血清DNA抗体与补体C3测定在SLE的临床应用

系统性红斑狼疮（SLE）是结缔组织的一种自身免疫性疾病,它除了表现皮肤损害外,还对关节、肾脏等多种组织器官都有损害。为观察SLE患者血清DNA抗体及补体C_3水平与疾病的关系,我们对36例SLE患者进行了抗-DNA、补体C_3水平的测定,现报告如下。 材料和方法 一、对象: （一）病例组:SLE患者36例（男9,女27）,年龄14～63岁,平均34.5岁。依据1982年全国风湿病学术会议系统性红斑狼疮诊断标准进行确诊。 （二）对照组:体检健康者42名（男18,女24）,年龄18～58岁,平均38.5岁。 二、方法: （一）抗DNA放免试剂盒由北方免疫试剂研究所提供。补体C_3采用单向免疫扩散法,试剂由中国人民解放军总参管理局卫生处中心实验室提供,同一批号试剂,测定按说明书进行,并进行质量控制。用西安262厂产FJ-2008P自动γ计数器进行测定。     

溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体在毕赤酵母中的表达

目的构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank accession No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。以甲醇进行诱导表达,表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。结果获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。结论构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体并成功表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

自身抗体联合体液免疫检测在SLE中的应用价值

目的 探讨联合检测自身抗体、免疫球蛋白和补体在系统性红斑狼疮(SLE)诊断和病情判断中的应用价值.方法 选取SLE患者54例、其他自身免疫性疾病患者32例和正常对照30例,采用间接免疫荧光法测定抗核抗体(ANA)、免疫印迹法测定抗核提取物抗体(抗ENA抗体)、散射免疫比浊法测定免疫球蛋白和补体C3、C4.结果 SLE患者的ANA、抗dsDNA、抗Sm、抗核小体、抗U1-nRNP、抗核糖体P蛋白、抗组蛋白抗体的检测阳性率分别为87.04％、59.26％、27.78％、29.63％,37.04％、12.96％、27.78％;SLE活动组中抗dsDNA和抗核小体抗体的阳性率高于SLE非活动组,差异具有统计学意义(P＜0.05);SLE活动组IgG、IgA、IgM水平高于正常对照组,C3、C4水平低于正常对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 自身抗体联合免疫球蛋白和补体检测对SLE患者的临床诊断和病情判断有良好的参考价值.     

抗核抗体系列及补体检测对狼疮性肾炎的诊断意义

目的 探讨抗核抗体系列及补体检测对系统性红斑狼疮(SLE)伴狼疮性肾炎(LN)诊断的意义.方法 对1 699例SLE患者和120例健康体检者采用间接免疫荧光法测定抗核抗体(ANA),应用欧蒙印迹法测定抗核抗体系列,应用散射比浊法测定补体C3、C4.结果 1699例SLE患者,LN组921例,ANA阳性率为97.4％;不伴LN组778例,ANA阳性率为98.2％;与对照组比较,r=0.983,P=0.001,差异有统计学意义.LN组的抗组蛋白抗体,抗核小体抗体,抗双链DNA抗体阳性率分别为49.3％、59.8％、63.3％;不伴LN组分别为21.5％、35％、47.9％;差异有统计学意义(r=0.452,P=0.007).抗线粒体-2抗体和抗着丝点抗体阳性率,LN组与不伴肾炎组比较差异有统计学意义(r=0.291,P=0.015).当抗组蛋白抗体+抗核小体抗体+抗双链DNA抗体同时阳性时,LN患者其补体C3,C4水平比这三种抗体非同时阳性时的水平均更低,差异有统计学意义(r=0.583,P=0.009).结论 抗核抗体系列及补体的血清学检测对诊断LN及其预后判断、疗效观察等具有重要意义.     

