛋白CCTβ亚基全长cDNA序列,为进一步研究伴侣蛋白在蛋白质折叠中的功能提供理论依据。方法 采用“同源杂交筛选策略”,运用生物信息学方法结合PCR等分子生物实验技术,从人cD-NA文库中分离目的片段,并测序鉴定。结果 从人的睾丸组织cDNA文库中分离出一条新的cDNA片段,将它与计算机拼接的片段整合后,获得一全长为1935bp的序列,该序列含有一个长1680bp的的开放阅读框,编码535个氨基酸,并且在其3‘末端有典型的PolyA加尾信号。结论 基于从该cDNA推导的蛋白质与小鼠的CCTβ亚基氨基酸序列同源度性达97%,由这个新基因所编码的推导蛋白可能就是人的CCTβ亚基。     

孕妇血清β-人绒毛膜促性腺激素动态变化的临床意义

目的探讨血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的临床意义。方法将252例孕妇根据临床诊断分为人工流产组、先兆流产组和正常早孕组。采用化学发光免疫分析仪及配套试剂定量测定孕妇血清β-HCG水平。结果先兆流产组、人工流产组和正常早孕组的β-HCG13均增幅分别为（-0．74±0．53）％、（-26．31±12．69）％和（81．92±41．76）％,3组间差异显著（P〈0．01）。结论血清β-HCG水平变化可以反映妊娠状态及预后,对指导诊断和治疗有意义。     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。     

血清人绒毛膜促性腺激素β亚基、孕酮、糖类抗原125、肌酸激酶及肌酸激酶/孕酮值在异位妊娠早期诊断中的应用价值

目的探讨血清人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-HCG)、孕酮(P)、糖类抗原125(CA125)、肌酸激酶(CK)及CK/P值在异位妊娠早期诊断中的应用价值。方法选择临床可疑异位妊娠患者72例作为观察组,正常宫内妊娠72例作为对照组。于治疗前采用化学发光免疫分析法测定血清β-HCG、P及CA125水平,采用酶动力学方法检测CK水平,在血清β-HCG基础上分析多项指标联合检测对早期异位妊娠的诊断价值。结果观察组血清β-HCG、P及CA125水平均显著低于对照组(P<0.01);观察组的CK较对照组略有升高,但差别无统计学意义(P>0.05);观察组的血清CK/P值显著高于对照组(P<0.01)。血清β-HCG、P、CA125及CK/P值4项指标联合检测可将诊断特异度、准确性分别提高至88.9%、91.7%。结论血清β-HCG、P、CA125及CK/P值联合检测可提高异位妊娠的诊断率,成为具有临床应用价值的早期诊断异位妊娠的指标。     

大熊猫核糖体蛋白L10亚基基因的cDNA克隆及序列分析

目的 了解大熊猫(ailuropoda melanoleuca) 核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基RPL10基因的异同. 方法根据已报道的部分哺乳动物RPL10基因的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从大熊猫的肌肉组织总RNA 中对核糖体蛋白亚基RPL10 基因的进行克隆、测序;采用Genescan 软件,对所克隆的基因序列进行氨基酸序列推定;采用ORF finder软件进行DNA 序列的开放阅读框查找;采用DNAMAN Version 6软件,对基因序列和氨基酸序列进行同源性比较;采用Ex2PASy Proteomics Server 软件,进行蛋白质功能位点和生化特性预测分析;采用http://www.imtech.res.in/raghava/apssp2/对蛋白质二级结构进行模拟分析.结果 大熊猫RPL10基因的表达序列长为685 bp,开放阅读框(ORF)为645 bp,编码214个氨基酸的蛋白质,该蛋白的相对分子质量为24.599 7×103,等电点为10.74,含有4个功能位点,分别为:2个蛋白激酶C磷酸化位点,2个N化位点,2个酰胺化位点,1个核糖体蛋白L10e信号位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的人、牛、家犬、褐家鼠、小家鼠有很高的相似性,其表达序列同源性分别为92.4%、92.4%、97.21%、88.84%与89.61%;其编码的氨基酸序列除与牛的同源性为99.07%外,与其他哺乳动物同源性为100%.而且,其蛋白质的高级结构除牛外其他物种也具有一致性.结论 无论是从RPL10基因的序列、结构、功能位点,还是从其编码的氨基酸的序列和二级结构进行分析,都表明大熊猫的RPL10基因和已报道的哺乳动物的RPL10基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性.     

