全反式维甲酸提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂敏感性

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的可能机制.方法 MTT法筛选ATRA和L-OHP实验浓度.流式细胞仪检测ATRA对肿瘤细胞周期影响.分别用ATRA、L-OHP、ATRA联合L-OHP作用SW480/M5细胞,MTT法检测药物对肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测肿瘤细胞DNA含铂(Pt)量. 结果L-OHP抑制SW480/M5细胞增殖的GI50为58.0mg/L,主要阻滞肿瘤细胞在S和G2/M期.ATRA 8.0μmol/L作用24小时后,G1期细胞减少,S期细胞增多;作用72小时后,S期和G2/M期细胞增加并明显抑制肿瘤细胞增殖.8.0μmol/LATRA作用至48小时后联合L-OHP,两药联合由相加作用转变为协同作用;联合用药后S期和G2/M期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量显著增加,呈时效依赖性.相对于单独用药,联合用药并不上调肿瘤细胞凋亡率.结论ATRA通过改变SW480/M5细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对L-OHP敏感性.     

番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Westernblot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0 μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

白藜芦醇对人结肠癌SW480瘤株作用的研究

目的研究白藜芦醇对人结肠癌细胞株SW480生长和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法采用光镜及电子显微镜观察用药前后细胞形态结构的改变;采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞术测定细胞周期。结果白藜芦醇呈时间和剂量依赖性抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导凋亡,IC50为80μmol/L;白藜芦醇使SW480处于S期细胞增多。结论白藜芦醇能有效的抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导其凋亡;白藜芦醇对结肠癌可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。     

TRAIL与阿霉素联用协同杀伤人结肠癌细胞SW480

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)可选择性杀伤肿瘤细胞,而不影响正常细胞生长。当一部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感时,特定的其它药物可增强其杀伤作用。本文旨在探讨结肠癌细胞SW480对TRAIL的敏感性,以及TRAIL与阿霉素联用对细胞的杀伤作用及可能作用机制。方法:常规培养结肠癌细胞SW480。利用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞术定量分析凋亡细胞比例,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,Westernblot分析p53及bcl-2蛋白表达变化。结果:(1)SW480细胞对TRAIL不敏感,100ng/mlTRAIL只能杀伤7.8%的细胞,IC50>1000ng/ml,且不存在浓度依赖性。(2)SW480细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性作用,IC50=65μmol/L,0.86μmol/L的阿霉素对细胞不表现杀伤作用。(3)TRAIL与阿霉素合用表现出协同作用,亚毒性浓度TRAIL(100ng/ml)与亚毒性浓度阿霉素(0.86μmol/L)联用可杀伤80%SW480细胞。流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,透射电镜亦观察到大量凋亡细胞存在。药物作用前后,p53及bcl-2蛋白表达水平无明显改变。结论:结肠癌细胞株SW480对TRAIL不敏感,但TRAIL与亚毒性浓度阿霉素联用对癌细胞有协同杀伤作用,这种细胞毒性作用主要表现     

槲皮素对人结肠癌SW480细胞体外侵袭能力的影响

目的：研究槲皮素对结肠癌SW480细胞的体外侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后用Transwell小室的方法检测其体外黏附、侵袭和运动能力。明胶酶谱分析法检测SW480细胞分泌的基质金属蛋白酶活性。结果：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后,体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降,SW480细胞MMP-2及MMP-9的分泌下降（P〈0.05）。结论：槲皮素在体外剂量依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的转移能力,这可能与槲皮素抑制MMP-2及MMP-9的分泌有关。     

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

丙谷胺抑制人结肠癌细胞株SW480增殖的机制研究

目的 探讨丙谷胺在胃泌素促进人结肠癌细胞株SW480中的作用及其机制。方法 采用噻唑氮蓝（MTT）比色分析法,^3H－肌醇掺入法,Ca^2 荧光测定技术和γ－^32P－ATP掺入法,在体外观察丙谷胺（PGL）对5肽胃泌素（PG）促人结肠癌细胞株SW480增殖的影响。结果 PG＋PGL组的SW480活细胞数（viable cell count,VCC)降低,与对照线相比（P＜0．01）,与PG组相比（P＜0．01）;PG＋PGL细胞胞内三磷酸肌醇（inositol-1,4,5-triphosphate,IP3)、Ca^2 浓度降低,与PG组相比（P＜0．01）,与对照组相比（P＞0．05）;PG＋PGL组膜蛋白激酶C（protein kinase C,PKC)。结论 本研究提示丙谷胺可能通过肌醇质脂信号通路抑制胃泌素促进人结肠癌细胞株SW480的增殖,为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据。     

