干扰素γ释放反应在结核病诊断中的应用研究

随着结核分枝杆菌特异性抗原(ESAT-6和CFP-10)的使用,干扰素释放反应对结核病的诊断价值越来越为人们重视,该实验具有较高的特异性和敏感性,最终会取代皮肤结核菌素实验。     

γ干扰素释放试验在结核病诊断中的应用

正目前在结核病的防治中,最大的难题依然是结核病的诊断问题。自20世纪30年代初至21世纪初期,检测结核近期感染的惟一快速、有效的方法是结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST),但TST试验敏感性高,而特异性差,尤其对于接种过卡介苗(BCG)的健康人群往往呈阳性表现,且与其他分枝杆菌感染存在交叉免疫反应。另外,肺结核诊断常用的检查如痰抗酸杆菌涂片及培养的阳性率低,培养周期长,使得结核病漏诊和误诊率一直较高。21世纪初期,Lalvani等[1]首先应用酶联免疫斑点检测方     

TB-IGRA在结核病诊断中的应用价值

目的 评价全血γ-干扰素释放酶联免疫试验（TB-IGRA）在结核病诊断中的应用价值.方法 选择2013年1月至2013年8月在我院住院的患者161例,分为结核病组103例（其中肺内结核78例,肺外结核25例）,非结核病组58例.入院时进行TB-IGRA、结核菌素皮肤试验（TST）、血清结核抗体（TB-AB）及痰涂片检查等.结果 结核病组和非结核病组TB-IGRA的阳性率分别为90.3％和18.9％,结核病组TB-IGRA阳性率明显高于非结核病组,差异有统计学意义（P＜0.01）.TB-IGRA诊断结核病的敏感性（89.42％）明显高于TST（72.71％）、TB-AB（64.90％）、痰涂片（25.71％）（P＜0.01）.血TB-IGRA、TST、TB-AB、痰涂片的诊断特异性分别为82.46％、77.21％、53.72％、42.03％.血TB-IGRA对结核病的阳性和阴性预测值分别为90.29％和81.03％.结论 TB-IGRA用于结核病的诊断简便、快速、敏感、准确有效,具有较高的临床应用价值。     

γ-干扰素释放试验在活动性结核病临床诊断中的应用价值

1γ-干扰素释放试验(interferon-γrelease assays,,IGRAs))原原理理IGRAs是体外检测T细胞经结核特异性抗原刺激后产生和释放γ-干扰素能力的免疫学检测技术,籍以判断T细胞介导的对结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特异抗原的免疫反应。目前国际上比较成熟的IGRAs有两种,即澳大利亚产的Quanti FERON-TB Gold In-Tube(QFT-GIT)和英国产的T-SPOT.TB。前者采用酶联免疫吸附试验检测全血中致     

全血γ干扰素测定在55例结核病诊断中的应用

结核病是对人类健康存在极大威胁的一种慢性传染性疾病,主要由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的感染所致。目前,结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test,TST）仍然是临床上应用最多且方便可行的诊断结核病的试验技术。结核菌素的纯蛋白衍生物（protein purified derivative,PPD）是含有200多种蛋白质的混合物,即使检测出阳性结果也很难区分是否是结核分枝杆菌或者是卡介苗接种导致的感染,因此临床上需要一种更准确的诊断方法以取代TST。     

ESAT-6在结核病防治中的研究进展

<正>结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的慢性传染病,中国结核病人数居世界第2位,结核病病死数每年达13万,超过其他传染病数的总和[1],故结核病的早期、快速诊断对其早期化疗和控制传播都有重要的意义。而现有的诊断方法存在一定的缺陷,所以提高     

ESAT-6 在结核性腹膜炎中的检测及其诊断应用

目的 研究ESAT-6在结核性腹膜炎中的检测及其诊断应用价值。方法 选择2017年1月至2020年1月我院接诊的62例疑似结核性腹膜炎患者作为本研究对象。按照最终的诊断结果分为结核性腹膜炎组50例和肿瘤性腹水组12例。比较两组患者外周血中ESAT-6的阳性检出率、腹腔积液中ESAT-6的阳性检出率;对ESAT-6在结核性腹膜炎检测中的敏感度、特异度、阳性预测率、阴性预测率、阳性似然比、阴性似然比、约登指数进行比较。结果 结核性腹膜炎组患者外周血中ESAT-6的阳性率明显高于肿瘤性腹水组,差异有统计学意义(P0.05)。结核性腹膜炎组患者腹腔积液中ESAT-6的阳性率明显高于肿瘤性腹水组,差异有统计学意义(P0.05)。外周血T淋巴细胞中ESAT-6的敏感度、特异度、阳性预测率、阴性预测率、阳性似然比、阴性似然比、约登指数与腹腔积液T淋巴细胞中ESAT-6比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 ESAT-6在结核性腹膜炎的检测中有较高的应用价值,可以作为评估患者的重要的指标。     