白癜风患者血清免疫球蛋白、补体、自身抗体检测及分析

目的 检测白癜风患者血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、C4,抗核抗体(ANA)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(A-TPO)、抗甲状腺球蛋白抗体(A-TG)的水平并进行比较分析.方法 收集门诊确诊为白癜风的患者血清168例和正常体检人群血清88例,性别、年龄分布无统计学差异,采用速率散射比浊法检测白免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和补体C3、C4,采用ELISA法检测抗核抗体,采用电化学发光免疫分析法检测A-TPO、A-TG,结果用SPSS19.0统计软件进行分析.结果 白癜风患者组血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、C4表达水平与正常人对照组差异不具有统计学意义(P＞0.05);白癜风组与正常对照组ANA阳性率分别为8.1％和5.7％,经比较差异不具有统计学意义(P＞0.05);两组间A-TPO的阳性率分别为18.8％和10.2％,差异有统计学意义(P＜0.05);两组A-TG阳性率分别为25.8％和4.5％,经比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 部分白癜风患者存在体液免疫紊乱,在发病机制上可能与自身免疫性甲状腺疾病有相似之处;免疫球蛋白、补体及抗核抗体等免疫指标的检测在白癜风诊治中评价的意义不大.     

应用流式补体依赖淋巴细胞毒技术检测肾移植病人HLA抗体

目的为了更好地识别造成移植肾排斥的特异性抗供者HLA的IgG类型同种抗体，对Flow-CDC方法应用于肾移植及其临床相关性进行研究。方法对96例等候肾移植受者同时进行PRA、NIH-CDC和FloW-CDC实验，并观察其中34例接受NIH-CDC阴性肾移植术的受者近期移植效果。结果FloW-CDC和NIH-CDC两种实验方法的阳性率[27．8％（42／151）和17．3％（26／151）]之间差异有统计学意义（X^2=4．86，P〈0．05）。另外，PRA阴性受者其NIH-CDC和Flow-CDC均为阴性，阴性吻合率为100％；在接受同种异体肾移植术的34例受者，其中20例PRA阴性受者接受了NIH-CDC和Flow-CDC均阴性供肾，移植后未发生排斥，移植肾功能迅速恢复；13例PRA阳性的致敏受者接受NIH-CDC和Flow-CDC均阴性供肾的，1例发生急性排斥经治疗后逆转，12例无排斥移植肾功能良好；1例PaA阳性再次移植受者接受了NIH-CDC阴性而Flow-CDC阳性的供肾，移植后第2天出现少尿，10d切除移植肾。结论Flow-CDC方法是一种能够识别具有补体结合能力的抗供者特异性HLA抗体的交叉配型技术，比经典的NIH-CDC方法具有更敏感、可标准化、快速等优点，对预示肾移植术后的排斥反应方面更具有前瞻性。     

抗 C1q 抗体及补体 C3、C4 在神经精神性狼疮诊断中的应用价值

目的:探讨抗C1q 抗体及补体C3、C4 在神经精神性狼疮诊断中的应用价值。方法:对22 例狼疮脑病及66例SLE 患者进行横断面研究。抗C1q 抗体采用ELISA 方法,C3 及C4 采用免疫比浊法检测。分析补体与狼疮脑病的临床表现相关性,采用Logistic 回归分析狼疮脑病的危险因素。结果:NPSLE 患者抗C1q 抗体水平明显高于非NPSLE 患者,补体C4明显低于非NPSLE 患者,采用ROC 曲线分析抗C1q 抗体诊断NPSLE 敏感性及特异性分别为63.6%、66.7%。单因素分析后发现抗C1q 抗体、抗核糖体P 蛋白抗体、抗核小体抗体与神经精神性狼疮相关,但多因素Logistic 回归分析并未发现其与狼疮脑病发生有关。补体C4 降低与SLE 患者脑血管意外发生有关。结论:抗C1q 抗体在狼疮脑病诊断中具有一定的诊断价值,且补体C4 可能参与狼疮脑病脑血管意外的发生。     

EHFV微量细胞病变中和试验方法的建立及其在中和抗体检测中的应用

本文报道了一种新的流行性出血热病毒中和抗体检测方法即微量细胞病变中和试验。该法利用流行性出血热病毒在Vero细胞上繁殖时可引起细胞病变的特性，将32－100CCID50病毒液与等量待检出血清混合，37℃中和1．5小时后种入微量培养板孔中的细胞悬液中，培养6－8天后即可判定结果，用该法检测流行性出血热病人血清和灭活疫苗免疫机体后和中和抗体，获得了与空斑减少中和试验法基本一致或者更加敏感的结果。该法简单，特异、准确、敏感、快速、它的推广应用对加我国流行必出血热的血清分型和流行病学调查及疫苗制备毒株的筛选等基础研究工作均有较大的意义。     

创伤弧菌溶细胞素vvhA基因在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控

目的 用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价.并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况.方法 构建pET28a(+)-whA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×His Tag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性.复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法 检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况.结果 用基因工程的方法 成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC.兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2 μg/HU(溶血单位).RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性.结论 表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达.提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用.     

