过氧化氢诱导H epG 2细胞氧化应激模型的建立

建立过氧化氢(H_2O_2)介导的HepG2细胞氧化应激模型,为筛选抗氧化活性物质以及揭示抗氧化应激机制提供细胞学模型。采用不同浓度H_2O_2处理Hep G2细胞不同时间,噻唑蓝(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,分光光度法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catlase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果表明,随着H_2O_2浓度升高和作用时间延长,Hep G2细胞存活率降低,ROS水平和MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性降低。与对照组相比,200μmol/L H_2O_22处理Hep G2细胞6 h,细胞存活率显著降低(P0.05),仅为63.1%;ROS水平和MDA含量显著升高(P0.05),分别为127.1%和135.1%;SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低(P0.05),分别为77.28%、78.56%和77.41%。H_2O_2诱导HepG2细胞建立氧化应激模型的最佳条件为H_2O_2作用浓度200μmol/L,作用时间6 h。     

鹅皮胶原蛋白肽对H_2O_2诱导IEC-6细胞氧化损伤的保护作用

为探究鹅皮胶原蛋白肽对H_2O_2诱导IEC-6细胞氧化损伤的保护作用,建立了H_2O_2诱导IEC-6细胞氧化损伤模型,测定胶原蛋白肽处理后IEC-6细胞存活率和IEC-6细胞中MDA、LDH、SOD、CAT、GSH-Px的活性变化。结果表明:胶原蛋白肽质量浓度范围在50~200 mg/L时,对IEC-6细胞无明显细胞毒性作用;与胶原蛋白肽质量浓度为0 mg/L试验组相比,胶原蛋白肽质量浓度在150 mg/L时,MDA的含量显著降至5.3 nmol/mg蛋白(P0.05),LDH释放率减少至12.6%(P0.05);IEC-6细胞内SOD的活性增加至41.8 U/mg蛋白(P0.05),CAT的活性提高到7.1 U/mg蛋白(P0.05),GSH-Px的活性提高到118.4 U/mg蛋白(P0.05),此研究显示胶原蛋白肽能够保护IEC-6细胞被H_2O_2诱导引起的氧化损伤。     

沙棘粕醇提取物对小鼠氧化应激损伤的保护作用及机制

研究沙棘粕醇提取物(SBSE)对小鼠氧化应激损伤的保护作用。首先建立D-半乳糖诱导的小鼠氧化应激损伤模型。用不同浓度SBSE灌胃小鼠模型,42 d后,比较各组小鼠肝脏、脑组织中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)和脂褐素(LP)水平,测定小鼠血清中白介素-2(IL-2)和白介素-6(IL-6)含量,并探究SBSE对肝脏组织抗氧化相关基因表达水平的影响,从基因水平探索SBSE对氧化应激损伤的保护机制。结果:与模型组相比,灌胃一定剂量SBSE可以提高小鼠肝脏和脑组织中GSH-Px、SOD和CAT活力;低剂量组(SBSE-L组)小鼠肝脏、脑组织中的TAOC水平显著高于模型组(P0.01,P0.05);3种灌胃剂量小鼠的肝脏和脑组织LP和MDA含量均显著低于模型组(P0.05);中剂量组(SBSE-M组)小鼠血清IL-2和IL-6水平显著高于模型组(P0.05);对抗氧化相关基因mRNA表达情况进行分析,SBSE可能与Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)-核因子相关因子(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路密切相关,SBSE可以下调Keap1,上调Nrf2的表达,使下游抗氧化基因HO-1和HQO1的表达量上升。     