黄芩苷通过Notch通路对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄芩苷能否通过抑制人结肠癌SW480细胞中Notch通路的表达而抑制其增殖并促进其凋亡。方法:MTT法及流式检测术分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长抑制及凋亡的影响；Western Blot法及RT-PCR法分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞Notch1、Hes-1蛋白和Jagged1基因表达的影响。结果:随着药物剂量的增大，黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制率逐步上升；黄芩苷20 μmol/L组细胞凋亡率显著高于对照组；黄芩苷40 μmol/L组细胞凋亡率显著高于黄芩苷20 μmol/L组；黄芩苷20 μmol/L组细胞Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于对照组，黄芩苷40 μmol/L组Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于黄芩苷20 μmol/L组。结论:黄芩苷能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖，促进其凋亡，这种作用可能是通过对细胞中Notch通路的负性调节而实现的。     

单壁碳纳米管对结肠癌细胞系SW480生物学行为影响研究

目的 单壁碳纳米管(single-walled carbon nanotubes,SWCNT)作为一维纳米材料具有良好的稳定性与光吸收能力且易倍修饰等特点,已被广泛用于癌症治疗、药物转运等领域.本研究探讨SWCNT对结肠癌细胞系SW480细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响,为单壁碳纳米管临床应用提供帮助.方法 低、中和高浓度SWCNT分别与结肠癌细胞系SW480共孵育.CCK-8检测SW480细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力以及共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察SWCNT在SW480细胞内的定位;同时分析相关机制.结果 随着SWCNT浓度升高,SW480细胞存活力和细胞侵袭数量依次显著降低,高浓度SWCNT组细胞存活率[(21.43±2.44)％]和侵袭细胞数量(58.34±4.11)最低,显著低于其他组,F值分别为157.094和203.749,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.随SWCNT浓度升高,SW480细胞凋亡比例依次显著升高,高浓度SWCNT组细胞凋亡率高达(74.26±6.89)％,显著高于其他组,F=115.752,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.而随SWCNT浓度的升高,G1期受阻SW480细胞比例依次显著增加,高浓度组最高,F=21.293,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.CLSM显示,SWCNT与SW480细胞线粒体共定位,SWCNT处理后SW480细胞线粒体出现断裂.结论 SWC-NT能够抑制SW480细胞分裂、增殖及迁移,促进细胞凋亡同时引起线粒体断裂.     

虎纹捕鸟蛛毒素对人结肠癌SW480细胞体外增殖的影响北大核心CSCD

目的探讨虎纹捕鸟蛛毒素对结肠癌SW480细胞体外增殖的影响。方法以体外培养的人结肠癌SW480细胞株为实验模型,以不同浓度的虎纹捕鸟蛛毒素对SW480细胞进行体外干预,通过MTT药物敏感实验检测其抑制率及计算IC50;镜下观察经Hoechst 33342染色后的细胞形态变化;流式细胞仪观测经AnnexinⅤ-FITC/PI双染的细胞状态的变化;分光光度法测定Caspase-3的相对活化倍数的变化。结果 MTT药物敏感实验显示,5～100 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞有抑制作用,且呈一定剂量效应关系。其48 h半抑制浓度(IC50)为43.68 mg/ml;显微镜下可见虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的SW480细胞数量明显减少,细胞形态各异,并出现细胞碎片;流式细胞结果显示:10 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒诱导的SW480细胞凋亡率最高,达(57.66±20.44)%;50 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒干预后,SW480细胞坏死率最高,达(25.36±15.03)%;100 mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒干预后Caspase-3活化最明显。结论虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞体外增殖具有抑制作用。     

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D,SSD）对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响,并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响,LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用,MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬,表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多（P＜0.05）。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生（P＜0.05）,且3-MA抑制自噬后,SSD对SW480的增殖抑制效应减弱（P＜0.05）,提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D,SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中,SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中,SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后,细胞E-cadherin的表达增高,N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05）,同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用

目的：探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶（5-iluorocytosine，5-FC）和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosinedeaminase，CD）基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法：将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中，依次分为实验组1、2、3及对照组，分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔，共6d，绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞，于培养72h行M1Tr法检测490nm处吸光度A值，计算细胞杀伤率。结果：应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％；于培养72h时，实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异（P〈0．01）；实验组2与对照组无显著性差异（P〉0．05）；实验组3较实验组1、2有显著性差异（P〈0．01）。结论：CD／5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用，联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD／5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。     

