寿光黑鸡成纤维细胞的体外培养与冷冻保存

[目的]建立鸡成纤维细胞的体外培养体系。[方法]用组织块法和消化法分别分离培养鸡皮肤成纤维细胞;比较细胞生长速率及冻存复苏率。[结果]酶消化培养的成纤维细胞原代生长较快,约5 d便可形成单层;2种方法传代细胞的生长速度相似,仅需2~3 d就可形成单层;使用酶消化法和反复贴壁法,经3~4代后,可获得纯化的成纤维细胞;成纤维细胞经冷冻复苏后有75%~80%存活;分离纯化的胚胎和皮肤成纤维细胞的生长曲线均正常,可传至12代,传代后染色体数目不变。[结论]采用组织块法及酶消化法培养鸡成纤维细胞均可获得ES细胞建系所需的饲养层细胞。该研究为ES细胞系的成功建立奠定了基础。     

不同条件对绒山羊体外培养初级毛囊生长的影响(英文)

[Objective] The aim of this study is to lay a foundation for illustrating the biological characteristics and growth regulation mechanism of hair follicles.[Method]Cashmere goat primary hair follicles were separated under aseptic condition and cultured in serum-free DMEM and serum-free Williams E media respectively;subsequently,the growth rate and morphological changes were observed under the inverted microscope.[Result]Hair follicles cultured in serum-free DMEM media showed a growth rate of 0.034 mm/d during the first 3 days,whose structure and morphological characteristics could maintian a stable status for a long time in the growth process.Hair follicles grew much faster in the serum-free Williams E media with a growth rate of 0.077 mm/d during the first 3 days.[Conclusion]There were significant differences(P<0.05)between the growth of cashmere goat hair follicles cultured in the 2 kinds of media.Serum-free Williams E medium was superior to serum-free DMEM medium.     

雌二醇对体外培养绒山羊初级毛囊的影响(英文)

[Objective] The aim of this study was to preliminarily explore the effects of estradiol on morphology and growth of cashmere goat primary hair follicles. [Method] Cashmere goat primary hair follicles were cultured in serum-free Williams E media supplemented with different doses of 17 β-E2 (0, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0 nmol/L), and their growth rates and morphological changes were observed. [Result] The growth rate of 0.1 nmol/L 17 β-E2 group was quite comparable with that of the control group(0 nmol/L), but the 17 β-E2 with concentrations of 1.0, 10.0 and 100.0 nmol/L displayed different degrees of inhibition on the growth of hair follicles. Different morphological changes of hair follicles could also be discovered in different concentration treatments. [Conclusion] The study laid a certain foundation for exploring the regulation mechanism of estrogen on growth of cashmere goat hair follicles.     

山羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存和体外培养

将胎儿成纤维细胞悬浮于不同的冷冻保护液中 ,在不同的温度下进行冷冻保存试验。结果显示 ,当保护液中含有 90 0 m L / L胎牛血清 (FBS)时 ,- 196℃下保存的山羊胎儿成纤维细胞解冻后的细胞贴壁率高于- 80℃ ,且前者贴壁细胞增殖也较后者快 ,二者间差异显著 ;而在 - 2 0℃条件下只有一小部分细胞能够存活 ,与前两者相比差异极显著 ,说明 - 2 0℃不适合冷冻胎儿细胞。冷冻保护液中含有 10 0 m L / L二甲基亚砜 (DMSO)的保护效果明显好于 5 0 m L / L DMSO,二者间差异显著。用组织块法培养的细胞 ,在两种培养基 DMEM和 M199中添加 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 -巯基乙醇 (2 - Me) ,其组织块成活率及细胞生长速度均高于单纯添加 10 0 m L / LFBS,同时证明 DMEM和 M199都能用于胎儿成纤维细胞的体外培养。以 DMEM培养液为基础 ,分别添加 2mm ol/ L 2 - Me,5 m L / L FBS,10 0 m L / L FBS和 2 m mol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS对山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养 ,结果显示 ,细胞在 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS培养液中生长迅速 ,两者间无明显差异 ,2 - Me的存在促进了细胞的增殖 ;两者都与添加 2 m mol/ L 2 - Me组存在显著差异 ;添加 2 m mol/ L 2 - Me和 5m L / L FBS相     