仙草多糖对细胞氧化损伤的保护作用

采用碱液浸提法从仙草中提取粗多糖JMBP-C,通过超滤、离子交换和凝胶柱层析纯化获得一种中性多糖JMBP-N和两种酸性多糖JMBP-A1和JMBP-A2。采用H_2O_2对人体肝细胞LO2进行氧化损伤,构建LO2细胞的氧化损伤模型。通过测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量探讨JMBP-C、JMBP-A1和JMBP-A2对氧化损伤细胞的保护作用。结果表明,3种多糖能显著增加氧化损伤细胞的存活率,有效降低LDH的释放量,2 mg/mL时,仙草多糖均能极显著降低损伤细胞LDH活力(P0.01),JMBP-A1质量浓度为0.5 mg/mL时,细胞存活率比模型组增加49.47%。仙草多糖能提高GSH-Px、SOD和CAT活力,且呈现一定的量效关系。JMBP-A2质量浓度为0.125 mg/mL时能将GSH-Px活力提高到正常细胞的69.20%,高于阳性对照,2 mg/mL的JMBP-A1将SOD和CAT活力分别恢复到正常对照组的80.32%和88.14%,极显著高于模型组(P0.01),效果接近阳性对照。同时,3种多糖样品均能有效减少MDA生成,0.5 mg/mL的JMBP-A1使受损细胞的MDA含量降低了31.50%,与阳性对照效果相当。综上,仙草多糖可增加细胞内抗氧化酶活性,降低脂质过氧化物生成,有明显的氧化损伤保护作用。     

蓝莓花色苷对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用

为探究蓝莓花色苷（BA）对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其机制,通过MTT法测定A549细胞存活率,采用ELISA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,通过RT-PCR技术测定细胞内抗氧化酶和凋亡相关蛋白的mRNA表达量,用免疫印迹法（Western blot）测定凋亡相关蛋白表达量。结果表明：选择H2O2浓度400 μmol/L、处理时间24 h来构建细胞氧化损伤模型。BA质量浓度为30,60,90 mg/mL对A549细胞无毒性作用;BA能显著抑制H2O2造成的A549细胞存活率降低（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡率、MDA和胞内ROS水平（P<0.05）,显著增加GSH-Px、SOD和CAT活性及其相对mRNA表达量（P<0.05）,并显著上调Bcl-2/Bax的比值和下调Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3相对mRNA和蛋白表达量（P<0.05）。BA对H2O2诱导A549细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡率有关。     

诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

本文采用柱色谱技术对诸葛菜种子的提取物进行分离纯化,采用波谱技术结合化学方法进行结构鉴定,首次获得新化合物,命名为诸葛菜碱Ⅰ,并通过建立H_2O_2诱导的细胞损伤模型,对诸葛菜碱Ⅰ保护H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的作用及其机制进行了研究。于H_2O_2刺激前,加入不同浓度的诸葛菜碱Ⅰ预处理Hep G2细胞12 h,然后以400μmol/L H_2O_2损伤细胞2 h建立模型。MTT法检测细胞存活率,微板法检测细胞培养液中LDH活性和细胞MDA含量及SOD、GSH-PX的活性,Western Blot检测细胞内Nrf 2、HO-1蛋白表达,以评价诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,与模型组相比,诸葛菜碱I给药组(53.5、107、214μmol/L)预处理12 h后,增加了细胞存活率(p0.01),显著降低LDH向细胞外液的释放(p0.01),显著降低细胞内MDA含量(p0.05,p0.01),显著提高细胞内SOD、GSH-PX的活性(p0.05,p0.01),增高了Nrf2蛋白水平。因此,诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤具有保护作用。     

牦牛乳酪蛋白酶解物对H_2O_2诱导的氧化损伤HepG2细胞蛋白羰基含量及抗氧化酶活性的影响

为探究牦牛乳酪蛋白酶解物缓解氧化应激损伤的作用,利用过氧化氢(H_2O_2)建立氧化损伤细胞模型,以细胞蛋白质羰基含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性为指标评价牦牛乳酪蛋白酶解物的活性。结果表明,利用酶解物处理H_2O_2损伤的HepG2细胞,能够缓解H_2O_2诱导的蛋白质羰基含量升高,并增加细胞内SOD、CAT、GSHPx的活性,从而提高机体抗氧化能力,缓解H_2O_2引发的氧化应激状态。研究证明,牦牛乳酪蛋白酶解物具有缓解氧化应激损伤的作用,为牦牛乳资源的进一步开发利用及乳源活性肽应用于抗氧化功能食品提供了依据。     

