3株人小细胞肺癌细胞系细胞线粒体DNA基因组突变研究

目的 通过碱基序列测定方法对比分析3株人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞系细胞及其相应的获得性多药耐药细胞系细胞线粒体DNA (mtDNA)基因组突变情况并探讨其潜在的功能变化.方法 常规培养人SCLC细胞系细胞H446、H69、H1395及其相应的多药耐药细胞H446/CDDP、H69AR和H1395/CDDP.分别提取基因组DNA后,应用26对mtDNA特异引物PCR扩增mtDNA全长,然后采用PCR产物直接测序法,以修订的剑桥mtDNA序列(rCRS)为标准,分析上述细胞mtDNA基因组突变情况.结果 与rCRS序列相比对,H446和H446/CDDP属于mtDNA单倍型G,H1395和H1395/CDDP属于mtDNA单倍型C,而H69和H69/AR属于mtDNA单倍型N.此外,去除各种mtDNA单倍型特有的mtDNA遗传变异位点后发现,6种人SCLC细胞系细胞的mtDNA均存在特异性的碱基突变.这些突变不仅涉及mtDNA编码的tRNA、rRNA二级结构的改变,还涉及线粒体呼吸链相关蛋白的氨基酸种类的改变和氨基酸支链极性的改变,而这些改变可能影响到线粒体氧化(OXPHOS)、细胞凋亡等过程.但是,在各亲代细胞与其相应的多药耐药细胞之间没有发现特异的mtDNA突变.结论 人SCLC的发生、发展可能与mtDNA突变密切相关,但其获得性多药耐药性的产生与mtDNA突变无相关性.     

细胞周期抑制蛋白p14ARF在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的研究细胞周期抑制蛋白p14ARF在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P方法检测103例NSCLC癌组织标本中p14ARF蛋白表达,同时以20例肺部炎症病变组织作对照.结果 103例NSCLC标本中,p14ARF阳性表达30例,阴性表达73例,表达阴性率为70.87%.不同类型NSCLC中p14ARF表达不同鳞癌中p14ARF表达阴性率较高(88.24%),肺泡癌中较低(52.78%),腺癌介于两者之间(72.73%),各组织类型之间的差异有非常显著的意义(P＜0.01).临床Ⅲ+Ⅳ期病例p14ARF蛋白表达阴性率为78.57%,明显高于临床Ⅰ+Ⅱ期(54.05%),差异有显著性意义(P＜0.05);男性患者癌组织中p14ARF阴性率81.94%(59/72)明显高于女性45.16%(14/31),差异有显著性意义(P＜0.01).结论 NSCLC组织p14ARF蛋白表达异常具有明显的组织学类型特异性;p14ARF蛋白表达异常在NSCLC发生、发展中起重要作用,有可能同时成为预测病程进展的指标之一.     

非小细胞肺癌组织P53蛋白免疫组化研究

应用Ｓ－Ｐ免疫组化方法研究Ｐ５３表达变化与非小细胞肺癌病理类型,病理分化程度和淋巴结转移的关系,发现Ｐ５３阳性染色率为６４．１％,鳞癌的阳性率为７２．９２％,明显高于腺癌和大细胞癌（５７．１４％和３３．３３％,Ｐ〈０．０５）,有淋巴结转移组Ｐ５３蛋白染色阳性率高于无淋巴结转移组（７４．４２％和５１．４３％,Ｐ〈０．０５）,揭示Ｐ５３蛋白表达与病理类型及淋巴结转移有关。     

p14ARF基因功能性恢复对人肺癌细胞放射敏感性的影响

目的 了解专职调控细胞周期的ｐ１４ＡＲＦ蛋白功能恢复或增强能否影响体外肺癌细胞的放射敏感程度。方法 选择了４株具有不同基因背景的肺癌细胞系,为综们引入人野生型ｐ１４ＡＲＦ基因。用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹和免疫组化检测外源性、ｐ１４ＡＲＦ人主使ＲＮＡ及蛋白表达,并筛选出阳性克隆,以母细胞系和转染空载体的阴性细胞为对照,分析转染ｐ１４ＡＲＦ的细胞在周期分布、放射存活分数及放射诱导的凋亡比例     