创伤弧菌溶细胞素体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及其在细胞中的定位

目的 了解创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnifru,cytolysin,WC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡作用及其机制.方法 采用PCR扩增创伤弧菌GTC333株VVC编码基因vvhA,T-A克隆后测序并构建vvhA基因原核表达系统E.coli BL21DE3pET-42a-vvhA.采用Ni-NTA亲和层析法提纯目的 重组蛋白rVVC,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统确定rVVC表达量及提取物纯度.采用溶血试验检测rVVC溶解兔红细胞的活性.2,4-二硝基苯肼比色法和四苯硼钠比色法分别测定rVVC作用的HUVEC培养物上清中乳酸脱氢酶(LDH)和K+含量.采用流式细胞术检测rVVC诱导HUVEC凋亡的作用.将FITC标记rVVC,采用激光共聚焦技术对HUVEC中的FITC标记rVVC进行定位.结果 与GenBank中相关序列比较,所克隆的vvhA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为96.09%和98.26%.1μg/ml的rVVC即可溶解兔红细胞(P<0.01).10 μg/ml的rVVC可引起HUVEC培养物上清中K+含量明显增高(P<0.01),但LDH含量无明显改变(P>0.05).1～100μg/ml的rVVC作用2 h可使HUVEC凋亡.在FITC标记rVVC作用HUVEC 5～240 min内,rVVC逐渐从细胞膜表面向膜内侧和胞浆内移行,作用30 min时多数rVVC进入细胞.结论 rVVC具有溶细胞素活性.VVC可进入HUVEC,诱导细胞凋亡是其损伤HUVEC的主要机制.     

Correlation Between Regional Specificity of Antisperm Antibodies to the Spermatozoan Surface and Complement-Mediated Sperm Immobilization

ABSTRACT: Sera from men at risk for immunity to spermatozoa were screened for antisperm antibodies by immunobead binding following passive antibody transfer to antibody-free sperm of fertile donors. The percent motile sperm after incubation in diluted antibody positive serum in the presence of complement was compared with the regional distribution of immunoglobulins bound to the sperm surface. The extent of complement-mediated sperm immobilization varied with immunoglobulin class and with the location of antibody bound to the sperm surface. Tests utilizing complement-mediated immobilization of sperm are insensitive to the presence of antibodies of IgG and IgA classes that are directed against the head, the distal one-fifth of the sperm tail principal piece, or the tail end piece. A high degree of immobilization was found only when IgG binding occurred on the distal two-fifths to three-fifths of the principal piece of the tail or when IgM bound to the sperm tail end piece.     

一起酒楼聚餐所致的霍乱暴发调查分析

目的分析一起霍乱暴发疫情特征与影响因素,为今后预防霍乱暴发提供科学依据。方法调查所有聚餐人员及接触者,按《霍乱防治手册》确定病例。结果调查就餐者813人,发现病例4例（病原学诊断3例,临床诊断1例）,带菌者116例,病原学确认均为0139血清型。感染率为i4．76％,带菌率为14．27％。罹患率为0．49％;所有感染者均有同一就餐史,未就餐者未感染。结论本次疫情为霍乱爆发,感染率高。发病原因可能为食用的甲鱼或虾污染霍乱弧菌所致。     

In Vitro Cell-Mediated and Complement-Mediated Cytotoxicity to Murine Testicular Cells

