不饱和脂肪酸对枯否细胞功能的影响

大鼠饲喂4周鱼油后，盲肠结扎穿孔，术后12h，摘取肝脏，分离枯否细胞并培养，检测培养液中细胞因子炎性介质、抗氧化酶和自由基产物、分析枯否细胞膜磷脂和花生四烯酸。结果表明，术前喂鱼油的大鼠，枯否细胞培养液中TNF，IL-l、IL-6、TXB2、6-kPGFt。明显降低，SOD明显升高，MDA明显减少。与此同时，枯否细胞膜PL及AA的古量明显增加、提示鱼油有修复脓毒症大鼠枯否细胞膜PL成分，调节枯否细胞功能的作用。     

谷氨酰胺对内毒素激活大鼠枯否细胞的免疫调理作用

目的　探讨谷氨酰胺调节大鼠枯否细胞（KC）免疫功能的可能机制。方法　体外培养条件下,内毒素(LPS)激活KC,采用聚苯乙稀颗粒检测KC的非特异吞噬作用,3-氢尿嘧啶(3H-Uridine)掺入法反映KC合成RNA的能力,生物素链亲和素酶联免疫吸附法（ELISA）法检测KC肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的分泌量。结果　培养液中谷氨酰胺的浓度从0.000mmol/L上升到0.500mmol/L时,KC吞噬聚苯乙稀颗粒数量、3H-Uridine掺入量、TNF-α和IL-6分泌量分别从(8.80±0.74)/细胞、(20425±2768)DPM/1×106细胞、(105±80)μg/L、(12±2)μg/L上升到(18.53±2.15)/细胞、(39328±2169)DPM/1×106细胞、(300±30)μg/L、(37±4)μg/L。结论　KC的非特异性吞噬作用、3H-Uridine掺入量、TNF-α和IL-6分泌量依赖于培养液中谷氨酰胺的含量,谷氨酰胺缺乏或不足导致KC的特异性和非特异性的免疫功能低下。     

冷保存鼠肝枯否细胞的变化及氯化钆的作用

目的 研究枯否细胞抑制剂氯化钆在大鼠肝脏冷保存时对估否细胞（ｋｕｐｆｆｅｒ ｃｅｌｌ,以下简称ＫＣ）的影响。方法 将Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成８组,每组５只。Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ组为对照组,肝脏保存时间分别为１、２、３、４小时,其余４组为相应的实验组,各组大鼠经手术灌注、取肝后于０～４℃生理盐水中保存。测定各组动物肝组织脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量,做组织学和超微结构的观察。结果 随着保存时间的延长,ＫＣ呈     

枯否细胞在内毒素所致肝损害中的作用

木文概述了近年来有关枯否细胞(KC)、内毒素(ET)和肝细胞三者相互作用方面的研究进展。ET是KC的主要激活剂之一。在ET刺激下,KC对肝细胞的影响极其复杂。一方面,KC具有吞噬细菌和毒素,保护肝细胞的积极作用。另一方面,KC在一定条件下又可通过释放炎性介质,参与ET对肝细胞的损害过程。     

BALB/c鼠枯否细胞的分离培养与鉴定

目的 :肝脏是肿瘤转移的好发部位 ,而肝脏含有丰富的免疫细胞 -枯否细胞 (Kupffer Cell,KC)。为研究枯否细胞的抗癌活性 ,旨在探讨 BAL B/ c鼠枯否细胞的分离培养方法。方法 :选用健康雄性 8～ 10周龄 BAL B/ c鼠 ,麻醉无菌取肝 ,注射冲洗去血并剪去部分结缔组织 ,小玻璃瓶中剪碎肝组织 ,加入 0 .0 4 %的 EDTA和 0 .0 5 %链霉蛋白酶 E溶液 ,交替轻轻吹打消化。不锈钢筛网滤过 ,用 0 .0 0 4 % Dnase 的 16 4 0液清洗细胞液 ,加 Tris-氯化胺溶解红细胞。 30 %～ 70 % Percoll梯度离心 ,10 % FBS贴壁培养 4～ 6 h洗去非贴壁细胞。通过对比体内、体外枯否细胞吞噬墨水和体外吞噬聚苯乙烯乳珠 (latexbeads,D1.1μm )鉴定枯否细胞。结果 :Kupffer细胞的得率为 (7.5 7± 1.92 )× 10 6 个 /鼠肝 ,即 6 .15× 10 6 个 / g,贴壁率为4 0 .18%。用 0 .4 %台盼蓝染色鉴定 ,细胞存活率在 95 %以上 ,吞噬鉴定发现 Kupffer细胞的纯度可达 90 %。贴壁 Kupffer细胞的形态多样 ,可见不规则 ,多边形 ,多角伪足 ,典型的星形及多角形。体外培养枯否细胞存活 2周后未见再有吞噬功能。结论 :酶消化法结合梯度离心和贴壁培养是分离 BAL B/ c鼠枯否细胞的可靠方法 ,为进一步实验打下了基础     