前药 5-FC 联合胃泌素拮抗剂 CI-988 对转 CD 基因大肠癌 SW480细胞的杀伤作用

目的：探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶（5-iluorocytosine，5-FC）和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosinedeaminase，CD）基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法：将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中，依次分为实验组1、2、3及对照组，分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔，共6d，绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞，于培养72h行M1Tr法检测490nm处吸光度A值，计算细胞杀伤率。结果：应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％；于培养72h时，实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异（P〈0．01）；实验组2与对照组无显著性差异（P〉0．05）；实验组3较实验组1、2有显著性差异（P〈0．01）。结论：CD／5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用，联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD／5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。     

转凝蛋白在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨转凝蛋白(transgelin,TAGLN)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法:选取郑州大学附属肿瘤医院2015年5月至2016年8月收治的97例CRC患者的癌及配对的癌旁组织标本,以及人CRC细胞系SW620、SW480、HC...     

伊立替康、奥沙利铂及氟尿嘧啶对人大肠癌LoVo细胞株作用的实验研究

目的：研究国产盐酸伊立替康（CPT-11）、奥沙利铂（L-OHP）及氟尿嘧啶（5-FU）对人大肠癌细胞株LoVo的生长抑制作用。方法：采用MTT法观察上述药物单药应用、两药及三药同时或序贯联合应用对大肠癌LoVo细胞生长的影响,评价药物联合应用的效果。结果：单药应用、两药联合及三药联合应用均对大肠癌LoVo细胞有显著的抑制作用（P〈0．05）;两药联合应用均优于各自单药的抑制效果,CPT-11联合L-OHP弱于CPT-11或L-OHP与5-FU联合的抑制效果（P〈0．05）,由L-OHP到CPT-11小剂量序贯联合具有明显的协同作用;三药联合应用的抑制效果显著优于两药联合（P〈0．05）,由5-FU＋L-OHP到5-FU＋CPT-11的序贯联合应用与三药同步联合应用无显著性差异（P〉0．05）,但由5-FU＋CPT-11到5-FU＋L-OHP序贯应用时明显低于三药同步应用的效果（P〈0．05）,且三药全量及半量联合应用效果差异无显著性（P〉0．05）。结论：由5-FU＋L-OHP到5-FU＋CPT-11的小剂量序贯联合应用具有高效协同抑制大肠癌细胞株LoVo的作用,可为临床难治性和复发性大肠癌患者的化疗及小剂量序贯化疗提供参考。     

华蟾素对直肠癌 SW480细胞生长影响的实验研究

目的：探讨华蟾素对直肠癌 SW480细胞的抑制作用及其机制。方法：以不同浓度的华蟾素作用于人直肠癌 SW480细胞,用 MTT 法检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）观察华蟾素对细胞周期的影响;划痕实验检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法（Western blot）检测华蟾素对凋亡蛋白 Bcl －2表达的影响。结果：MTT 法显示华蟾素显著抑制直肠癌 SW480细胞增殖,其抑制率呈时间及浓度依赖性;FCM检测发现华蟾素使直肠癌 SW480细胞的 G2／M期延长,S 期缩短,周期主要阻滞在 G2／M期;划痕实验结果显示：华蟾素可降低直肠癌 SW480细胞的迁移能力;Western blot 结果显示华蟾素可使 Bcl －2蛋白表达水平降低。结论：华蟾素能够抑制直肠癌 SW480细胞的生长,并阻滞细胞周期在 G2／M期,抑制其迁移,其机制可能与影响凋亡蛋白 Bcl －2的表达相关。     

Rac1活化在大肠癌细胞SW480迁移侵袭中的作用

目的研究Racl的活化在大肠癌迁移侵袭中的作用。方法对大肠癌SW480细胞株,分别导入活化的Rac1 L61重组体和对照用质粒;采用配体结合免疫共沉淀法通过Western blot检测细胞中活化Rac1的含量,进一步用。Transwell小室研究具有不同活性Rac1的SW480细胞其迁移及侵袭能力。结果SW480细胞的转染效率高达80%以上,配体结合免疫共沉淀结果显示,转染Rac1 L61重组体后Rac1的活性显著高于对照组;应用Transwell小室对SW480细胞迁移及侵袭能力研究时,发现Rac1活性高的实验组迁移及侵袭的细胞数显著高于对照组(迁移细胞数43±9:22±5, P<0.01;侵袭细胞数73±13:38±1,P<0.01)。结论Rac1的活化在大肠癌迁移侵袭中起重要的作用。