转化生长因子-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化影响的研究

目的 了解转化生长因子-β1(transforming growth factor-betal，TGF—β1)和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法 体外培养人鼻中隔软骨细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢和^35S-Na2SO4掺入的检测比较不同浓度TGF-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞的增殖以及软骨基质蛋白多糖合成的影响，观察TGF-β1和胰岛素对软骨细胞表型的影响。结果 在15％血清的培养条件下，TGF-β1和胰岛素均能显著促进软骨细胞增殖，且在各自一定的浓度范围内呈量效关系，联合作用效果累加；TGF—β1、TGF—β1和胰岛素联合作用促使软骨基质蛋白多糖的合成量明显提高；TGF-β1使传代软骨细胞去分化提前。结论 一定浓度的TGF—β1、胰岛素和TGF-β1 胰岛素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞具有显著的促增殖作用。     

不同年龄人鼻中隔软骨细胞生物学特性观察

目的观察年龄因素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞生物学特性的影响。方法体外培养不同年龄组人鼻中隔软骨细胞,观察其生物学形态、细胞增殖周期、甲苯胺蓝异染和Ⅱ型胶原的免疫组化染色,并测定35S-Na2SO4掺入量以观察对软骨细胞蛋白多糖合成量的影响,在细胞特性和增殖特征方面进行比较。结果各组间软骨细胞的形态、传代特征及传代数、组织学检测无明显差异,细胞倍增时间随年龄增大而下降,软骨细胞蛋白多糖合成量随体外时间延长而上升,不依赖年龄。结论人鼻中隔软骨细胞生物学特性总体上不依赖年龄,其作为软骨组织工程的潜在种子细胞来源具有广泛的年龄段。     

鼻科学

20010713促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究/黄金中…//耳鼻咽喉一头颈外科一2000,7(5)一29尘一297 目的:研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法,为少、鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据。方法:研究三种培养基(DMEM、F一12、1640)、胰岛素、琼脂和肌昔对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响。结果:164。培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养,胰岛素可保持软骨细胞生长,琼脂可促进软骨细胞表型稳定;在1640培养基条件下,肌昔对软骨细胞的生长无明显的促进作用。图l表2参10(原提要)20010714…     

人鼻中隔软骨细胞培养法的改良及其生物学特性观察

目的 对人鼻中隔软骨细胞培养法进行改良并观察改良法培养的人鼻中隔软骨细胞的生物学特性.方法 采用软骨细胞悬液和软骨块共同培养法体外培养人鼻中隔软骨细胞,对其进行倒置相差显微镜动态观察、甲苯胺蓝异染和Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色,并测定^35S-Na2SO4掺入量以观察软骨细胞蛋白多糖合成量,在细胞表型和功能方面进行鉴定并与单纯细胞悬液培养法比较.结果 改良法获得的人鼻中隔软骨细胞存活率高,量更多,且细胞的生长过程、特殊染色无明显差别,^35S-Na2SO4掺入量与常规法差异无显著性意义（P＞0.05）.结论 软骨细胞悬液和软骨块共同培养法是一种可行的细胞培养法,培养的人鼻中隔软骨细胞生物特性良好.     

促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究

目的：研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法，为人鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据。方法：研究三种培养期（ＤＭＥＭ、Ｆ－１２、１６４０）、胰岛素、琼脂和肌苷对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响。结果：１６４０培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养，胰岛素可保持软骨细胞生长，琼脂可促进软骨细胞表型稳定；在１６４０培养基条件下，肌苷对软骨细胞的生长无明显的促进作用。     

促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究

目的 :研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法 ,为人鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据。方法 :研究三种培养基 (DMEM、F- 12、16 4 0 )、胰岛素、琼脂和肌苷对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响。结果 :16 4 0培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养 ,胰岛素可保持软骨细胞生长 ,琼脂可促进软骨细胞表型稳定 ;在 16 4 0培养基条件下 ,肌苷对软骨细胞的生长无明显的促进作用。     