鳕鱼鳔胶原肽对H_2O_2诱导2BS细胞早期衰老的保护作用

目的:以人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)为研究对象,探讨鳕鱼鳔胶原肽对H_2O_2诱导2BS细胞早期衰老的保护作用。方法:采用H_2O_2诱导2BS细胞建立早期衰老细胞模型,给药组加入不同浓度的鳕鱼鳔胶原肽,以白藜芦醇作为阳性对照,对细胞的增殖率、ROS活性氧水平、细胞凋亡情况、β-半乳糖苷酶含量及过氧化物酶含量进行检测。结果:与模型组细胞相比,经白藜芦醇与鳕鱼鳔胶原肽处理后的细胞存活率提高,ROS活性氧水平、细胞凋亡率与β-半乳糖苷酶含量降低,SOD与CAT活力提高,MDA含量降低,且鳕鱼鳔胶原肽保护效果与给药剂量呈正相关。结论:鳕鱼鳔胶原肽能够有效缓解H_2O_2诱导所造成的早期衰老,在一定程度上降低氧化损伤。     

西青果多酚对甲基苯丙胺诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究西青果多酚对甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及机制。方法:实验分为对照组、模型组(3 mmol/L METH)和不同浓度西青果多酚组(25、50、100、200 μg/mL西青果多酚+3 mmol/L METH),给药处理24 h后检测细胞存活率、细胞凋亡、细胞DNA损伤、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力以及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等。结果:与对照组相比,3 mmol/L METH能极显著降低PC12细胞存活率(P<0.01),显著降低SOD和GSH-Px活力(P<0.05),显著增加胞内MDA含量(P<0.05),极显著增加细胞凋亡率、ROS含量和DNA损伤(P<0.01);与模型组相比,50~200 μg/mL西青果多酚能极显著抑制METH诱导的PC12细胞存活率和SOD活力的降低(P<0.01),显著抑制GSH-Px活力下降(P<0.05),极显著抑制METH导致的细胞凋亡、DNA损伤、胞内MDA和ROS含量增加(P<0.01)。结论:西青果多酚对METH诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与西青果多酚抑制METH诱导的氧化应激,缓解DNA损伤相关。     

富硒油茶籽油对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用研究

探究油茶籽油对过氧化氢诱导人永生化表皮细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用。以油茶果经物理压榨所得油茶籽油为材料,以体外培养的HaCaT细胞为试验对象,试验分为空白对照组、过氧化氢(H_2O_2)模型损伤组、阳性对照组(VC)、处理组(油茶籽油5～500μg/m L预处理),以细胞内细胞存活率(凋亡率)、SOD、GSH-PX、ROS及其Nrf2基因表达水平为综合评价指标,评价油茶籽油的抗氧化性。结果表明:当加入油茶籽油对细胞进行预保护后,质量浓度50～200μg/m L的油茶籽油对损伤细胞的存活率在70%～82%之间,较H_2O_2模型损伤组的高。50μg/m L油茶籽油处理组细胞凋亡率为4. 49%,较H_2O_2模型损伤组降低了44. 77%;细胞内SOD水平(22. 09 U/mg)、GSH-PX水平(64. 50 U/mg)较H_2O_2模型损伤组升高了46. 68%、63. 66%,且存在明显差异(P 0. 05);而ROS水平显著下降,与H_2O_2模型损伤组(88. 27)相比细胞内平均荧光强度下降了37. 66%;此时Nrf2基因相对表达量为1. 13,较模型组提高了101. 78%;各指标均较优于阳性对照50μg/m L VC处理组的效果。说明油茶籽油对H_2O_2造成的氧化损伤具有一定的预保护作用,且好于相同质量浓度的VC处理效果,可进一步将其开发成相应的天然有效抗氧化剂产品。     