非小细胞肺癌p15基因缺失的研究

目的　研究 p1 5基因的纯合性缺失与非小细胞肺癌的发生、发展和预后的关系。　方法　应用聚合酶链反应 (PCR)对 97例非小细胞肺癌与 1 0例非肿瘤疾病的正常肺组织和 2例畸胎瘤进行 p1 5基因的检测。　结果　 97例非小细胞肺癌中 ,p1 5基因的缺失率为 44.3 % ,而正常肺组织和畸胎瘤均未发生缺失 ;不同病理类型间缺失率差异无统计学意义 ,不同TNM分期中 ,p1 5的缺失率是不同的 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为 2 9.4%、40 .0 %和 5 3 .3 % (P <0 .0 5 ) ;有淋巴结转移组的缺失率为 5 2 .2 % ,高于无淋巴结转移组的 2 6.7% ;p1 5基因缺失组的术后 1、3年生存率分别为 88.4%和 3 2 .6% ,较无缺失组的 97.7%和5 1 .2 %为低 (P <0 .0 1 )。　结论　p1 5基因缺失与非小细胞肺癌的发生、发展相关 ,是预后的独立预测指标。     

非小细胞肺癌p16蛋白表达研究

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)及癌周正常肺组织p16蛋白表达情况。方法:运用免疫组化方法检测40例肺癌标本及周围正常肺组织中p16蛋白的表达情况。结果:肺癌组织p16蛋白表达降低率(65％)与其周围正常肺组织(20％)有明显差异(P<0.01)。非小细胞肺癌各亚型之间p16蛋白表达降低率没有差异(P>0.01)。低分化鳞癌p16蛋白表达降低率(100％)明显高于高中分化鳞癌(63％,P<0.01),低分化腺癌p16蛋白表达降低率(100％)亦明显高于高中分化腺癌(33％,P<0.01)。结论:p16蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达明显低于正常肺组织。     

小细胞肺癌急性肿瘤溶解综合征

目的 探讨小细胞肺癌(SCLS)发生急性肿瘤溶解综合征(ATLS)的高危因素及临床表现,以利于早期的预防和有效的诊治.方法 回顾性分析本院5例及国内外文献共50例小细胞肺癌急性肿瘤溶解综合征患者的发病原因,以及临床表现和实验室特点.结果 ATLS常发生于化、放疗早期,多数在化疗后1～7天,也有报道11天后发生,典型表现为三高一低(高钾血症、高尿酸血症、高磷酸血症和低钙血症)及肾功能衰竭.结论 ATLS经积极治疗有效率为65.57%.治疗无效死亡者占34.3%.我们必须要意识到其潜在的致命的并发症,以便采取适当的检测措施和早期采取积极有效的治疗措施.     

Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移规律的研究

目的 探讨几个问题(1)Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移比率;(2)淋巴结微转移与肿瘤大小、病理类型、细胞分化程度、部位、分型、分期进行Logstic回归分析,确定影响微转移的主要因素;(3)探讨微转移的方式、顺序.方法 对91例非小细胞肺癌清扫的肺门和隆突下淋巴结进行MCK(AEl/AE3)免疫组化标志检测微转移的存在.另外收集45例肺部良性病变手术时切除的肺门淋巴结45枚和Ⅱ期、Ⅲ期肺癌常规病理检查阳性的肺门淋巴结45枚进行MCK(AEI/AE3)免疫组化(SP法)标志,分别作为阴性和阳性对照.结果 45例肺部良性病变手术时切除的肺门淋巴结45枚进行MCK(AEI/AE3)免疫组化标志均为阴性;Ⅱ期和Ⅲ期常规病理检查阳性的肺门淋巴结45枚进行MCK(AEl/AE3)免疫组化标志均为阳性.91例Ⅰ期非小细胞肺癌总的微转移率为49%(45/91).结论 Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结中存在微转移;Ⅰb期非小细胞肺癌微转移率明显高于Ⅰa期;有必要对Ⅰb期非小细胞肺癌进行术后化疗;肿瘤分期和分化程度是影响淋巴结微转移的主要因素;淋巴结微转移遵循肺门到纵隔的途径;腺癌存在跳跃式微转移.     

复合型小细胞肺癌的研究现状

复合型小细胞肺癌( combined small-cell cancer, CSCLC)是小细胞肺癌( small-cell lung cancer,SCLC)的一个亚型,它是由 SCLC 与任何其他非小细胞肺癌( Non small-cell lung cancer,NSCLC)成分复合组成的癌,这种复合成分可以是腺癌、鳞状细胞癌或大细胞癌等常见的病理类型,也可以是少见的梭形细胞或巨细胞癌,发病率为2%～28% [1-3]. 发病年龄为(58-66. 4)岁,比单纯型小细胞肺癌要低[4-7].     

