翅果油甾醇对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

体外培养大鼠前脂肪细胞,分别以2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L的翅果油甾醇对其进行处理.采用MTT比色法检测细胞增殖情况;油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分析过氧化物酶增殖物激活受体γ2（PPARγ2）mRNA表达情况,探讨翅果油甾醇对前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的机制.结果显示：各组细胞MTT测试OD值均低于对照组,4μmol/L及8μmol/L组细胞油红O染色的OD值及PPARγ2mRNA的表达量均显著下降.     

芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

荷叶生物碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究荷叶生物碱提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的作用机理。方法:采用MTT法检测荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞生长的抑制效果并确定半抑制浓度(IC50);流式细胞仪技术测定细胞周期及凋亡情况;使用诱导剂对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法分析荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞分化程度的影响。结果:荷叶生物碱提取物(LLAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖且呈剂量时间依赖性;在G0/G1期产生阻滞,有效诱导细胞凋亡;能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,降低细胞中脂肪滴的积累。结论:荷叶生物碱提取物(LLAE)能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖及分化,揭示其可能具有预防肥胖的功效。     

紫马铃薯花色苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究紫马铃薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其机理。方法:采用MTT法检测紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对细胞生长的抑制效果,确定半抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况;对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色比色分析紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对其分化程度的影响。结果:紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖且呈剂量时间依赖性;能有效诱导细胞凋亡,同时在G2/M期产生阻滞;紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。结论:紫马铃薯花色苷提取物能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化,提示其可能具有预防肥胖的功效。     

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的：考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法：采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP）亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK）的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果：异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK mRNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论：异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。     

新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制

为探讨新橙皮苷对脂肪细胞脂肪形成的影响及其作用机制,采用MTS法检测新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞的细胞活力的影响,确定新橙皮苷的作用浓度后,油红O染色法和分光光度法测定3T3-L1脂肪细胞的分化及胞内甘油三酯的含量,RT-PCR测定脂肪形成相关基因CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα）和过氧化物酶体增殖激活受体γ（Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ）mRNA表达,Western蛋白印迹法检测蛋白激酶B（Protein kinase B,PKB/Akt）、糖原合成酶激酶3β（Glycogen synthase kinase3β,GSK3β）和糖原合成酶（Glycogen synthase,GS）的磷酸化水平;利用GSK3β选择性的抑制剂LiCl作用3T3-L1脂肪细胞后,检测新橙皮苷对3T3-L1细胞分化、胞内甘油三酯含量、C/EBPα、PPARγ及aP2蛋白表达的影响。结果表明,新橙皮苷能极显著抑制脂肪细胞分化和胞内甘油三酯的形成（P<0.01）,激活Akt信号通路,促进p-Akt和p-GSK3β水平增加,极显著抑制C/EBPα、PPARγ、aP2 mRNA和蛋白表达（P<0.01）。新橙皮苷的这些影响部分地被GSK3β抑制剂LiCl所抑制（P<0.01）。新橙皮苷能够通过激活Akt/GSK3β信号通路抑制脂肪细胞分化。     

染料木黄酮抑制3T3-L1细胞成脂分化机制

目的：研究染料木黄酮是否通过雌激素受体介导影响3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,并探讨其可能的机制。方法：以不同浓度染料木黄酮处理3T3-L1细胞,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中分别加入不同浓度染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780（一种雌激素受体抑制剂）混合物及不同浓度雌二醇,油红染色观察分化结果,测定细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量;染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780混合物及不同浓度雌二醇处理诱导成熟后的脂肪细胞,测定培养液甘油含量;分别用染料木黄酮（30 μmol/L）、染料木黄酮（30 μmol/L）和ICI182780混合物干预细胞成脂分化,Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）蛋白表达量。结果：3T3-L1细胞存活率随染料木黄酮浓度的升高而降低,50～200 μmol/L染料木黄酮能抑制细胞生长（P＜0.01）;染料木黄酮能负向调节成脂分化后细胞胞浆内TG含量,在0～50 μmol/L浓度范围内呈剂量依赖关系,高剂量雌二醇（100 nmol/L）能下调TG含量;染料木黄酮能促进成熟脂肪细胞脂解,提高细胞培养液甘油浓度;染料木黄酮（30 μmol/L）能上调p-AMPK、HSL蛋白表达,下调FAS蛋白表达（P＜0.01）,对ERK、p-ERK、AMPK表达量无明显影响（P＞0.05）。ICI182780（1 μmol/L）能部分阻断染料木黄酮（30 μmol/L）对p-AMPK的调节作用（P＜0.05）。结论：染料木黄酮能抑制3T3-L1细胞成脂分化,其机制可能是染料木黄酮一方面下调FAS蛋白表达,抑制脂肪合成,另一方面激活AMPK-HSL途径促进脂肪分解;染料木黄酮还可能通过非雌激素受体途径抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

