Wnt／β-catenin信号转导通路异常及其在鼻咽癌发生中的作用

信号转导通路异常在肿瘤发生、发展过程中发挥着作用,其中Wnt/β-catenin信号转导通路在调控细胞的生长和分化、胚胎发育和肿瘤的发生发展起重要作用.Wnt/β-catenin信号转导通路异常主要表现为β连环蛋白(β-catenin)的异常积聚以及其下游靶基因的激活,从而影响细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖,使细胞凋亡受阻、过度增殖,导致肿瘤的发生.Wnt/β-catenin信号转导通路的异常与鼻咽癌的发病机制密切相关.     

β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌中的表达及意义

目的研究β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其与鼻咽癌临床病理因素的相关性。方法分别采用Real time PCR及免疫组织化学(SABC法)检测45例鼻咽癌及癌旁正常鼻咽黏膜组织中Chibby mRNA及蛋白的表达情况,统计Chibby的表达与鼻咽癌患者临床病理因素的关系。结果 Chibby mRNA在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中平均相对表达量分别为0.0835±0.0056和0.0776±0.0059,Chibby蛋白在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为91.1%(41/45)和42.2%(19/45)。鼻咽癌组织中Chibby的表达与T分期及临床分期有相关性,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性。结论与癌旁正常鼻咽黏膜组织相比,鼻咽癌组织中Chibby mRNA及蛋白的表达均降低,Chibby的表达与肿瘤T分期及临床分期相关,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性,Chibby可能参与了鼻咽癌的发生过程,有望成为鼻咽癌基因治疗新的作用靶点。     

转录组-芯片数据联合分析鉴定鼻咽癌发生潜在关键信号通路和调节基因

目的　本文主要探究鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）发生的潜在关键基因和信号通路。方法  通过GEO数据库中2个转录组测序数据以及1个芯片数据,总计包括57例鼻咽癌数据和9个正常对照组数据,筛选出差异表达的基因,再进行GO和KEGG等分析。结果　筛选得到580个共有上调表达基因,52个共有下调表达基因。上调基因主要与表皮、腺体和皮肤等与上皮发育相关的信号通路有关。下调基因主要与白细胞凋亡过程的负调控、Notch信号通路等有关。利用蛋白互作网络筛选,结果显示这些关键蛋白主要与G-蛋白耦合受体信号通路,趋化因子传导信号通路等有关。结论　通过联合分析转录组和芯片数据,发现了与鼻咽癌的发生有关的信号通路和关键基因,为鉴定鼻咽癌的发生发展提供了重要依据。     

CD44调控鼻咽癌上皮-间质转化及转移的实验研究

目的:研究鼻咽癌细胞中CD44与上皮-间质转化(EMT)及转移的相关性,并初步探讨CD44调控鼻咽癌细胞EMT及转移的机制。方法:Western blotting检测鼻咽癌细胞株5-8F和6-10B中CD44与EMT相关因子的表达。用带有CD44基因的质粒以脂质体瞬时转染鼻咽癌细胞株6-10B获得CD44高表达的鼻咽癌细胞。Western blotting检测转染前后细胞中CD44与EMT相关因子的表达。细胞划痕实验检测6-10B转染前后细胞迁移能力的改变。结果:鼻咽癌细胞株5-8F中CD44和EMT相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达量高于6-10B,而EMT相关因子E-钙黏蛋白的表达量低于6-10B,5-8F的迁移能力强于6-10B。CD44基因转染后的6-10B中CD44及MMP-9的表达均升高。CD44基因转染后的6-10B迁移能力明显增强。结论:在鼻咽癌细胞中,CD44通过调控EMT进程影响鼻咽癌细胞的转移能力。     

基于丝氨酸/苏氨酸激酶信号观察芬太尼对鼻咽癌细胞增殖侵袭的作用机制

目的　基于丝氨酸/苏氨酸激酶（RhoA/Rho）信号通路观察芬太尼（简称芬太尼）对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法　传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组（加入无血清培养基）、抑制剂组（加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶）、芬太尼组（加入药物芬太尼）。MTT实验、划痕实验及Transwell检测细胞增殖、迁移 和侵袭能力,采用qRT-PCR法、Western blot法检测 RhoA、Rho的mRNA和蛋白表达。采用Western blot法检测RhoA/Rho激活后的下游效应产物MYPT1蛋白。结果　与空白对照组比较,芬太尼组与抑制剂组细胞克隆数、细胞增殖率、细胞迁移率均显著降低（t =24.947、22.329、5.361、4.789、9.262、8.968,P 均＜0.05）;抑制剂组与芬太尼组RhoA以及Rho的mRNA转录水平显著低于空白对照组（t =7.712、8.261、7.983、7.905,P 均＜0.05）;与空白对照组相比,芬太尼组与抑制剂组的RhoA、Rho以及MYPT1蛋白表达明显降低（t =2.661、3.105、3.862、3.429、4.656、4.648,P 均＜0.05）。结论　芬太尼可抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭,该作用可能与其抑制Roha/Rho激酶信号密切相关。     

Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用

目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene）表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高（F=547.525,P均〈0.001）;miR-16-1表达增高（F=99.979,P均〈0.001）;Bcl-2 mRNA表达无明显差别（F=0.220,P〉0.05）;Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。     

siRNA下调β-catenin基因对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响CSCD

目的应用siRNA干扰β-catenin基因在喉癌Hep-2细胞中的表达,探讨下调β-catenin基因后对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 RNA干扰技术干扰喉癌Hep-2细胞β-catenin基因的表达,实时荧光定量PCR和Western-blot方法进行干扰效果鉴定;采用MTT法检测细胞增殖能力、流式细胞仪AnnexinPI法检测细胞凋亡率、transwell法观察细胞的迁移侵袭能力。结果实时荧光定量PCR检测表明β-catenin-siRNA干扰组mRNA相对表达量较空白对照组下降达70%,Western blot结果显示干扰组β-catenin蛋白相对表达量为(0.545±0.111),较空白对照组(1.507±0.139)和阴性对照组(1.429±0.089)明显下降(F=21.859,P<0.05)。细胞增殖实验证实靶向干扰β-catenin表达导致喉癌细胞增殖明显受抑制。流式细胞仪AnnexinPI法检测说明,β-catenin-siRNA干扰组凋亡率(18.80±0.81)%与空白对照组(8.6±0.68)%和阴性对照组(9.03±0.26)%相比明显增加(F=253.93,P<0.01)。Transwell侵袭实验表明β-catenin-siRNA干扰组穿过Matrigel到达下室的平均细胞数较空白对照组和阴性对照组均明显减少(F=136.20,P<0.01)。结论干扰β-catenin基因在喉癌Hep-2中的表达可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,促进喉癌Hep-2细胞的凋亡。     

3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 观察3-溴丙酮酸(3-B r PA)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度的3-BrPA处理CNE-1细胞,24 h后CCK-8法检测细胞增殖活性,PI染色法流式检测细胞凋亡情况,Western blot检测mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达水平.结果 50、100、1...     

Klotho基因在喉癌TU686细胞增殖和转移中的作用及调控机制

目的　探讨Klotho对喉癌TU686细胞增殖和转移的影响及其机制。方法　将TU686细胞分为对照组、空载体组和Klotho过表达组,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆数,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,免疫印迹法检测Klotho和钙黏蛋白E（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白 （Vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc、细胞周期素D1（CyclinD1）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达。结果　与对照组相比,Klotho过表达组细胞存 活率[（65.36±4.55）% vs（100.00±6.52）%]、克隆数（38.50±2.63 vs 67.36±4.50）、迁移细胞数（72.35±6.48 vs 126.85±11.56）、侵袭细胞数（47.93±3.23 vs 90.76±6.35）和N-cadher in（0.14±0.01 vs 0.62±0.03）、Vimentin（0.29±0.03 vs 0.76±0.05）、β-catenin（0.15±0.02 vs 0.82±0.06）、c-myc（0.22±0.03 vs 0.72±0.05）、CyclinD1（0.34±0.03 vs 1.18±0.09）、MMP-9（0.19±0.02 vs 1.09±0.08）蛋白表达水平明显降低,而细胞中Klotho（1.17±0.10 vs 0.33±0.02）和E-cadherin（0.85±0.06 vs 0.21±0.03）表达水平明显升高（P <0.05）;但空载体组与对照组间差异无统计学意义（P >0.05）。结论　Klotho可抑制喉癌TU686细胞增殖和转移,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

