曲古抑菌素A对甲状腺鳞癌SW579细胞株p53和p21表达的影响

目的观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及p53和p21表达的影响,进而探讨TSA抗甲状腺癌的作用机制。方法体外培养SW579细胞,实验分为DMSO组、TSA组(终浓度为50、100、200、400 nmol/L),采用MTT比色法测定细胞增殖活性;用RT-PCR方法检测SW579细胞p53及p21的mRNA表达;用Western blot方法检测SW579细胞p53及p21的蛋白表达。结果 MTT结果显示,TSA可明显抑制SW579的增殖,并呈剂量依赖性。RT-PCR与Western blot检测结果表明,与未加TSA组比较,TSA组随着浓度的逐渐加大,p21 mRNA和蛋白表达水平明显升高;p53 mRNA表达不变,而p53蛋白表达水平上调。结论 TSA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性地增殖抑制作用,其机制可能与TSA提高SW579细胞p53的表达,进而再上调p21的表达有关。     

曲古抑菌素A对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的探讨曲古抑菌素A（TSA）对乳腺癌细胞株增殖的影响。方法培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231,用组不同浓度TSA分别作用于细胞,于24、48、72、96h用MTT比色法观察细胞生长情况,流式细胞术检测S期细胞的比例和周期素（Cyclin）D1、A2表达。结果72h内和4μmol／L的浓度范围内,乳腺癌细胞生长受到抑制,并有一定的时效关系;TSA作用后周期素Cyclin A2表达下降,Cyclin D1表达上升（P均〈0．05）。结论TSA能抑制乳腺癌细胞生长,周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了抑制剂对细胞增殖周期的调控。     

四溴苯三唑对甲状腺鳞癌SW579细胞凋亡的影响

目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组细胞均在培养24 h后加药,加入不同浓度的TBB,使其终浓度分别为12.5、25、50、75、100μmol/L。培养到一定时间后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达。结果低浓度TBB组(12.5、25、50μmol/L)肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势;高浓度组(75、100μmol/L)细胞生长密度较对照组明显降低,与低浓度组相比,向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示,实验组细胞均出现显著的生长抑制作用,且呈剂量依赖性。实验组随着TBB药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加,细胞滞留在G1期。RT-PCR方法检测发现实验组细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平上调。结论 TBB可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其机制可能与上调Caspase-3基因表达,激活Caspase途径有关。     

GPI—PLD过表达对甲状腺癌细胞株SW579生物学特征的影响

目的研究GPI—PLD基因转染并过度表达对SW579细胞的影响。方法用脂质体转染法将GPI—PLD真核表达载体pcDNA3．1（＋）／GPI—PLD转入SW579细胞,以未转染的SW579细胞及转染空载体pcDNA3．1（＋）的细胞为对照,筛选出阳性细胞克隆。以胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI—PLD活性,RT—PCR法确定GPI—PLDmRNA表达水平。细胞计数绘制生长曲线,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒（CDC）杀伤率,ELISA检测癌胚抗原（CEA）的表达情况。结果阳性细胞克隆GPI—PLD酶活性水平比对照组升高约3倍,GPI—PLDmRNA表达水平约增加6倍;GPI—PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强。结论成功将GPI—PLD基因转染入SW579细胞,并在细胞中稳定表达。GPI—PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性。     

曲古抑菌素A对胃癌细胞生长的抑制作用

目的: 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A, TSA)对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制作用, 证实该作用是通过促使细胞凋亡而实现的.方法: 用不同浓度(0.2、0.4和0.8 mg/L)和不同作用时间(24、48和72 h)的TSA作用于SGC-7901细胞, 采用MTT法观察TSA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;通过透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果: TSA可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,且这种作用呈时间和剂量依赖关系. 当TSA作用浓度分别为0.2、0.4和0.8 mg/L时, 与SGC-7901细胞均作用72 h, TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为25%±1.2%, 45%±1.4%和73%±1.7%, 各组均与TSA 0.2 mg/L组比较, 差异显著( P<0.05). 当0.8 mg/L TSA分别与SGC-7901细胞作用24、48和72 h, TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为21%±1.1%, 37%±2.0%和73%±1.7%, 各组均与TSA作用24 h组比较, 差异显著( P<0.05). TSA可延缓细胞周期, 具有明显的诱导细胞凋亡作用. 电镜下见细胞染色质凝聚成段片状, 细胞核固缩断裂, 核膜破裂, 细胞器及胞膜自溶, 凋亡小体形成.结论: TSA通过诱导细胞周期阻止和凋亡来抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长, 且这种作用呈时间和剂量依赖性, 为TSA用于胃癌的治疗提供理论依据.     