人卵巢颗粒细胞雌激素β型受体cDNA的克隆和序列分析

目的 测定和分析人卵巢颗粒细胞中雌激素β型受体（ＥＲβ）ｃＤＮＡ的核苷酸序列结构。方法 采用ＤＭＥＭ培养基、以ＰＥＲＣＯＬＬ方法从人体外受精卵泡液中制备颗粒细胞。根据ＴＲｌｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ试剂盒方法抽提ＲＮＡ,并在Ｄｉｓｐｏｃｏｌｕｍｎ柱中用寡聚（ｄＴ）纯化ｍＲＮＡ。用ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐ＾ＴＭⅡＲＴ试剂盒反转录ＰＣＲ合成ｃＤＮＡ。扩增产物与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕ     

重组人蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２曾称酪蛋白激酶２（ｃａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅ２）是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的在真核细胞中普遍存在的ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶［１］。在进化过程中ＣＫ２的各亚基均表现出高度保守性,属于一种看家酶。该酶在许多...     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的 :阐明人源性肝细胞生长因子 (HDSSF)的本质 ,为进一步基因克隆奠定基础。方法 :以简并PCR扩增获取目的基因片断 ;杂交筛选人胎肝cDNA文库 ;末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果 :简并PCR扩增出接近HDSSF分子量 6 0 0bp片断 ;人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑 ;测定了HDSSF基因序列 ,其cDNA链为 74 8bp ,含有 5 94bp的完整开放读码框架和 5′及 3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有 1 98个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论 :本研究成功获得目的基因HDSSF克隆 ,人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础     

孕酮和β亚单位人绒毛膜促性腺激素水平与先兆流产保胎结局的关系分析

目的探讨孕酮和β亚单位人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平与先兆流产保胎结局的关系。方法 105例先兆流产保胎者,根据保胎结局将其分为保胎成功组(A组,75例)和保胎失败组(B组30例),并选择同期40例健康产妇设为对照组(C组)。分析3组产妇孕酮和β-HCG水平。结果 C组孕酮值和β-HCG显著高于A组和B组(均P<0.05),A组均显著高于B组(均P<0.05)。孕酮值和β-HCG是先兆流产患者的保护性因素(均P<0.05),孕酮值和β-HCG与先兆流产保胎结局呈负相关(r=-0.845、-0.819均P<0.05)。两者联合检测预测先兆流产曲线下面积为0.715灵敏度为82.65%特异度为94.32%。结论孕酮与β-HCG含量与先兆流产保胎不良结局呈负相关是保胎治疗的保护性因素联合检测孕酮与β-HCG可有效预测先兆流产保胎不良结局的发生。     

探讨血清β-人绒毛膜促性腺激素检测前估值的意义

目的探讨检测前估值对降低血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotro-phin,β-HCG）重检率的意义。方法采用3种不同的方式对2009年7月来成都市妇幼保健院申请检测血清β-HCG的279例患者血清进行检测,结合临床资料对比分析。结果观察对象中直接检测组重检率64.2%;试纸条组重检率2.5%;停经天数组重检率7.5%。结论预先采用目测胶体金法人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,HCG）试纸条检测线强度后估值及结合停经天数进行估值能有效降低血清β-HCG的重检率。     

蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与序列分析

目的构建人蛋白激酶CK2α重组质粒,研究CK2结构和功能.方法采用RT-PCR、定向克隆和DNA测序方法进行实验.结果通过BT-PCR从Hep-3B肝癌细胞中获得人蛋白激酶CK2α(Protein Kinase 2α)亚基编码区1136bp的cDNA片段,将扩增基因通过粘端连接克隆到pUCm-T载体中,用PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm-T-CK2α.通过对CK2α编码区cDNA序列测序证实其与GeneBank中登记号为NM-01895的序列一致.结论成功构建了重组质粒pUCm-T-CK2α,为利用CK2αcDNA作为探针进行深入研究奠定了基础.