大蒜油激活鼠肝枯否细胞抗癌作用的实验研究

目的：体外实验明确大蒜油是否能增强枯否细胞（Kupffer Cell，KC）的抗肿瘤活性。方法：酶消化法提取小鼠肝脏枯否细胞，分别以含大蒜油浓度为1200、600、300、150、75、37．5μg／mL的培养液培养枯否细胞24h。换洗培养液后，按10：1效靶比加人小鼠结肠癌细胞CT26，共同培养24h。用MTT法测定活细胞数量。以未加药的KC／CT26共同培养和KC、CT26单独培养为对照组。结果：KC的杀癌率为10．49％。经一定浓度大蒜油激活后，KC的杀癌率时显增强，并且杀癌率随大蒜油浓度的升高而增强，大蒜油浓度分别为1200、600、300、150、75、37．5μg／mL的杀癌率分别为91.91％、75．92％、73．71％、42．38％、37．94％和18．07％。300μg／mL组与600μg／mL组差异不明显，37．5μg／mL组与不用大蒜油激活组亦无差异。结论：大蒜油能激活枯否细胞，从而增强其抗癌活性。300μg／mL的大蒜油浓度可能是一个恰当的选择。     

枯否细胞在肝硬变大鼠肝部分切除术后肝细胞再生过程中的双 …

观察不同状态的ｋｕｐｆｆｅｒ细胞对肝细胞再生的影响，探讨肝脏再生启动的机制。方法 复制肝硬变大鼠肝部分切除术模型，体外培养肝细胞和ＫＣ，测定其上清液和表皮生长因子等细胞因子含量和观察肝细胞ＤＮＡ，蛋白质的合成。结果 肝细胞加上Ｃ－ＰＨ组的ＫＣ上清液时，肝细胞ＤＮＡ和蛋白质合成能力明显降低，而肝细胞加上正常对照组ＫＣ的上清液时，肝细胞ＤＮＡ和蛋白质的合成功能均明显增加。     

肝脏神经、枯否细胞对鼠移植肝内皮素-1基因的影响

肝移植是治疗终末期肝病的主要方法,如何降低缺血再灌注损伤,改善移植肝的肝功能受到了越来越多的重视。肝窦内皮细胞是内皮素(ET)合成、清除和作用的主要场所,而内皮素是已知最强的血管收缩剂,其三种异构体ET-1、ET-2、ET-3、ET-1的生物活性最强,多位作者均报道ET在肝硬化门脉高压的发病机制中起重要作用,但其在移植肝缺血再灌注损伤中的作用．尚无定论。本实验通过研究大鼠肝移植术后移植肝内皮素-1基因mRNA表达．为移植肝再灌注损伤的发生机制提供实验依据。     

肠源性内毒素与枯否细胞介导的肝切除后肝再生调控

肝切除后余肝再生的调控机理至今还不十分清楚。随着医学微生态学科分支的建立与发展，人体正常寄生菌群对机体的有益效应逐渐引起了人们的重视。近年的研究发现，肠道细菌及其毒素对肝切除后余肝再生有显著影响，作为这一过程的中介，枯否细胞（ＫＣ）的分泌产物具有调控...     

枯否细胞在大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

肺部并发症是造成重症急性胰腺炎(SAP)病人死亡的重要因素。研究表明，肝枯否细胞(KC)的激活与SAP的病情加重、恶化有关。本实验尝试阻断KC的功能后，探讨其对SAP发生、发展的影响。     

人表皮干细胞在不同培养基中生长状态的观察及其生物学性状的初步探讨

目的筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状. 方法按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD3等组,以及角质化细胞专用无血清培养基(keratinocyte-SFM,K-SFM),同时应用同一个体的成纤维细胞经丝裂霉素处理后作滋养层,培养人表皮干细胞.通过细胞生长曲线及MTT检测,观察细胞的生长状态.在体外培养扩增表皮干细胞后,利用透射电镜、流式细胞仪分析、BrdU检测,观察细胞的生长状态;结合流式细胞仪分析,观察细胞周期的变化. 结果人表皮干细胞在FAD组中生长良好,加入bFGF可进一步改善细胞的生长状态.扩增后细胞检测提示,人表皮干细胞在体外培养过程中呈典型的克隆性生长,生长周期长.流式细胞仪检测表明,人表皮干细胞80.2%处于G0/G1期;透射电镜观察见其细胞器少,细胞核浆比大. 结论加入bFGF的FAD培养基并同时利用滋养层,更适合人表皮干细胞的生长,在稳定状态下是一种处于静止期的幼稚细胞.     