曲古抑菌素A对CNE2鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究曲古抑菌素A（TSA）在体外对人鼻咽癌细胞的影响,为鼻咽癌的药物治疗提供依据。方法将鼻咽癌CNE2细胞经0.125%胰酶处理制成细胞悬液,培养24 h。试验设TSA1～TSA5组及对照组,TSA1～TSA5组分别加入TSA200、300、400、500、600 nmol/L,对照组加入等量生理盐水;6、12、24、36 h后MTT法计算细胞抑制率。将CNE2细胞接种于25 ml培养瓶中,分为TSA1～TSA3组及对照组,TSA1～TSA3组分别加入300、400、500nmol/L TSA处理24 h;对照组加入等量生理盐水;流式细胞仪检测分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 TSA可明显抑制CNE2细胞生长,同时点细胞抑制率对照组〈TSA1组〈TSA2组〈TSA3组〈TSA4组〈TSA5组,并呈剂量时间效应关系,P均〈0.05。TSA干预后CNE2细胞G2/M期细胞明显增多,出现G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显升高,且呈浓度依赖性。结论 TSA能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有G2/M期阻滞效应,是治疗鼻咽癌的潜在药物。     

曲古抑菌素A对恶性淋巴瘤抗癌作用的研究

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)为新一代具有广泛应用前景的抗肿瘤药，可抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞分化和凋亡，并可发挥免疫调节作用。曲古抑菌素A(TSA)源自链霉菌代谢产物，最先作为抗真菌药物使用，近来研究表明其具有明显的HDACI活性，对肝癌、胃癌、口腔癌及神经母细胞瘤等肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用，然而有关其对淋巴瘤细胞生长作用的报道较少。本实验主要     

SBHL对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响及机制

目的为澳洲茄胺盐酸盐（SBHL）治疗甲状腺鳞癌提供理论依据。方法将1×10-5、5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3mol/L的SBHL作用于甲状腺鳞癌SW579细胞,分别于作用24、48、72、96 h后用MTT比色法观察增殖情况;用流式细胞仪分析细胞周期;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5～1×10-3mol/LSBHL作用后SW579细胞增殖明显受抑,呈浓度依赖性;细胞周期阻滞于G1期,随着SBHL浓度的增加,S期细胞逐渐降低,G1期细胞逐渐增加;端粒酶活性明显降低。结论 SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长具有明显抑制作用,其机制可能与下调端粒酶活性有关。     

胆囊结石对慢性胆囊炎组织学改变及p53,p21 和 C-myc表达的影响

多数作者认为胆囊癌与慢性胆囊炎和胆石症有关,也有人认为胆结石与胆囊癌的关系不大,在慢性胆囊炎中,肠上皮化生被认为是癌前病变。我们通过对慢性胆囊炎常规病理组织切片(HE)染色观察肠上皮化生、不典型增生的情况和免疫组化检测p53,p21与C-myc蛋白的表达,探讨胆囊结石与慢性胆囊炎肠上皮化生、不典型增生及以上3种蛋白表达的关系,推测胆囊结石在慢性胆囊炎向胆囊癌发展过程中的作用。 1 材料和方法 1.1 材料所有标本均为本院外科1983/1997年手术切除的、术后病理诊断为慢性胆囊炎的病例共1339例,其中不伴结石的慢性胆囊炎(下简称单纯型)553例,合并胆囊结石786例,     

p53和p21在大肠肿瘤中的表达及其临床意义

ｐ５３和ｐ２１在大肠肿瘤中的表达及其临床意义顾凯华汪鸿志祝庆孚作者采用ＳＰＴＭ免疫组化法，对大肠癌及腺瘤组织进行ｒａｓ基因产物ｐ５３、ｐ２１检测，以探讨ｐ５３和ｐ２１在大肠癌发生中的作用及其临床意义。材料与方法１．标本：从结肠镜活检获得１０名正常人大...     

ATRA对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响

目的观察全反式维甲酸（ATRA）对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响,以探讨其抑癌机制。方法分别以终浓度为10-7、10-6、5×10-6、10-5mol/L的ATRA作用SW579细胞株,对照组加入5μl无水乙醇,各组细胞均在培养24 h后加药。继续培养48 h,RT-PCR、Western blot检测SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb mRNA及其蛋白的表达。结果 ATRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4、Rb mRNA表达水平没有明显变化;CyclinD1的表达明显下调;Western blot检测结果表明经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4蛋白表达水平没有明显变化,pRb蛋白的磷酸化水平明显下降,CyclinD1蛋白表达水平明显下降。结论 ATRA在一定浓度范围内可能通过下调甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CyclinD1的表达及Rb蛋白的磷酸化水平抑制细胞增殖。     

p16、p53、p21基因对肺癌细胞增殖的影响

目的 观察肿瘤抑制基因ｐ１６,ｐ５３及细胞周期信赖激酶抑制物ｐ２１基因单独或联合应用时对肺癌细胞增殖的影响。方法 应用十八酰基胺阳离子脂质体介导ｐ１６,ｐ５３,ｐ２１基因单独或共转染到非小细胞肺癌细胞系Ａ５４９和小细胞肺癌细胞系ＳＨ７７,观察转染后１,３,５日该细胞增殖的活力。采用四甲基偶氮唑 盐微量酶反应比色法（ＭＴＴ法）测定吸光度（Ａ）,以检测细胞增殖活力,结果 Ａ５４９细胞系：Ａ均值分别为：     