小熊猫耳部成纤维细胞的培养和冷冻保存

小熊猫(Ailurus fulgens)是生活在陆地上的活化石,在类熊类哺乳动物的进化史中具有关键的作用,但近年来数量急剧下降,因此小熊猫的品种保护逐渐受到人们的重视.细胞的培养和冷冻保存已经成为种质资源保护的重要方法.本试验采取小熊猫的耳部组织,用组织培养法对小熊猫组织进行原代、继代培养并成功进行了冷冻和解冻处理,建立了耳部成纤维细胞系.并对培养的细胞进行了形态学观察,该细胞系的建立填补了小熊猫体细胞培养的空白,使得小熊猫种质资源在细胞水平上得到了保存.     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２～３代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代,传代后染色体数目不变。     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型,Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞,２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代增减２的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２－３代后,可获得纯化的成纤维细胞。     

牦牛成纤维细胞的体外培养研究

采用组织块培养法,分别以DMEM(高糖)和DMEM/F12两种合成培养基为基础液,添加15mL·L-1胎牛血清(FBS)为细胞生长液对牦牛耳组织进行原代培养.同时,比较不同冷冻程序对细胞冷冻的影响,探讨牦牛体细胞在体外环境下的生长参数及染色体变化.结果表明,组织块在第6天开始有细胞游离,14天长至单层,两种基础培养基对细胞生长的影响差异不显著(P＞0.05).细胞在-20℃短时间(不超过1h)冷冻效果较好,但平衡时间过长对细胞解冻后生长影响差异极显著(P＜0.01).染色体分析显示,牦牛成纤维细胞在体外条件下生长,不同传代次数(3代和12代)细胞染色体核型稳定,在所得的中期分裂相细胞中,二倍体细胞都在96%以上.可用于体细胞核移植操作和其他研究.     

In vitro模型探讨土壤及矿物中钒的生物可给性(英文)

[目的]探讨攀枝花地区土壤及矿物中钒的存在形态和生物可给性。[方法]采集攀枝花地区具有代表性的农田昔格达土、矿山受污染的昔格达土和钒钛磁铁矿,测定土壤及矿物中钒的存在形态;采用invitro方法建立体外仿生消化模型,对3种样品中钒的生物可给性进行研究。[结果]土壤及矿物中的钒在胃液中的溶解态含量分别为5.02、9.50和3.88mg/kg,生物可给性为0.09%～3.00%;肠液中钒的溶解态含量分别为2.98、5.43和4.49mg/kg,生物可给性为0.10%～1.78%;各种形态的钒含量差异显著,非专性吸附态钒和专性吸附态钒的含量均很低,而残渣态钒含量很高,分别占样品总钒含量的75.06%、95.32%和86.27%。[结论]胃中钒的生物可给性高于小肠中钒的生物可给性,这主要是与胃液的pH值远低于小肠液的pH值有关;土壤及矿物中的钒很难发生形态的转化与迁移,这是样品生物可给性低的主要原因。     

潮阳草鸡胚胎成纤维细胞的体外培养

以潮汕地区地方优质鸡种——潮阳草鸡胚胎组织为材料,采用组织块贴壁培养法进行了成纤维细胞的体外的原代培养和传代培养.结果表明,实验在体外成功培养了成纤维细胞,并进行了传代和冷冻保存,复苏后细胞的存活率仍达到90％以上,为潮阳草鸡的育种在细胞学方面提供了一定的科学依据.     

鸡精原干细胞分离培养初步研究

[目的]建立禽类精原干细胞(SSCs)体外培养系统。[方法]以25日龄广西土鸡为试材,通过睾丸石蜡切片和HE染色,了解SSCs发育情况,用两步酶消化法分离获得生精上皮细胞,比较不同温度、接种密度对鸡SSCs体外培养的影响,并对SSCs的集落进行染色鉴定。[结果]结果显表明,25日龄时SSCs已经形成,但还未分化。37℃适宜作为鸡SSCs的培养温度,5×105个/ml适宜作为鸡SSCs原代混合培养的接种密度。经碱性磷酸酶和糖原染色鉴定,体外培养的鸡SSCs仍保持未分化的特性。[结论]该研究为禽类SSCs体外培养的基础资料提供参考。     

胚胎干细胞体外培养研究进展及设想

胚胎干细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能,近年来由于胚胎干细胞的分离、培养技术的提高,尤其是对干细胞表面分子标记和诱导分化研究的深入,胚胎干细胞展示出很好的临床应用前景,同时也将为基因功能研究、药物研究提供良好的工具。但对基因组印迹、免疫排斥及干细胞的有效定向分化仍然是亟待解决的问题。     

水貂附红细胞体的体外培养试验

[目的]对水貂附红细胞体进行体外培养试验。[方法]在 RPMI-1640、DMEM、M-199和 HL培养液中添加30%的新生牛血清或水貂血清,在37℃、5% CO2条件下体外培养水貂附红细胞体,每12 h更换1次培养液,补充适量健康水貂红细胞,并进行传代培养。[结果]RPMI-1640和 HL培养液中附红细胞体的感染率和感染强度高于 DMEM和 M-199培养液,在RPMI-1640和 HL培养液中添加30%水貂血清附红细胞体的感染率和感染强度高于添加30%新生牛血清,且 RPMI-1640略高于HL培养液,培养12 h后获得了80%以上的感染率,且体外传代可连续培养23代。[结论]该研究为筛选有效防治水貂附红细胞体的药物及制备诊断抗原与研制疫苗提供了有效的途径。     