非小细胞肺癌MAGE—3抗原的表达

目的 检测ＮＭＡＧＥ－３基因编码的抗原在非小细胞肺癌表达的情况和ＭＡＧＥ－３抗原对非小细胞肺癌患进行特异性免疫治疗的可能性。方法 用免疫组化ＬＳＡＢ的方法对 包埋的组织切片进行ＭＡＧＥ抗原的检测。结果 １０４例非小细胞肺癌原发灶肿瘤组织切片中,ＭＡＧＥ－３抗原阳性的有３１例,阳性率２９．８％,结论 有相当部分非小细胞肺癌患的肿瘤表达ＭＡＧＥ－３抗原,这些患可能是进行ＭＡＧＥ－３基因编码的抗原     

人盲肠未分化腺癌细胞系（HCe－8693）的细胞遗传学研究

对人盲肠未分化腺癌细胞系ＨＣｅ－８６９３）第２３代（早代）及１２５代（晚代）进行细胞遗传学研究，结果发现其染色体的数量分布比较集中，呈近二倍体核型，早代与晚代差别不大，染色体众数为４９。Ｇ显带核型分析结果表明，本细胞系比较接近于正常二倍体核型，异常染色体较少而有规律，易于进行核型分析。较明显的改变是第１号染色体短臂远端缺失及第１３号染色体三体性或部分三体性。     

内皮抑素对人肺腺癌A_(549)细胞周期的影响研究

目的:研究内皮抑素对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法:设计空白对照组及不同浓度的内皮抑素溶液作用于A549细胞,MTT比色法测定A549细胞生长的抑制率;流式细胞仪分析A549细胞增殖周期的变化。结果:内皮抑素对A549细胞具有生长抑制作用,其抑制作用呈浓度依赖性,其抑制率随药物浓度升高而增加,25μg/L时达到76.7%,实验组与对照组之间差异有统计学意义,P<0.05;内皮抑素对A549细胞具有细胞周期阻滞作用,可将其阻滞于G2/M期和S期。结论:内皮抑素对人肺腺癌A549细胞的增值生长具有显著的抑制作用;并可使A549细胞增值周期停滞于G2/M期和S期,从而阻止细胞进一步增殖。     

眼镜蛇毒心脏毒素对人肺癌A_(549)细胞株的细胞遗传学效应

应用眼镜蛇毒心脏毒素（CT）处理体外培养的肺癌A549细胞株，通过细胞生长速率、有丝分裂指数（MI）、细胞周期动力学指数、SCE频率、二倍体细胞比率的分析，观察CT所产生的细胞遗传学效应。实验结果显示：CT能明显影响和抑制肺癌A543细胞的生长和增殖周期（P＜0．01），且随着浓度增大，癌细胞受抑制程度越大。用2μg／mlCT作用肺癌细胞后，SCE频率比对照组明显下降（P＜0．01），但对照组和实验组出现的二倍体细胞比率差异不明显（P＞0．05），提示CT可抑制肺癌细胞的恶性程度，但使其恶性表型逆转的作用不明显。     

放射治疗在广泛期小细胞肺癌治疗中的影响

目的 探讨放射治疗在广泛期小细胞肺癌中的影响。方法 与材料广泛期小细胞肺癌180例。原发病灶伴有对侧纵隔和（或）锁骨上淋巴结转移者48例,伴有远处转移132例。化疗＋放疗142例,单纯化疗32例,单纯放疗6例。胸部放疗剂量：〈50Gy 33例,≥50Gy 105例。脑部放疗剂量：30Gy／10次28例,40Gy／20次22例。结果 全组近期疗效：CER13．3％（24／180）,PR61．7％（111／180）。生存率：1年47．8％,2年17．2％,中位生存期10个月。化放疗组142例,化疗后疗效评价：CR4．9％,PR69．7％。放疗后症状缓解率及疗效评价：70％以上的病人呼吸道症状、上腔静脉压迫综合征、骨转移疼痛及脑转移症状和体征有不同程度缓解甚至消失。CR17．6％,PR65．5％。1年生存率52．8％,2年19．7％。中位生存期11个月。单纯化疗32例近期疗效评价：CR1例,PR19例,1年生存28．9％,2年7．8％,中位生存期6个月。结论 放射治疗在广泛期小细胞肺癌治疗中起到了较好的缓解症状和体征、延长生存的作用。     

人T淋巴瘤细胞系HTL－90的细胞遗传学研究

本文采用Ｇ显带技术对人Ｔ淋巴瘤细胞系ＨＴＬ－９０作了细胞遗传学研究。该细胞系染色体众数为４７，在所有细胞中均发现多数染色体结构和数目异常。本文对Ｔ淋巴瘤细胞系某些特定染色体作了分析和文献复习，１１号染色体长臂的易位或缺失可能是Ｔ细胞淋巴瘤的特征性染色体改变之一。     