ABSTRACT: Male BALB/c mice at 8 to 14 weeks of age were divided into three groups: group 1 was immunized with an emulsion of testicular cells (TCs) (10⁷/mouse), complete Freund's adjuvant (CFA), and extract of Bordetella pertussis (BP); group 2 was given CFA and BP injections; and group 3 was given sterile saline injections. Suspensions of TCs and spleen cells (SCs) from each mouse were prepared 4 weeks after the first immunization for a cytotoxic T lymphocyte (CTL) assay. For the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and antibody-dependent complement-mediated cytotoxicity (ACC) assays, TCs and SCs were prepared from normal male and female mice, respectively. Targets were labeled with Na₂⁵¹ CrO₄. The interactions of targets (TCs) and effectors (SCs) were conducted at 32.5°C (for CTL, ADCC, and ACC assays) or 37°C (for ACC assay). In the CTL assay, SCs from group 1 and group 2 caused significantly more killing than those from group 3. Specific cytotoxicity in the ADCC assay was only detected in the serum (maximum specific lysis 47.6%) of one mouse. No other cytotoxicity was detectable in 61 serum samples from group 1 (n = 25), group 2 (n = 17), and group 3 (n = 19). In the ACC assay, no significant specific cytolysis was found at different incubation temperatures (32.5 and 37.0°C) in 44 serum samples from the three groups. These results suggest that CTLs are important in the pathogenesis of experimental allergic orchitis (EAO). Adjuvant alone, probably because of breakdown of the blood-testis barrier, causes significant T lymphocyte cytotoxicity to TCs. ADCC and ACC are not important mechanisms in the immunopathogenesis of murine EAO.     

SLE患者自身抗体单链噬菌体抗体库构建及抗体活性检测

本文用ＳＬＥ病人外周血淋巴细胞抽提ＲＮＡ,采用ＲＴ ＰＣＲ反应以人的特异性ＨｕＶＨＢＡＣＫ、ＨｕＪＨＦＯＲ和ＨｕＶＬＢＡＣＫ、ＨｕＶＬＦＯＲ引物扩增人抗体的ＶＨ和ＶＬ基因片段,并将其与ｌｉｎｋｅｒ拼接成ＳｃＦｖ片段克隆于大肠杆菌,使其与噬菌体基因Ⅲ的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达,从而构建了ＳＬＥ病人的单链噬菌体抗体库,ＥＬＩＳＡ检测证明ＳｃＦｖ基因产物具有抗体活性。ＳＬＥ噬菌体抗体库的构建为ＳＬＥ发病机理、诊断和治疗研究打下了良好的基础。     

广州市海珠区一起食源性霍乱爆发的调查

目的查清霍乱爆发特征和因素，控制流行。方法调查所有就餐者及其接触者，同时肛拭采样培养鉴定霍乱弧菌，按《霍乱防治手册》的标准确诊病人，对疫点环境采样培养分离霍乱弧菌，并采取控制措施。结果该事件是一起因在酒家集体聚餐引起的食源性霍乱爆发疫情，共感染43人，均为病原学诊断病例（小川型），无病例死亡，未出现二代病例。结论导致疫情爆发的主要原因可能是食物未煮熟煮透和存在交叉感染。提示加强饮食卫生管理是预防霍乱食源性传播的关键，同时应制定针对性强的综合防制措施，控制和减少疫情的发生和流行。     

广州市2008年霍乱疫情监测结果分析

目的阐明广州市2008年霍乱疫情和霍乱监测现状。方法对广州市2008年霍乱疫情报告信息系统和监测系统的监测数据及信息进行统计与分析。结果2008年全市报告2例散发霍乱病例,均为本地病例,无输入性病例报告,报告病例数较2007年（8例）降低75％。肠道门诊病人登记数和检索病例数占同期医院门诊比例分别1．95％。和0．44％。,肠道门诊检索数占登记数的比例全市平均22．68％,外环境常规和应急监测共检出6份阳性标本．其中小川型4份,稻叶型和O139各1份,霍乱主要毒力基因检测结果均为阴性。结论2008年广州市霍乱监测及时发现两起散发霍乱疫情,经及时调查和处理,疫情未造成扩散和蔓延。监测信息做到及时上报和反馈,信息传递顺畅,全市霍乱监测系统运行状况良好。     

Ultrastructural Changes in Small Intestinal Lipofibroblasts of Suckling Rabbits with Experimental Cholera

Ultrastructural analysis of the jejunum in suckling rabbits showed that lipofibroblasts localized in the submucosa and adjacent to crypts contain lipid inclusions (granules) with typical "melting" surface. Lipofibroblasts contained moderately widened cisternae of the granular endoplasmic reticulum and few mitochondria with dense matrix and poorly developed cristae. Experimental cholera was usually accompanied by a decrease in the number of lipid inclusions, and only in some cases by accumulation of lipid material. Our results suggest that the material accumulated in granules plays a role in the pathogenesis of cholera.     