七氟烷对甲状腺癌细胞AMPK-SIRT1-PGC-1α信号通路的调控作用研究CSCD

目的探究七氟烷对甲状腺癌细胞能量代谢信号通路AMPK-SIRT1-PGC-1α的调控作用。方法将人甲状腺癌细胞株(TPC-1)分为对照组、NC组、七氟烷组和七氟烷+AICAR组,MTT检测各组TPC-1细胞在24、48、72 h细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞存活、早期凋亡及晚期凋亡水平,q PCR检测细胞AMP依赖蛋白激酶(adenosine5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、AMPK/AD-依赖性去乙酰化酶Sirtuin-1(NAD-dependent deacetylase sirtuin-1,SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子(peroxisome proliferator-activated receptorgamma coactivator,PGC-1α)mRNA表达水平,Western blot检测细胞AMPK、SIRT1和PGC-1α蛋白表达水平。结果与对照组相比,七氟烷组细胞在24、48、72 h细胞增殖水平显著下降,分别为70.42±1.51、62.16±1.73、55.21±1.22,且有时间依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);七氟烷组细胞存活比例显著降低,早期凋亡和晚期凋亡比例显著增加,分别为(62.71±2.73)%、(16.21±0.22)%、(22.49±2.32)%,差异有统计学意义(P<0.01);q PCR和Western blot实验表明七氟烷组AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);NC组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与七氟烷组相比,七氟烷+AICAR组细胞在24、48、72 h细胞增殖显著升高,分别为86.11±1.33、78.28±1.41、62.24±1.24,差异有统计学意义(P<0.01);七氟烷+AICAR组细胞存活比例显著升高,早期凋亡和晚期凋亡比例显著降低,分别为(72.25±2.33)%、(12.21±1.01)%、(14.21±2.01)%,差异有统计学意义(P<0.01);q PCR和Western blot实验表明七氟烷+AICAR组AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论七氟烷可以抑制甲状腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,此过程与抑制能量信号通路AMPK-SIRT1-PGC-1α的激活有关。     

亚砷酸联合LY294002对人鼻咽癌CNE细胞的抑制作用

目的　探讨亚砷酸（As2O3）联合PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对人鼻咽癌细胞株CNE（简称CNE细胞）的抑制作用。方法　应用MTT法检测CNE细 胞对As2O3和LY294002的敏感性,Western blot方法检测p-PTEN、p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的表达水平。结果　As2O3与LY294002均可显著抑制CNE细胞的生长,而且该作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。As2O3与LY294002的联合应用对CNE细胞生长的抑制作用具有协同效应。LY294002（10 μmol/L）处理4 h即可使CNE细胞内p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1蛋白表达下调,p-PTEN蛋白表达上调。As2O3（4 μmol/L）单独作用12 h后,CNE细胞内蛋白p-AktSer473表达下调,p-AktThr308、p-PDK1、p-PTEN蛋白变化不明显。LY294002（10 μmol/L）与As2O3（4 μmol/L）联合处理12 h,CNE细胞内p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的下调水平与p-PTEN蛋白的上调强度显著强于LY294002或As2O3的单独作用。结论　As2O3联合LY294002对CNE细胞具有协同杀伤作用。     

重组人p53腺病毒注射液联合治疗对鼻咽癌组织中KAI1和CD44 v6表达的影响

目的探讨重组人p53腺病毒注射液（今又生）联合放化疗对鼻咽癌组织中KAI1和CD44v6表达的影响,并分析KAI1和CD44v6表达与鼻咽癌患者预后之间的关系。方法58例鼻咽癌患者经直线加速器常规放疗和两个阶段铂类＋5-Fu的同步化疗后再分为今又生治疗组（29例）和对照组（29例）,应用免疫组织化学S—P法检测治疗前后癌组织中KAI1及CD44v6蛋白的表达情况,比较两组患者的肿瘤消退率及远期生存情况。结果治疗组患者治疗后KAI1表达上调、CD44v6表达下调,而对照组患者治疗前后比较无明显差异;治疗组局部消退率明显高于对照组;治疗组在3年生存率及远期生存情况同对照组比较无明显差异。结论重组人p53腺病毒注射液治疗可以明显影响鼻咽癌组织中KAI1和CD44v6的表达,提高肿瘤的局部消退率,但无法有效延长远期生存率。     

衣被蛋白复合体-亚基β2调控ERK/MEK通路在下咽癌中作用的研究

目的 分析衣被蛋白复合体-亚基β2(coatomer protein complex subunitβ2,COPB2)在下咽癌发生发展中的作用及机制.方法 应用TCGA数据库分析COPB2在下咽癌中的表达水平,并在下咽癌细胞系(Fa D u)中检测COPB2基因敲减后对细胞增殖的影响,探索COPB2在下咽癌细胞增殖中的...     