大鼠前脂肪细胞的培养及酪蛋白糖巨肽对其增殖的影响

采用酶消化法从SD 大鼠脂肪垫中分离得到前脂肪细胞。对分离的前脂肪细胞进行形态学观察,分析生长曲线。对前脂肪细胞进行诱导分化,并用油红O 染色鉴定前脂肪细胞。结果表明：该方法能够得到增殖快、成脂分化率高的前脂肪细胞。还从乳清浓缩蛋白中分离酪蛋白糖巨肽(CGMP),初步研究其对体外前脂肪细胞的影响,发现CGMP 能抑制前脂肪细胞的增殖。     

亚甲基蓝对冈田酸所致SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用

目的：考察亚甲基蓝（methylene blue,MB）对冈田酸（okadaic acid,OA）所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法：采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）神经元损伤;磺酰罗丹明B法检测MB对神经元细胞活性的影响;Giemsa染色法观察细胞形态变化;Western blotting检测突触素蛋白、磷酸化tau蛋白（p-tau）的表达水平。结果：全反式维甲酸可浓度依赖性抑制SK-N-SH细胞增殖,10 μmol/L全反式维甲酸处理SK-N-SH细胞7 d后,细胞突触明显伸长,出现典型神经元特征;以40 nmol/L OA构建AD模型;MB可浓度依赖性抑制分化的SK-N-SH细胞活性,与OA组相比,随着MB浓度增加,细胞轴突长度与胞体长度比值增大,细胞突触变长,MB改善了OA所致的细胞突触损伤,突触素蛋白表达量明显升高（P＜0.01）,p-tau（Ser262）蛋白水平明显降低（P＜0.01）。结论：MB对OA所造成的分化SK-N-SH神经元细胞突触损伤有保护作用,可防止AD中tau蛋白的过度磷酸化。     

广西牡蛎活性肽抑制卵巢癌淋巴结定向高转移细胞增殖及对运动迁移能力的调控作用

目的：研究广西牡蛎活性肽对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞（SKOV3-PM4）的增殖及运动迁移能力的抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法测定广西牡蛎活性肽作用24 h后对细胞增殖的抑制作用。细胞经不同质量浓度的广西牡蛎活性肽处理后,采用细胞计数法和集落形成实验测定细胞增殖能力;细胞划痕实验和Transwell小室测定细胞体外运动和侵袭迁移能力。结果：MTT实验结果显示牡蛎活性肽质量浓度在5～80 mg/L范围内抑制SKOV3-PM4的增殖,24 h的半数抑制浓度（inhibitory concentration 50%,IC50）为35.36 mg/L。细胞划痕实验表明无细胞毒性的质量浓度为4 mg/L的牡蛎活性肽能抑制SKOV3-PM4的增殖能力,牡蛎活性肽作用SKOV3-PM4细胞后其侵袭、迁移能力降低,与空白对照组比较差异显著（P＜0.05）。结论：从牡蛎中分离出的小分子多肽在一定质量浓度下对SKOV3-PM4细胞的生长增殖、运动迁移具有抑制作用。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白化学结构分析及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

目的：成熟的鲫鱼卵经提取、分离纯化得到唾液酸糖蛋白（sialyglycoproteins of Carassius auratus eggs,CA-SGP）,分析其化学结构,及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。方法：采用水提法从成熟鲫鱼卵中提取水溶性蛋白,经阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱分离纯化鲫鱼卵水溶性蛋白得到CA-SGP,测定其基本组成,采用高效凝胶液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子质量和纯度,PMP柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成;采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,酶联免疫法测定Ⅰ型胶原蛋白（collagen type Ⅰ,COLⅠ）和骨钙素（osteocalcin,OCN）的分泌量及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的活性,茜素红染色法测定矿化结节的数量。结果：得到单一的组分CA-SGP,在高效凝胶过滤色谱色谱图上呈现单一的糖和蛋白的检测重叠峰,在凝胶电泳图上呈现单一弥散性条带,其蛋白质含量为14.33%,己糖含量为62.81%,N-乙酰神经氨酸（N-acetylneurainic acid,Neu5Ac）含量为19.72%。单糖组成测定结果显示：CA-SGP主要由甘露糖、葡萄糖胺、半乳糖胺组成,其物质的量比为7.61∶6.70∶1.00;MC3T3-E1细胞与CA-SGP共同孵育后,其增殖率显著增加,COLⅠ和OCN的分泌量分别增加了39.28%和83.06%,ALP活性提高了285.08%,矿化结节的数量增加了96.41%,说明CA-SGP显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化。结论：CA-SGP为富含Neu5Ac的糖蛋白,具有显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的作用,对开发抗骨质疏松功能性食品具有重要意义。     