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。     

蔓越莓抑制UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的研究

研究蔓越莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(Ha Ca T)光损伤的保护作用。用3个不同剂量的蔓越莓果汁预处理Ha Ca T细胞6 h,采用60 m J/cm~2强度UVB照射细胞;然后用MTT法检测细胞的生存率,吸取细胞上清液采用比色法检测丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性变化,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察检测细胞凋亡状况。UVB辐射对Ha Ca T细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐射模型组Ha Ca T细胞活性下降了29.54%,SOD和GSH-Px活性极显著降低(P0.01);相比于模型组,蔓越莓各剂量组可显著提高UVB照射后Ha Ca T细胞的活力(P0.05或P0.01),提高SOD和GSH-Px活性(P0.01),减少MDA和ROS含量(P0.05或P0.01),并且降低LDH活性和增加Hyp含量(P0.01),呈剂量依赖关系,从而降低UVB所导致的细胞损伤及凋亡率升高。蔓越莓可以明显减少UVB诱导Ha Ca T细胞的氧化损伤和凋亡,具有显著的光保护功效,其作用机制与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基以及促进胶原蛋白合成有关。     

草苁蓉多糖对HepG2细胞氧化应激的抑制作用

研究草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化应激的抑制作用。以HepG2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活化水平。结果表明,BRPS在质量浓度12.5 mg/L~50 mg/L范围内对HepG2细胞存活率无显著影响,对细胞安全。而H_2O_2诱导使HepG2细胞存活率和抗氧化能力下降,细胞内ERK和JNK磷酸化水平升高。与H_2O_2模型组相比,BRPS预处理可提高细胞存活率;降低培养液中LDH、AST和ALT活性;降低细胞内MDA含量,升高细胞中SOD活性和GSH含量,降低细胞内ERK和JNK磷酸化水平。提示,BRPS对H_2O_2所致HepG2细胞氧化应激具有抑制作用,减轻其细胞损伤。     

人参皂苷F2干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

本研究探讨了人参皂苷F2对H_2O_2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。利用试剂盒测定凋亡细胞Caspase-6和Caspase-9活性水平,应用WesternBlot检测凋亡细胞中Bcl-2凋亡家族(Bcl-2和Bax)与Caspase凋亡家族(CleavedCaspase-3和Cleaved PARP)的蛋白表达量。H_2O_2损伤细胞后,Caspase酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L F2预处理损伤细胞后,Caspase-6和Caspase-9活力呈浓度依赖性降低(p0.05),当F2浓度达到20μmol/L时,Caspase-6活性降低了6.83 U/mg protein,Caspase-9活性降低了5.88U/mgprotein;CleavedCaspase-3和CleavedPARP蛋白表达量显著低于损伤组(p0.05),随着F2浓度的升高,Cleaved Caspase-3表达量分别下降至280.90%、232.46%、185.26%,Cleaved PARP表达量随着F2浓度升高而降低至110.36%、85.85%、61.95%;F2高浓度组的Bcl-2/Bax比值(73.94%)较损伤组比显著提升(p0.05)。表明人参皂苷F2可以抑制凋亡蛋白Caspase的活性,降低Bax促凋亡蛋白与Caspase家族上、中、下游蛋白的表达,通过调控Caspase级联反应抑制H_2O_2刺激引起的细胞凋亡。     

羽衣甘蓝对小肠上皮Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

探讨羽衣甘蓝乙醇提取物对过氧化氢(H_2O_2)诱发小肠上皮Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。MTT法测定干预后细胞的生存率,比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)水平。硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)测定细胞内氧化损伤标志物丙二醛(Malondiadehycle,MDA)含量。活性氧(ROS)用2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定。酶联法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定细胞内白介素(Interlukin,IL)-8的分泌量。羽衣甘蓝乙醇提取物能明显提升受损细胞的生存率及细胞内源性抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)的活性。降低受损细胞内ROS与MDA水平,并抑制IL-8分泌。研究结果提示羽衣甘蓝乙醇提取物能显著改善H_2O_2诱发Caco-2细胞所发生的氧化应激损伤。     