神经前体细胞表达发育下调蛋白9通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制研究

目的 探究神经前体细胞表达发育下调蛋白9(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 9,NEDD9)通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制.方法 通过qPCR和Western blot检测人鼻咽上皮细胞...     

枸杞多糖通过调控TLR9/AP-1信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子及鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响

目的 探究枸杞多糖通过调控Toll样受体9/激活蛋白-1(TLR9/AP-1)信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组,模型(B)组,糠酸莫米松(C)组,枸杞多糖(D)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂(E)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂联合枸杞多糖(F)组,每组各10只,对B、C、D、E、F组采用卵清蛋白致敏法建立变应性鼻炎模型,A组不建立该模型。建模成功后,对C组给予1喷/侧的糠酸莫米松喷鼻治疗,对D组灌胃100 mg/kg的枸杞多糖,对E组灌胃20 mg/kg AP-1抑制剂SP100030,对F组给予SP100030联合枸杞多糖,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,对大鼠鼻部症状进行评分,HE染色法检测鼻黏膜组织病理形态及嗜酸性粒细胞并计数,ELISA法检测大鼠血清中Th1/Th2细胞因子水平,免疫印迹法检测鼻黏膜组织中TLR9/AP-1信号通路相关蛋白表达。结果 与A组相比,B组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著升高(P<0.05),血清中INF-γ含量显著降低(P<0.05);与B组比较,C、D两组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著降低(P<0.05),血清中INF-γ含量显著升高(P<0.05),且D组比C组变化显著(P＜0.05);A组大鼠鼻黏膜组织结构完整,B组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,出血及嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润;与B组相比,C、D组病理状态明显改善,嗜酸性粒细胞明显减少;与A组比较,B组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组比较,C、D组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著降低(P<0.05),且D组比C组变化显著(P＜0.05),而E组与D组相比无明显差异(P＞0.05),F组比E组降低明显(P<0.05)。结论 枸杞多糖可有效调控变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子水平、减轻鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症,其机制可能与抑制TLR9/AP-1信号通路有关。     

TrkB通过调控PI3K/AKT途径诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制研究

目的　观察TrkB如何通过PI3K/AKT通路诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制并探讨其意义。方法　分别用含0、100、500、1000 nmol/L抑制剂K252a作用于Hep-2细胞,CCK-8法检测细胞的增殖活性,划痕法检测细胞的迁移能力,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,同时用Western-blot检测Hep-2细胞中p-Akt、p-c-Src、E-cadherin蛋白的表达情况。结果 100 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为17.8%、20.5%、19.7%;500 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为48.2%、46.8%、45.9%;1000 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为51.3%、83.0%、81.5%;K252a（1000 nmol/L）组迁移率及穿膜细胞数分别为21%及46,对照组迁移率及穿膜细胞数分别为69%和221,差异均具有统计学意义（t =1.235、t =3.416,P 均<0.01）;与对照组比较,K252a（1000 nmol/L）组Hep-2细胞中p-Akt及p-c-Src蛋白表达量显著降低,分别为0.93±0.12、0.21±0.05、0.72±0.09、0.14±0.02,差异均有统计学意义（t =3.578、2.634,P 均<0.01）;且对照组中E-cadherin蛋白表达量为0.14±0.02,K252a（1000 nmol/L）组Hep-2细胞中E-cadherin蛋白表达量为0.75±0.08,差异有统计学意义（t =2.852,P <0.01）。结论 TrkB可能通过激活PI3K/Akt信号通路来诱导喉癌细胞EMT的发生。     

基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路小干扰RNA沉默微小RNA-373对喉癌细胞的影响#br#

目的　探讨磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）沉默微小RNA-373（Microrna-373,miR-373）对喉癌细胞生物学行为的影响。方法　喉癌TU212细胞株经常规培养后分为空白组、空白转染组、过表达组和沉默组,四组细胞分别培养。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果　与过表达组相比,沉默组miR-373、P13K、AKT、mTOR表达量较低（P＜0.05）;沉默组24、48、72 h细胞增殖率较低,72 h细胞凋亡率较高（P＜0.05）;沉默组细胞迁移率较少、侵袭数较少（P＜0.05）。结论　沉默miR-373可能通过作用于PI3K/AKT/mTOR信号通路,下调P13K、AKT、mTOR表达,抑制喉癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。