软骨源性形态发生蛋白1体外诱导骨髓间充质细胞向软骨细胞分化

目的探讨软骨源性形态发生蛋白1（cartilage-derived morphogenetic protein 1,CDMP1）体外诱导骨髓间充质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）向软骨细胞表型分化的影响因素。方法在高密度细胞球培养体系下CDMP1诱导BMSCs向软骨细胞分化,21d后观察诱导后软骨细胞表型的变化,分别用阿新蓝染色方法检测诱导后的细胞球中糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAG）的表达、免疫组化方法检测Ⅱ型胶原的表达来评估BMSCs是否向软骨细胞分化。结果诱导后的细胞团可表达特异软骨基质Ⅱ型胶原与GAG。结论在CDMP1生长因子诱导下,BMSCs体外可向软骨细胞分化。     

耳廓软骨天然生物支架材料的制备及初步研究

目的探讨制备兔耳廓天然软骨细胞外基质材料的新方法,制备适用于组织工程应用的天然生物支架材料.方法①采用多步骤去污剂-酶处理技术抽提兔耳廓软骨细胞制备天然软骨细胞外基质(Nature Extracellular Matrix,NECM),对NECM行HE染色、澳新蓝染色、维多利亚蓝染色、VanGieson染色并进行组织学及扫描电镜观察;②以灰家兔NECM为支架材料和新西兰大白兔耳廓软骨细胞为种子细胞进行体外培养,倒置显微镜下观察其亲水性和对细胞的吸附力,并通过四氮唑盐比色法(MTT Assay)观察NECM对软骨细胞的增殖作用.结果通过HE染色、蛋白多糖、胶原及弹力纤维特染、扫描电镜观察分析证实经过多步骤去污剂-酶法抽提软骨细胞制备的天然生物支架材料里,不含细胞及细胞器成分,仅含有不溶解的胶原、弹性蛋白和蛋白多糖,亦即NECM;体外培养实验发现,兔耳廓软骨细胞易进入脱细胞异体软骨基质结构裸露的空穴,且生长旺盛,组织学检查证实兔耳廓软骨NECM上裸露的骨陷窝已部分被软骨细胞占据.MTT Assay检测证实NECM对软骨细胞增殖有促进作用.结论本实验制备的NECM脱细胞彻底、细胞外基质成分保留较完整,并具有促进细胞粘附、增殖和分化生长的作用,是一种较为理想的天然生物支架材料.     

软骨膜和脱钙骨基质联合移植修复鼻翼软骨缺损

目的探讨软骨膜与同种异体脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）联合移植对鼻软骨缺损的修复效果。方法新西兰兔18只随机分为3组,每组6只。制作鼻翼软骨和软骨膜缺损模型,于缺损处移植修复组织。A组为自体耳软骨膜包裹同种异体DBM;B组为自体耳软骨;C组为自体耳软骨膜。10周后取缺损处软骨行大体和病理组织学观察,S100（Soluble protein-100）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）免疫组化染色,评价修复效果。结果 A、B两组所得软骨细胞和基质与正常软骨相类似,两组比较差异不明显。C组所得软骨细胞少,基质浅淡,S100、TGF-β1染色阳性细胞少,与A、B组比较均有统计学意义（P〈0.01）。结论软骨膜与同种异体DBM联合移植对鼻软骨缺损的修复效果与自体软骨基本一致,明显优于自体软骨膜移植。     

一般问题

20050309同种脱细胞软骨基质与软骨细胞体外培养的实验研究/杨彩荣…//中国耳鼻咽喉颅底外科杂志.2004,10(5).274～275目的:研究脱细胞软骨基质能否作为一种软骨细胞培养支架及其对软骨细胞的影响。方法:将脱细胞软骨基质与软骨细胞体外复合培养,通过相差显微镜和组织学分析,观察脱细胞软骨基质变化及软骨细胞的生长情况。结果:软骨细胞能在脱细胞软骨基质表面生长,脱细胞软骨基质经过培养无降解变形,结构与培养前基本相同。结论:脱细胞软骨基质对软骨细胞无毒性作用,作为一种天然软骨细胞培养支架,脱细胞软骨基质在细胞空穴之间的贯通方面…     

同种脱细胞软骨基质与软骨细胞体外培养的实验研究

目的研究脱细胞软骨基质能否作为一种软骨细胞培养支架及其对软骨细胞的影响。方法将脱细胞软骨基质与软骨细胞体外复合培养，通过相差显微镜和组织学分析，观察脱细胞软骨基质变化及软骨细胞的生长情况。结果软骨细胞能在脱细胞软骨基质表面生长，脱细胞软骨基质经过培养无降解变形，结构与培养前基本相同。结论脱细胞软骨基质对软骨细胞无毒性作用，作为一种天然软骨细胞培养支架，脱细胞软骨基质在细胞空穴之间的贯通方面需要改进。     