抗核抗体谱在类风湿性关节炎患者中的检测意义

目的探讨抗核抗体谱(anti nuclear antibody spectrum,ANAs)在类风湿性关节炎患者中的检测意义。方法选取我院2015年9月至2017年9月间康复免疫科收治的类风湿性关节炎患者103例作为研究对象(研究组);另选取我院2015年9月至2017年9月期间的健康体检者120例作为对照组。采用间接免疫荧光法检测ANA,采用免疫印迹法检测ANAs。比较两组ANA阳性情况,类风湿性关节炎ANA阳性核型分布情况,及两组ANAs各项阳性情况。结果研究组ANA阳性率(60.19%)明显高于对照组(5.00%),且有统计学差异(P<0. 05)。类风湿性关节炎ANA阳性核型分布中,以胞浆颗粒型、核均质型和核颗粒型为主。类风湿性关节炎患者103例中,ANAs阳性71例,阳性率为68.93%;对照组80例中,ANAs阳性0例,阳性率为0.00%。类风湿性关节炎患者中,以抗Ro-52、抗SS-A和抗SS-B为主。研究组抗Ro-52、抗SS-A、抗SS-B、抗nRNP和抗dsDNA阳性率高于对照组(P <0. 05);研究组抗核小体、抗CENPB、抗Sm、抗Scl-70、抗Jo-1、抗Histone和抗PCNA阳性率高于对照组(P>0. 05)。结论 ANAs检测在类风湿性关节炎患者中具有重要价值,能够明确患者血清中自身抗体种类,具有重要临床研究意义。     

广州市1998—2007年霍乱流行和监测情况分析

目的分析广州市1998—2007年霍乱流行特征和防治情况,为制定霍乱预防控制策略提供科学依据。方法采用描述流行病学方法对资料进行分析。结果广州市1998—2007年共发生霍乱病例821例,平均年发病率1．10／10万;流行一般自4月开始,4～10月为发病高峰期;病例主要分布在芳村、荔湾、海珠、白云区等中心城区,占68．33％;发病年龄最小的为5月龄,最大的为86岁,男女性别比例为1：0．94,以青壮年为多见,20～49岁为621例,占总病例数的75．64％;职业分布为工人占17．66％,其次为民工占11．21％;流行形式以爆发为主,爆发病例占总病例数的86．60％;传染途径以食源性和水源性为主;优势菌型为小川1b型,稻叶型及0139群也有检出。监测分离到的霍乱菌株主要来自水产品、水体和腹泻病人。结论广州市属霍乱常发地区,在防治策略上应采取“三管一灭一宣传”为主的综合防治措施,加强腹泻病人和外环境的监测,防止霍乱的爆发和流行。     

笼养恒河猴血清天然抗体IgM的检测

采用流式细胞术连续监测 8只幼年猴自出生后 1月～ 5月天然抗体的演变 ,并检测 9只成年猴天然抗体IgM水平。幼年猴 1月龄前天然抗体IgM阳性细胞比例较低 (9 9%± 6 3% ) ,到 3月龄时可达成年猴的 4 0 % ,5月龄时接近成年水平。 9只成年猴天然抗体IgM阳性细胞比例变化幅度很大 ,从 94 9%到 2 6 3% (均数 77 3%± 2 1 5 % )。提示 3月龄前幼年猴可用作避免超急性排斥反应的受体模型。不管是成年猴还是幼年猴 ,被选择为实验受体进行移植研究时 ,应事先对其体内的天然抗体水平进行检测 ,以确保实验的可比性。