外周血T-SPOT.TB和38kD-IgG检测在活动期结核病诊断中的应用

目的 探讨外周血结核感染T细胞(T-SPOT.TB)及抗结核抗体G(38kD-IgG)检测结果 在活动期结核病患者诊断中的应用价值.方法 回顾性分析西安大兴医院于2017年8月至2019年11月收治的141例结核病患者的诊疗情况.按照最终诊断结果 将患者分为活动期结核病组97例及非活动期结核病组44例,另选择同期在我院...     

T-SPOT.TB在菌阳和菌阴结核病诊断中的应用价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在菌阳和菌阴结核病诊断中的临床价值和意义。方法回顾性分析759例菌阳结核、468例菌阴结核和606例非结核患者的T-SPOT.TB检测结果,总结该方法对菌阳和菌阴结核的诊断性能,同时比较T-SPOT.TB中抗原A和抗原B在结核诊断中的效果及一致性。结果 T-SPOT.TB在结核诊断中的总体敏感度为91.9%,特异性为82.0%;在菌阳和菌阴结核中敏感度分别为95.5%和85.9%。抗原A和抗原B的阳性率在菌阳、菌阴和非结核患者三组内差异均无统计学意义(P0.05),但抗原A和抗原B在菌阳结核诊断中一致性较差,表现为抗原A具有更好的敏感度,抗原B则特异性更高。结论 T-SPOT.TB试验对菌阳和菌阴结核均有较好的诊断价值,抗原A和抗原B在诊断中各具优势,两者联合使用有利于提高结核病诊断效果。     

干扰素γ释放试验诊断肺外结核的应用价值

目的：比较干扰素γ释放试验（interferon gamma release assay,IGRA）与结核菌染色涂片、结核菌培养、结核菌素试验（tuberculin skin test,TST）在肺外结核诊断中的敏感性,探讨 IGRA方法在肺外结核中的应用价值。方法采集75例经临床诊断为肺外结核病患者的新鲜外周血,将 IGRA检测结果与传统的检测方法（结核菌染色涂片、结核菌染色涂片培养、TST）的检测结果进行比较。结果75例肺外结核患者中,IGRA检测阳性率为84．0％,结核菌染色涂片（8．0％）,结核菌培养（5．3％）,TST检测（52．0％）,IGRA检测阳性率均明显高于其他临床常用检测方法,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论 IGRA试剂检测法诊断肺外结核,敏感性明显高于传统的检测方法,有很好的临床应用价值。     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因型

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因突变。方法根据结核分枝杆菌katG基因序列设计探针并制作DNA芯片,用四甲基罗丹明标记的引物扩增结核分枝杆菌katG基因突变热点的片断,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(pdymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果153株结核分枝杆菌临床分离株中30株异烟肼敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同,123株异烟肼耐药株中有85株检测到katG基因突变,占69.1%(85/123)。其中83株为315位密码子AGC→ACC突变,2株为315位密码子AGC→AAC突变,该突变与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致;余38株未检测到突变,经测序证实其中1株PCR-SSCP有不同突变的为279位密码子GGC→GAC突变,因芯片上未点该位点的探针,所以杂交结果为阴性。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐异烟肼分离株的katG基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

应用寡核苷酸探针膜杂交方法快速检测耐异烟肼结核分支杆菌基因型

目的应用寡核苷酸探针膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对异烟肼(isoniazid,INH)耐药性.方法设计与合成用于检测结核分支杆菌耐INH基因katG、inhA的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交,并与PCR-单链构象多态性(Polymerase chain reaction-Single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和PCR-直接测序(PCR-direct sequencing,PCR-DS)结果比较.结果 20株INH敏感株中,仅9株出现野生型探针K1阳性杂交,余11株中,10株K1b'杂交阳性,PCR-DS显示katG基因315位密码子AGC→ACC,1株K1c'杂交阳性,PCR-DS显示katG基因315位密码子AGC→AAC;15株出现野生型探针inh1阳性杂交,另5株Inha1探针杂交阳性,PCR-DS显示inhA基因-15位C→T突变.36株耐药株中,17株K1探针杂交阳性,18株K1b'杂交阳性,1株与所试探针不杂交,PCR-DS显示katG基因279位密码子GGC→GAC;11株与突变型Inha1探针阳性杂交,25株与野生型探针inh1杂交阳性.katG基因膜杂交突变检出率为 50 %,inhA基因膜杂交突变检出率为 30.56 %.结论寡核苷酸探针膜杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌耐异烟肼基因型简便、快速的方法.     