曲古抑菌素A对乙型肝炎病毒HBx蛋白与组蛋白去乙酰化酶1相互作用的影响

目的 探讨曲古抑菌素A对乙型肝炎病毒HBx蛋白与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)相互作用的影响. 方法 常规分子克隆技术构建HBx蛋白及HDAC1表达载体,Western blot分别验证蛋白质表达;谷胱甘肽转移酶沉降试验及免疫共沉淀技术分别于体内外验证HBx蛋白与HDAC1存在的相互作用. 结果成功构建了HBx蛋白及HDAC1表达载体,体内外实验均证实HBx蛋白与HDACI间存在相互作用,但HDACI抑制剂曲古抑菌素A不影响两者间相互作用.结论 HBx蛋白以曲古抑菌素A非依赖方式与HDAC1存在相互作用.     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡及其对p53、p21和Bcl-2表达的影响

为研究单核细胞源性泡沫细胞凋亡机制,以氧化型低密度脂蛋白诱导人髓系白血病细胞U937凋亡,观察p5 3、p2 1和Bcl- 2的表达。用流式细胞术和DNA断裂分析检测细胞凋亡;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测p5 3、p2 1和Bcl- 2蛋白表达,反转录聚合酶链反应显示p5 3、p2 1和Bcl- 2mRNA表达水平。结果表明氧化型低密度脂蛋白可致U937细胞凋亡,其作用具有浓度效应;氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡过程中,p5 3、p2 1mRNA和蛋白表达增加,Bcl- 2mRNA和蛋白表达减少。提示氧化型低密度脂蛋白可能通过上调p5 3、p2 1基因表达,下调Bcl- 2基因,导致U937细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡及其对p53、p21和Bcl-2表达的影响

为研究单核细胞源性泡沫细胞凋亡机制 ,以氧化型低密度脂蛋白诱导人髓系白血病细胞U937凋亡 ,观察p5 3、p2 1和Bcl- 2的表达。用流式细胞术和DNA断裂分析检测细胞凋亡 ;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测p5 3、p2 1和Bcl- 2蛋白表达 ,反转录聚合酶链反应显示p5 3、p2 1和Bcl- 2mRNA表达水平。结果表明氧化型低密度脂蛋白可致U937细胞凋亡 ,其作用具有浓度效应 ;氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡过程中 ,p5 3、p2 1mRNA和蛋白表达增加 ,Bcl- 2mRNA和蛋白表达减少。提示氧化型低密度脂蛋白可能通过上调p5 3、p2 1基因表达 ,下调Bcl- 2基因 ,导致U937细胞凋亡。     

p21、p53和Bcl-2在贲门癌组织中的表达及意义

在癌细胞凋亡过程中,有多种基因参与调节,如肿瘤抑制基因p21^wafl、突变型p53以及凋亡抑制基因Bcl-2等。2005年1～12月,我们对p21、p53和Bcl-2在40例贲门癌组织中的表达水平进行了检测,并分析其与癌细胞凋亡的相关性。     

p53和Bcl-2蛋白在舌鳞癌组织中的表达及意义

目的 研究p53和Bcl-2蛋白在舌鳞癌和癌前病变中的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测38例舌鳞癌（A组）、20例13腔癌前病变（B组）及10例正常口腔舌上皮组织（C组）中p53和Bcl-2蛋白的表达情况。结果比较A、B、C三组,p53和Bcl-2蛋白的表达在A组与C组、B组与C组之间,P均〈0．05,在A组与B组之间,P〉0．05;ps3蛋白异常表达在淋巴结转移组显著高于无转移组,P〈0．05;Bcl-2蛋白高表达与p53蛋白高表达之间无相关性,P〉0．05。结论p53和Bcl-2蛋白高表达与舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

食管鳞癌中p53与bcl-2的表达及其临床意义

目的 :探讨食管鳞癌中p53和bcl 2的表达情况、相互关系及其临床意义。方法 :应用免疫组化法 (S P)对 1 0 0例食管鳞癌病人的内镜活检标本检测p53和bcl 2的表达。结果 :在癌旁正常鳞状上皮、癌旁不典型增生和癌组织中p53的阳性表达率分别为8.9%、43.6 %和 58.6 % (χ2 =30 .2 ,P <0 .0 1 ) ;bcl 2阳性表达率分别为 6.7%、3 .6 %和 43.0 % (χ2 =57.4,P <0 .0 1 )。p53阳性表达率在不典型增生中已接近癌组织 ,bcl 2在癌旁正常鳞状上皮和不典型增生组织中表达较低 ,在癌组织中表达较高。在分化较好的食管鳞癌中 ,p53的阳性表达率和表达强度等级明显高于bcl 2 ,在低分化癌中 ,p53和bcl 2的阳性表达率和表达强度等级无差异。结论 :p53表达可能是食管鳞癌的早期事件 ,bcl 2表达较晚 ,是癌变的特征。p53和bcl 2表达的相互关系与食管鳞癌的分化程度有关