琼脂胰岛素对体外培养人鼻中隔软骨细胞生长增殖的影响

观察琼脂包埋培养皿后鼻中隔软骨细胞体外单层培养的生长状况 ,将胰岛素作用于鼻中隔软骨细胞 ,了解其对软骨细胞生长的影响 ,为软骨组织工程提供理论参考。一、材料和方法1.软骨细胞的培养 :无菌条件下取10例鼻中隔偏曲手术患者鼻中隔软骨 ,ＰＢＳ液 (含青霉素 2 0 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 2 0 0μｇ/ｍｌ)漂洗 3次 ,剪成 1ｍｍ× 1ｍｍ× 1ｍｍ大小软骨碎片 ,ＰＢＳ液漂洗 2次 ,加入 2倍体积的Ⅱ型胶原酶 (3ｍｇ/ｍｌ,ｓｉｇｍａ公司 ,美国 ) ,37℃恒温震荡消化 ,过滤 ,离心 ,ＰＢＳ液漂洗 2次 ,离心 ,弃上清 ,16 40培养基 (ｓｉｇｍａ ,美国。含…     

平阳霉素作用静脉畸形内皮细胞后TGF-β1的表达

目的:研究平阳霉素(PYM)作用于体外原代的培养人静脉畸形内皮细胞后转化生长因子β1的表达。方法:通过体外原代培养人静脉畸形内皮细胞,采用ELISA和RT-PCR技术检测不同浓度PYM作用人静脉畸形内皮细胞TGF-β1表达。结果:ELISA发现内皮细胞在自然状态下能分泌TGF-β1,体外培养12h后,随着培养时间的增加,TGF-β1的释放量也随之增加。对照组内皮细胞培养48h后,细胞上清中TGF-β1含量达到(537.56±2.61)pg/ml。500ng/ml和1μg/ml PYM作用内皮细胞12h后,内皮细胞表达分泌的TGF-β1较高,且差异有统计学意义。其他浓度PYM作用于静脉畸形内皮细胞24、48h后,TGF-β1表达与对照组细胞差异无统计学意义。PYM浓度≥10μg/ml,内皮细胞TGF-β1表达量较低。RT-PCR结果显示,对照组(未加药物)细胞TGF-β1mRNA阳性表达,PYM浓度为500ng/ml和1μg/ml时TGF-β1mRNA表达较高,PYM浓度在10～100ng/ml之间,TGF-β1mRNA表达量与对照组之间差异无统计学意义。结论:内皮细胞在PYM致静脉畸形组织纤维化过程中能分泌促组织纤维化细胞因子TGF-β1促进组织纤维化。     

兔甲状软骨细胞体外培养及生物学特性研究

目的 研究体外培养的兔甲状软骨细胞的生物学特性，为组织工程寻打最适宜的软骨细胞。方法 分离培养兔甲状软骨细胞，用倒置显微镜、电镜及组织学方法观察细胞形态、超微结构、功能及生长增殖能力。结果 ①原代软骨细胞呈圆形或多角形，第4代有一半变成梭形，第6代绝大部分变为长梭形；②原代软骨细胞胞浆内粗面内质网和线粒体丰富，阿新蓝染色阳性，具有合成和分泌糖胺多糖的功能；③第3代软骨细胞生长增殖能力强于原代，第5代增殖能力明显减弱，第9代几乎丧失增殖能力。结论 体外培养的兔甲状软骨细胞保持了其体内的基本特征，第3代软骨细胞适合用于软骨组织工程。     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的 观察加入转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)的同种异体软骨细胞／高孔隙率聚乳酸(poly-DL-lactide，PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。方法 18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞／PDLLA复合物加TGF-β1组(复合物组)、同种异体软骨细胞／PDLLA复合物组(复合物对照组)和不用任何修复材料的空白对照组，每组6只。分别于4、12、18周取材，行HE和甲苯胺蓝染色，观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果 术后18周，TGF-β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好，空白对照组为纤维组织修复。结论 同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损，TGF-β1可提高同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的 探讨聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法 酶消化法获取3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞，采用组织工程技术制备软骨细胞-PGA复合物，体外共同培养1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损(实验组7只)。设单纯PGA材料修复组(对照A组4只)和单纯软骨细胞修复组(对照B组4只)作为对照实验。分别于术后不同时间取材，对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果 体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质，呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后4周大体观察：实验组修复区呈淡黄色，与正常软骨界限分明；组织学检查：修复区内有软骨细胞生成和基质分泌，但与正常软骨间存在界面无细胞区，未见明显炎细胞浸润。8周：实验组修复区色乳白，与正常软骨仍有界限；镜下见修复区软骨细胞较成熟，软骨基质含量丰富。12周：实验组修复区呈瓷白色，界面区软骨细胞不明显，但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷，暗红色，部分软组织充填其中，质软；组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨内未见血管生长。结论PGA负载软骨细胞能修复具有正常免疫功能同种异体兔甲状软骨缺损，但新生软骨与正常软骨间存在无细胞区界面，无明显免疫排斥。     