木犀草素肝保护作用的研究

本文研究木犀草素的肝保护作用。以人肝癌细胞Hep G2为模型,以H_2O_2为氧化损伤来源,分为5个实验组包括空白组、损伤组、低浓度木犀草素保护组(0.5μM+300μM H_2O_2)、中浓度木犀草素保护组(5μM+300μM H_2O_2)和高浓度木犀草素保护组(10μM+300μM H_2O_2)测定细胞活力、活性氧(ROS)增长率、LDH、SOD和CAT酶活,测定细胞周期及细胞凋亡。经过10μM木犀草素保护,细胞活力提高到84%左右,ROS的增长率与空白组无显著性差异(p0.05),LDH、SOD和CAT酶活力显著低于损伤组(p0.05);流式细胞仪观察到随着木犀草素浓度增加,细胞的凋亡率减少并呈量效关系,而加药组的细胞周期与损伤组并无显著性差异(p0.05)。木犀草素具有很好的肝保护能力,在食品、保健品和化妆品行业中具有潜在的应用价值。     

苹果多酚对Caco-2细胞和LDL抗氧化作用的研究

采用细胞氧化损伤模型和Cu~(2+)诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰模型来评价不同品种中苹果多酚的抗氧化作用。结果表明H_2O_2浓度为10 mmol/L时对细胞模型损伤程度比较适中。富士中苹果多酚对损伤的Caco-2细胞的保护作用最强,其中富士、国光、金冠和王林处理后细胞产MDA量分别是对照的20%、33%、40%和60%;苹果多酚对LDL的氧化修饰具有显著的抑制作用,除了王林多酚外,富士、国光和金冠均能极显著地延长LDL氧化的延滞时间,其中富士苹果多酚的作用最强是对照延滞阶段时间的7倍,国光和金冠苹果次之分别是对照延滞时间的4倍和3倍。     

沙棘花青素提取物对双氧水诱导的H1299细胞损伤的保护作用及Nrf2/HO-1通路的影响

目的：研究沙棘花青素提取物（The anthocyanidin extract of Hippophae rhamnoides L.,HRAE）对双氧水诱导H1299细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法：利用双氧水诱导H1299细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测HRAE对细胞活力的影响,采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的含量;采用试剂盒分别测定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathion peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量;采用Western Blot法检测血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶-1(NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like ECH-associated protein 1,Keap1)和核转录因子E2相关因子（Nu...     

N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用

目的：研究N-乙酰-半胱氨酸（N-acetyl-cysteine,NAC）对壬基酚（nonylphenol,NP）诱导的小鼠Sertoli TM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法：以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组（20 μmol/L NP处理）、NP＋NAC组（5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h）、NAC组（5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养）,采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（catalase,CAT）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）磷酸化情况。结果：与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率（P＜0.05）,同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论：NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。     

传统明目中药材复配对视网膜损伤小鼠抗氧化的影响

目的探讨各复配组方对视网膜损伤小鼠的影响。方法将小鼠分为正常对照组、模型组、熟地黄+枸杞子组、熟地黄+菊花组、熟地黄+铁皮石斛组、熟地黄+枸杞子+菊花组共6组,分别对小鼠连续干预8周后进行强光造模,光照结束后用采集晶状体及肝脏组织进行抗氧化的指标检测。观察晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),肝组织中丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、及GSH-Px的活力。结果模型组晶状体GSH-Px与T-AOC值均显著低于正常对照组(P0.05);各复配组GSH-Px和T-AOC值与模型组比较均显著升高(P0.05)。在肝脏抗氧化指标中,模型组与正常组比较,MDA含量升高,SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力下降;与模型组比较,各复配组均可降低MDA含量,升高SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力,且均具有显著性差异(P0.05)。结论各复配组均对光损伤造成的氧化损伤具有缓解作用。