人表皮干细胞的体外分离与培养

目的 探索人表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）的分离方法和培养体系。方法 用Ⅳ型胶原纯化、富集ESCs，将黏附细胞（实验组）和未黏附细胞（对照组）分别接种在Ⅳ型胶原摹质（实验组为A1，对照组为A2）和3T3细胞滋养层（实验照组为B1，对照组为B2），培养体系为：低糖无钙DMEM培养基（添加10％胎牛血清、表皮生长因子10μg／L、氯化钙0．05mmol／L、氢化可的松0．8mg／L），观察细胞能否呈克隆状生长，用流式细胞仪和免疫细胞化学染色，对ECSs周期和表型进行分析。结果 实验组细胞呈克隆状生长，G0／G1期细胞和α6^briCD71 dim细胞百分率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性，对照组呈刚性。结论 人ESCs可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选，并可在适当的培养体系里扩增。     

转化人胚肌腱细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 研究经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞的生物学特性,探讨细胞生长特性与体外培养条件改变的关系,方法 取人胚肌腱细胞和经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞,进行体外培养,对细胞进行形态学,超微结构及一般特征的观察。在不同培养条件下进行生长曲线绘制,平板克隆实验和软琼脂培养以及免疫组织化学法胶原染色,结果 在正常培养条件下,人胚肌腱细胞和转经人胚肌腱细胞的生长性状几乎无差异,且冻存复苏并不     

雷抑素对肝移植大鼠肝Kupffer细胞的影响

利用大鼠原位肝移植模型，观察移植术前应用雷抑素（Ｌｅｆ）对大鼠肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞形态及功能的影响，结果显示，对照组肝移植术后３小时血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），ＡＬＴ活性显著升高，肝组织丙二醛（ＭＤＡ）水平也显著增加，有药组血清ＴＮＦ，ＡＬＴ活性及肝组织ＭＤＡ水平显著下降，电镜检查，对照组肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞呈典型“活化”表现，而用药组肝Ｋｕｐｆｆｅｒ则呈非“活化”表现。结果提示，移植术前应用Ｌｅ     

人和兔雪旺氏细胞的体外培养及形态学观察和生物特性研究

雪旺氏细胞(Schwann cell,SC)在神经再生过程中起着重要作用。我们取人胚及兔之坐骨神经,采用“植块多次移出法”培养出纯净度达99％的人和兔的SC。对培养的SC进行了冻存和复苏处理,复苏后的细胞可保持原有的生长特性。     

人骨髓间质干细胞的优化培养

目的探索人骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的优化培养条件.方法应用不同条件,研究原代培养方法、接种密度、首次换液时间、培养基、血清浓度及种类对细胞生长的影响,并以选定的条件培养、扩增MSCs,扩增后向成骨细胞和软骨细胞诱导.结果在其它条件不变的前提下,密度梯度分离法优于全骨髓法,2.5×105/cm2是人MSCs原代培养的适宜接种密度,原代第5天首次换液为最佳换液时间,DMEM培养基优于α-MEM培养基,血清C为适宜的血清,10%为适宜的血清浓度.所选条件培养的MSCs可在体外扩增15代以上,形态保持不变,并具有良好的分化潜能.结论建立了人MSCs的体外优化培养条件,为其在组织工程方面的应用作出了新的探索.     

不同部位取材的雪旺细胞培养与纯化研究

目的探讨不同部位取材分离纯化雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的纯度、活性以及数量差异,为神经缺损修复提供优质、足量种子细胞奠定理论基础。方法 6只5日龄SD大鼠,雌雄不限,体重8～10 g;切取背根神经节(实验组)和坐骨神经(对照组)。采用联合酶消化加机械吹打法分离培养SCs,并进行纯化及传代培养。取第1代SCs,用计数法绘制8 d内SCs生长曲线,MTT法检测8 d内SCs增殖情况,抗S-100免疫细胞化学检测SCs纯度,ELISA法检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)浓度。结果每只大鼠可切取背根神经节36～43个。消化成单个细胞后计数,实验组可获取(7.5±0.6)×106个SCs,对照组可获取(3.5±0.4)×106个SCs,差异有统计学意义(t=13.175,P=0.000)。两组SCs第3天开始进入对数增长期,随培养时间延长,细胞数及细胞增殖吸光度(A)值均呈上升趋势;且培养3、4、5、6 d时,实验组细胞数及A值明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经S-100免疫细胞化学检测,实验组SCs纯度为92.08%±3.45%,对照组为77.50%±3.57%,差异有统计学意义(t=6.869,P=0.001)。ELISA法检测示实验组培养3 d和5 d时BDNF浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与坐骨神经相比,取材于背根神经节能获得数量更多、纯度和活性更高的SCs,为神经损伤修复创造了必要条件。     