乳源酪蛋白糖巨肽对结肠癌HT-29细胞中COX-2、iNOS、GST-π表达的影响

目的:研究乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对人结肠癌HT-29细胞增殖及细胞中环氧合酶-2(cyclooxyenase-2,COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(induc ible nitric oxide synthase,iNOS)及谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione-S-transferaseπ,GST-π)表达的影响,为探讨CGMP作为功能性食品提供可靠的依据。方法:采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验测定不同剂量CGMP作用12、24、48 h对结肠癌HT-29细胞增殖的抑制情况;在不同剂量CGMP作用HT-29细胞24 h后,通过逆转录聚合酶链反应扩增细胞中提取的COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA,用凝胶成像自动分析系统检测各扩增带COX-2 mRNA、iNOS mRNA、GST-πmRNA水平。结果:1)CGMP组对细胞的增殖均有抑制作用,其中10-4 mg/mL抑制效果最强,且呈现时间依赖性。2)低剂量的CGMP(10-5、10-4、10-3 mg/mL)可显著降低3种基因的表达。结论:CGMP可在一定程度上抑制HT-29细胞的增殖,并呈时间依赖性,同时CGMP能在mRNA水平上抑制COX-2、iNOS、GST-π的表达,进而降低3种基因蛋白的表达,从而进一步改善结直肠癌。     

海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法：分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）表达量。结果：海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）,海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论：海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。     

羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究

以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231（以下简称MDA）增殖和凋亡的影响。结果表明：在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度（median effective concentration,EC50）值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。     

响应面试验优化脆江蓠多糖提取工艺及其对肿瘤细胞的抑制作用

目的：研究脆江蓠多糖（Gracilaria chouae polysaccharides,GLP）的提取方法及其对肿瘤细胞生长的影响。方法：响应面法优化GLP提取工艺条件;四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测GLP对体外培养的人宫颈癌（HeLa）、食道癌（EC-109）、肝癌（HepG-2）以及乳腺癌（MCF-7）细胞生长的影响。结果：GLP最佳提取条件为预热温度93.1 ℃、料液比1∶61.5（g/mL）、超声时间35 min,在此条件下GLP提取率为16.75%。GLP在质量浓度200～1 000 μg/mL范围内对实验细胞均有抑制作用,且呈剂量依赖关系。当GLP质量浓度为1 000 μg/mL时,其对HeLa、HepG-2、MCF-7和EC-109细胞的抑制率分别为49.11%、41.18%、34.98%和31.33%。对HeLa细胞形态学观察以及Annexin V-FITC/PI荧光染色检测发现,随着GLP给药剂量的增加,凋亡和坏死细胞不断增多。结论：GLP对体外培养的人HeLa、EC-109、HepG-2以及MCF-7等癌细胞增殖有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞凋亡。     

内源乳化凝胶化法制备海藻酸钙微胶珠的工艺优化

通过单因素和正交试验对内源乳化凝胶化法制备海藻酸钙微胶珠的工艺参数进行优化,研究包括海藻酸钠（sodium alginate,NaAlg）质量浓度、Span 80质量浓度、水/油（液体石蜡）两相体积比和CaCO3与NaAlg质量比对海藻酸钙微胶珠粒径分布、外观形态和产率等指标的影响。结果表明：海藻酸钙微胶珠的平均粒径随着NaAlg质量浓度的增大而增大,随着Span 80质量浓度和水油两相体积比值增加而变小,而CaCO3与NaAlg质量比对微胶珠的平均粒径无显著影响。制备粒径在300～600 μm,且分布均匀、形态良好、产率较高的海藻酸钙微胶珠的最佳工艺参数为表面活性剂Span 80用量2 g/L、NaAlg质量浓度12 g/L、CaCO3和NaAlg质量比1∶4、水油两相体积比值1∶3。此外,进一步实验表明液体石蜡在重复利用10 次后,制得的微胶珠仍保持了良好的形态和得率。