结核分支杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6基因真核表达重组质粒的构建及鉴定

目的 :构建结核分支杆菌早期分泌性蛋白ESAT - 6真核表达重组质粒。方法 :以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板 ,用PCR法对ESAT - 6基因进行扩增 ,PCR反应产物经酶切后 ,克隆于真核表达载体pcDNA3.1( )上。结果 :构建了结核杆菌基因ESAT - 6真核表达重组质粒pcDNA3.1( ) -ESAT - 6 ,测序报告ESAT - 6基因已正向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1( )上。结论 :结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT - 6真核表达重组质粒的成功构建为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下了基础。     

γ-干扰素氧驱动雾化吸入治疗毛细支气管炎的效果

①目的观察γ-干扰素氧驱动雾化吸入辅助治疗毛细支气管炎的临床效果。②方法将92例毛细支气管炎病儿随机分为治疗组和对照组，两组除均给予规范治疗外，对照组采用α-糜蛋白酶及地塞米松加入生理盐水中氧驱动雾化吸入，治疗组则在对照组治疗基础上加γ-干扰素氧驱动雾化吸入。③结果治疗组疗效明显优于对照组，差异有显著性（uc=2．51，P〈0．05）。④结论γ-干扰素氧驱动雾化吸入辅助治疗毛细支气管炎的临床效果良好。     

聚合酶链反应检测二甲苯集菌的24小时尿结核分枝杆菌

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测二甲苯集菌的２４小时尿结核分枝杆菌。方法：应用ＰＣＲ检测６６例疑似泌尿系结核患者二甲苯集菌的２４小时尿结核分枝杆菌,并与常规留取尿标本检测结果作比较得阳性２１例（３１．８％）,后者阳性１１例（１６．７％）,二者差异（Ｐ〈０．０５）。结论：ＰＣＲ检测尿结核分枝杆菌时,应多留取尿液送检,并经浓缩集菌后作ＰＣＲ,以提高检出阳性率。     

提取结核分支杆菌质粒的初步探讨

目的 :研究结核分支杆菌耐药性与质粒的关系。方法 :对 1 1株耐药结核分支杆菌采用经典的碱裂解法提取质粒。结果 :1 1株结核分支杆菌均未提取出质粒。结论 :迄今为止国内外均未提取出结核分支杆菌质粒 ,在此对结核分支杆菌是否具有质粒、质粒类型及耐药性机理进行讨论     

结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81在大肠杆菌中的高效表达

目的 通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达,获得大量纯化的重组Mtb81蛋白。方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;将目的基因与pGEM-T连接,转入E．coli-DHSa大量繁殖后,提取质粒DNA,酶切鉴定、测序;构建pET24b-Mtb81重组质粒．然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3);诱导转化菌株,通过SDS-PAGE电泳鉴定Mtb81表达水平,采用His.band纯化Mtb81蛋白。结果 pGEM-T/Mtb81内插入序列测序表明与报道的序列相同;pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在．表达量占菌体总蛋白的30％左右．相对分子质量约88ku;纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95％左右．从培养菌中可获得200mg/L左右纯化的蛋白。结论 pET24b-Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白．大量纯化的Mtb81为进一步的研究、应用奠定了基础。     

结核杆菌异烟肼耐药性产生的分子机制研究

本文设计了两对引物，分别采用ＰＣＲ扩增结核杆菌异烟肼耐药性相关基因—ＫａｔＧ基因酶活性中心区，并用单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ序列分析方法对临床分离的９株异烟肼敏感株、１１株异烟肼中、低度耐药株进行了耐药性分子机制的研究，结果发现中国人结核杆菌产生异烟肼耐药性的主要原因是由于ｋａｔＧ基因发生碱基点突变所致，本资料亦为快速检测结核杆菌异烟肼耐药性研究方法提供资料。     

免疫组化法在结核病理诊断中的应用

对60例结核病人的多种组织作了抗-BCG酶联葡萄球菌A蛋白间接免疫组化染色和抗酸染色,结果抗酸染色检出率为34.3%,明显低于BCG抗原的检出率69.34%.在渗出性结核病中两种检出率接近,在结核结节中两种检出率均低,在干酪样坏死灶及纤维化钙化灶中抗酸染色检出率很低,BCG抗原检出率仍高,差异显著.在淋巴结结核比其它组织的两种检出率差别大.在继发性结核比原发性结核的检出率差别大.这两种染色可以互相补充并可结合为一种染色.另外在肺及淋巴结被膜还看到BCG抗原沿淋巴管壁散布的现象,有可能与胸膜炎的发生有关.