显微分离培养与免疫磁珠法分离纯化人毛囊干细胞

目的 探讨从人毛囊隆突区细胞(bulge cells,BCs)获取高纯度有活性的人毛囊干细胞(hair folliclestem cells,HFscs)的方法及条件. 方法 取自愿捐献的成人头皮标本,显微分离培养获得BCs,应用免疫磁珠纯化BCs中CD200阳性的HFSCs.苔盼蓝染色比较纯化前后细胞活性;流式细胞仪检测细胞纯化效率;免疫荧光检测纯化前后细胞CD200的表达情况. 结果 显微分离培养获得的人毛囊BCs,培养6 d后细胞生长融合,呈铺路石样.所得细胞角蛋白19组织化学染色阳性.CD200免疫磁珠分选法纯化细胞后,苔盼蓝染色显示纯化前细胞活力为95.0%±0.6%,纯化后为94.2%±1.0%,差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞仪及免疫荧光检测显示纯化前CD200阳性细胞的纯度为8.31%,纯化后CD200阳性细胞纯度为82.31%,纯化后CD200阳性细胞回收率为65.39%. 结论 联用显微分离培养与免疫磁珠法,可获得高纯度HFSCs,且细胞活性不受影响.     

人体肌卫星细胞培养的实验研究

目的 了解人体肌卫星细胞在体外培养条件下的生物学特性。方法 标本取自创伤病例的四肢骨骼肌,消化、提纯后,在生长培养液内培养10天,细胞生长至汇合后分化培养5天。倒置显微镜观察,绘制细胞生长曲线,计算细胞融合率,结蛋白免疫细胞化学方法（ABC）法鉴定肌卫星细胞。结果 细胞消化、提纯后纯度为90％。在生长培养液内肌卫星细胞分裂增生;在分化培养条件下,汇合状态的肌卫星细胞发生融合,形成肌管,分化培养24小时细胞融合率开始明显增加,分化72小时融合率达到高峰。结论 人体肌卫星细胞在适当的培养条件下可以增生、分化,形成肌纤维。结蛋白免疫细胞化学染色是早期鉴定肌卫星细胞的有效方法。     

大鼠胰岛的分离纯化方法改进与功能鉴定

目的 通过改进胰腺消化和分离的技术条件,提高成年大鼠胰岛分离纯化产率和质量. 方法 用胶原酶Ⅺ液灌注消化成年SD大鼠胰腺,对胰岛分离纯化方法加以改进:以 4 种比重的 Euro- Ficoll (F1∶D=1.132,F2∶D=1.108,F4∶D=1.069) 和 Hank's 液(F5∶D=1.023) 不连续密度梯度离心,以离心半径 15 cm,2 000 r/min 于4℃缓慢升降离心 20 min,收集位于F1 和 F2界面的胰岛.双硫腙特异染色法鉴定胰岛纯度;二醋酸酯荧光素/碘化丙啶染色法计算胰岛成活率;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌量,计算刺激指数.将胰岛当量(islets equivalent quantity,IEQ) 为 1000 的胰岛移植于同品系糖尿病大鼠肾包膜下,9d 内隔日观察动物血糖的变化,评价胰岛功能.比较分离条件优化前后收获胰岛的产率和质量. 结果 改进纯化方法后每只大鼠胰岛收获量为(920±122) IEQ,胰岛纯度> 90%,胰岛细胞成活率为 91%±2%.胰岛细胞功能良好,在低糖和高糖刺激后培养液中胰岛素浓度分别为(18.25±0.32) mU/L 和(36.70±3.57)mU/L,刺激指数为 2.01±0.15.1000 IEQ 胰岛移植于糖尿病大鼠肾包膜下,观察期内可维持动物血糖水平正常. 结论 改进后的胶原酶灌注消化和不连续梯度离心方法提高了胰岛的产率,保证了胰岛的高纯度及高成活率.