人肺癌高转移细胞系的转移相关基因观察

目的 观察人肺癌高转移细胞系SPC-A-1sci的转移相关基因表达,同时验证该细胞系的体内高转移特性.方法 通过Western blot,FICC、IHC等方法检测转移相关基因CD44,OPN,MMP-9,EGFR在高、低转移细胞系间的差异表达;采用尾静脉注射方法观察高、低转移细胞系的转移特性.结果 与低转移细胞系相比,转移促进基因CD44,OPN,MMP-9,EGFR在高转移细胞中的表达均显著上调.体内实验表明,8周时高转移细胞系的肺转移率为100%（12/12）,而低转移细胞系的肺转移率仅为16.67%（2/12）.结论 人肺癌高转移细胞系SPC-A-1sci在转移相关基因表达和动物体内均表现出典型的高转移特性,为该细胞系的推广应用提供了参考依据     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡及其机制

目的:探讨姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的分子机制.方法:MTT法检测姜黄素对肺癌细胞活力的影响,流式细胞计数法检测姜黄素对肺癌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,Caspase活性试剂盒检测姜黄素处理后肺癌细胞Caspase活性的变化,Western-blot检测姜黄素对胞质中细胞色素C的含量及肺癌细胞Akt信号通路的活性的影响.结果:20 μmol/L以上浓度的姜黄素作用48 h后可显著抑制A549细胞的活力,显著诱导细胞发生凋亡,姜黄素作用24 h后肺癌细胞中的线粒体跨膜电位明显下降,细胞色素C释放到胞质增多,Caspase-9、-3活性显著增强,磷酸化Akt水平显著下降.结论:抑制Akt信号通路活性诱发线粒体通路介导的细胞凋亡可能是姜黄素抑制肺癌细胞的重要机制.     

MicroRNA-429对人肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨microRNA-429(miR-429)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)技术检测A549细胞瞬时转染miR-429mimic或inhibitor后miR-429的表达;通过MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖能力和凋亡变化。结果:瞬时转染miR-429mimic 24h后,qPCR结果显示miR-429表达显著升高(9.3±0.3比1.0±0.1,P<0.05),而转染miR-429inhibitor可以显著降低miR-429表达(0.3±0.0比1.0±0.1,P<0.05);与对照组相比,过表达miR-429抑制肿瘤细胞增殖(2.8±0.2比5.0±0.3,P<0.05)并诱导凋亡(18.9±1.2比12.3±1.0,P<0.05),而下调miR-429表达促进肿瘤细胞增殖(6.3±0.4比5.0±0.3,P<0.05)并抑制凋亡(7.1±0.6比12.3±1.0,P<0.05)。结论:miR-429在肺癌中可能作为肿瘤抑制因子发挥功能。     

胃癌细胞系的细胞遗传学与分子细胞遗传学研究

对胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３、ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１进行体外传代２，收获分裂中期细胞、计算染色体众数，进行Ｇ显带核分析，并以１６号染色体着丝粒探针和３号染色体长臂涂染探针分别对ＢＧＣ－８２３和ＭＧＣ－８０３两个细胞系进行染荧光原位杂交。结果发现，在３个细胞系中存在大量的染色体数目与结构异常。其中１６号染色体和１染色体的增加涉及３号染色体的易位，以及多拷贝的５号染色体短臂等臂染色体的出现是这     

热休克蛋白70C末端反应蛋白对人小细胞肺癌细胞株的作用

目的 探讨热休克蛋白70C末端反应蛋白(C-terminus of hsp70-interacting protein,CHIP)过表达对MET以及SCLC细胞株凋亡以及侵袭功能的影响.方法 体外培养SCLC细胞株,免疫印迹法检测SCLC细胞系中CHIP,MET的表达关系.用pcDNA3-CHIP(+)和pcDNA3(-)构建的NCI-H69细胞,检测ERK,FAK,pERK1/2,Akt,pFAK,GFP,Myc和paxillin的表达,评价CHIP和MET蛋白的表达.用GFP标记的CHIP和Myc标记的MET表达载体共转染NCI-H69细胞,免疫沉淀方法 检测CHIP与MET的相互作用.最后对CHIP转染的细胞行细胞活力、细胞凋亡和细胞侵袭试验.结果 CHIP与MET在SCLC细胞系中的表达呈反比关系.转染pcDNA3-CHIP(+)后的细胞CHIP蛋白表达升高,同时MET蛋白表达降低.CHIP过表达的肿瘤细胞中的paxillin和FAK活化程度降低.CHIP过表达SCLC细胞株的侵袭能力下降,细胞生长活力明显下降,凋亡水平增加.转染阴性对照载体(-)或CHIP表达载体(+)的NCI-H69细胞中CHIP过表达后MET的聚泛素化水平升高.结论 CHIP抑制MET依赖性信号,调节MET介导的SCLC运动、 凋亡和侵袭.此外,CHIP通过在SCLC细胞系中的过表达,可明显减少细胞侵袭和生长,同时促进细胞凋亡.