黑芝麻不同外植体离体培养研究

以黑芝麻无菌苗的下胚轴、幼根、子叶为外植体,以MS+2,4-D1.5mg/L+ZT0.5mg/L为愈伤组织诱导培养基;MS+6-BA2mg/L-IAA0.5mg/L为分化培养基;1/2MS+0.5mg/LNAA+IAA0.25mg/L为生根培养基进行培养.结果表明,幼根能产生少量愈伤组织,尚未分化出苗;子叶愈伤组织能分化出苗,但分化率低;下胚轴愈伤组织不仅可分化出苗(分化率为36%),而且可形成大量具有分化潜力的胚性愈伤组织,分化绿苗的频率可达67%.     

NAA和几种细胞分裂素对怀山药离体快繁的影响

主要探讨了三种嘌呤型细胞分裂素:呋喃氨基嘌呤(KT)、苄氨基嘌呤(BAP)和异戊烯基腺嘌 呤(2ip),对怀山药的两个品种:淮山药和凤山药离体培养的影响。结果表明:两品种在MS KT2mg/L (单位下同)或2ip培养基上生长情况均较好,当附加NAA0．2时,一般可促进生根;但在培养基上,两 品种差异明显,淮山药表现腋芽生长受抑制,而凤山药则易形成丛生芽,而当此培养基附加NAA0．2 时,NAA与BAP可协同作用促进淮山药的腋芽生长,增加芽苗数,但对凤山药的生长则基本无影响。 通过不同培养基对凤山药快繁效果的比较,筛选出MS KT1 NAA0．2 0．1％活性碳为凤山药快繁较适 宜的培养基。     

莎能奶山羊皮肤成纤维细胞几种冷冻保存方法的研究

以莎能奶山羊皮肤组织为材料进行细胞培养,通过分离纯化建立了莎能奶山羊皮肤成纤维细胞系.纯化培养的成纤维细胞在冷冻保护剂和血清成分相同的条件下选用5种具有不同预冷平衡方式和预冷时间的方法进行冷冻保存,5个月后通过对成纤维细胞复苏后的活力对比分析,方法3(70%细胞悬液 20%胎牛血清 10%DMSO;先在4 C预冷平衡0.5 h,接着液氮罐口气态氮悬挂4 h,然后沉入液氮)冻存细胞解冻后胎盘蓝染色细胞活力分析,活细胞率为84.8%,培养48 h后细胞贴壁率为85.4%,明显高于其他几种方法.     

海石竹叶片的离体培养与植株再生

[目的]研究海石竹叶片的离体培养及植株再生。[方法]以MS为基本培养基,对海石竹叶片的尖端、中部和基部3个不同部位进行了愈伤组织诱导、丛生芽和根分化的研究。[结果]以叶片尖端作为外植体诱导愈伤组织效果最佳,叶片中部次之,叶片基部最差。MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.75 mg/L培养基诱导叶片尖端愈伤组织的效果最好,MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.25 mg/L培养基诱导叶片中部和基部的效果最好;MS＋6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.10 mg/L培养基诱导丛生芽的效果最佳;MS＋NAA 0.20 mg/L培养基诱导生根的效果最佳。[结论]建立了海石竹高效的离体培养及快速繁育体系,为其种苗的规模化、工厂化生产和其他后续的科学研究奠定了基础。     

兔耳廓软骨的体外培养及细胞特性研究

[目的]研究软骨发育与重建,建立软骨体外培养模式,[方法]通过改良组织块细胞培养法,进行家兔耳廓弹性软骨细胞的体外培养,研究其形态与生长特性。[结果]兔耳软骨组织16 h完成贴壁,1.5 d软骨细胞迁出,144 h细胞生长达到融合;传代兔耳软骨细胞12 h贴壁,生长特性与原代相似,但第3代细胞的延滞期长,在培养48 h开始进入对数期,培养第8天细胞数量达到峰值。HE染色结果表明弹性软骨细胞形态均匀,细胞呈圆形或椭圆形,核呈椭圆形,可见双核或多核现象。软骨陷窝和核深染,胞浆着色均匀。细胞分裂旺盛。同族细胞群清晰。[结论]原代及2代耳软骨细胞体外生长特性及细胞形态一致,培养条件稳定。