自体骨髓间质干细胞诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损

目的探讨自体骨髓间质干细胞（Bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSC）诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损的可行性。方法取新西兰大白兔BMMSC体外培养扩增,以含转化生长因子（TGF-β1）、地塞米松和维生素C的培养液做诱导培养,实验组以诱导后的软骨细胞与聚丙交酯-乙交酯共聚物Poly（dl-lactideco-glycolide）（PLGA）包埋甲壳胺无纺布的新型支架形成复合物修复兔自体耳廓软骨缺损;对照组以PLGA/甲壳胺无纺布支架修复兔耳廓软骨缺损。分别于移植后6周、12周、18周取材,行HE和甲苯胺蓝染色,观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果术后18周,实验组缺损区完全由软骨组织修复,缺损表面光滑,软骨陷窝明显,与周围正常软骨组织无明显界限;对照组为纤维组织修复。结论自体BMMSC诱导的软骨细胞可用于修复兔耳廓软骨缺损。     

鼻中隔软骨细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的探讨利用人鼻中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycolicacid,PGA）无纺网支架材料上,制成片状和管状结构,埋入裸鼠体内,经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果大体观察见裸鼠体内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察6周时软骨细胞基本成熟,Masson三色染色显示胶原形成,番红花-“O”染色证实其基质中存在糖氨多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论人鼻中隔软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。     

聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的　探讨聚羟基乙酸 ( polyglycolicacid ,PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法　酶消化法获取 3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞 ,采用组织工程技术制备软骨细胞 PGA复合物 ,体外共同培养 1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损 (实验组 7只 )。设单纯PGA材料修复组 (对照A组 4只 )和单纯软骨细胞修复组 (对照B组 4只 )作为对照实验。分别于术后不同时间取材 ,对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果　体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质 ,呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后 4周大体观察 :实验组修复区呈淡黄色 ,与正常软骨界限分明 ;组织学检查 :修复区内有软骨细胞生成和基质分泌 ,但与正常软骨间存在界面无细胞区 ,未见明显炎细胞浸润。 8周 :实验组修复区色乳白 ,与正常软骨仍有界限 ;镜下见修复区软骨细胞较成熟 ,软骨基质含量丰富。1 2周 :实验组修复区呈瓷白色 ,界面区软骨细胞不明显 ,但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷 ,暗红色 ,部分软组织充填其中 ,质软 ;组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨     

同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

目的：探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞、以聚乳酸(PLA)作为支架，应用组织工程学方法在体内形成新生软骨组织的可能性，为组织工程软骨修复喉、气管软骨缺损提供实验依据。方法：将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解，分离出软骨细胞，体外扩增后，将其接种到PLA三维可吸收支架上；将软骨细胞-PLA复合物移植到成年新西兰大白兔的背部皮下，经过7周的体内培养，将组织标本行大体观察和组织学检查。结果：软骨细胞-PLA复合物在同种异体的动物体内有新生组织形成，经组织学染色，证实为软骨组织；随着植入时间的延长，软骨基质的分泌增加，炎性细胞的浸润逐渐减轻。结论：同种异体的软骨细胞-PLA复合物在有免疫力的动物体内能够形成新生软骨组织，这一方法为喉、气管软骨缺损的修复提供了一条新的途径。