利拉鲁肽对匹罗卡品致痫大鼠海马各区神经元凋亡的影响

目的探讨利拉鲁肽对大鼠癫痫持续状态后海马各区神经元凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠(n=54)随机分为空白对照组(n=6)、匹罗卡品模型组(SE组,n=24)、利拉鲁肽干预组(Liraglutide组,n=24);并根据发作终止后的时间点(12 h,1 d,3 d,7 d)将SE组和Liraglutide组各分为4个亚组(n=6)。采用免疫组化技术检测海马CA3和DG区BCL2和BAX蛋白的表达。结果与SE组相比,Liraglutide组在SE后12 h、1 d、3 d时CA3区BCL2表达水平升高(P0.05),而在SE后7 d时BCL2水平与SE组无差异(P0.05);在DG区,Liraglutide组在SE后1 d BCL2表达升高(P0.05),在SE后3 d时表达无差异(P0.05)。Liraglutide组相较SE组,在SE后12 h,DG区BAX表达开始明显降低(P0.01);在SE后1 d,CA3区BAX表达降低(P0.01);且在SE后3 d,Liraglutide组DG区和CA3区BAX表达都高于空白对照组(P0.05)。结论利拉鲁肽通过抑制癫痫持续状态后海马CA3区和DG区神经元凋亡发挥神经保护作用。     

红藻氨酸致痫后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化

目的研究红藻氨酸(Kainic acid, KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况。结果KA诱导大鼠癫痫发作后,海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。癫痫发作30 min后GFAP开始增多,1 h达高峰;1 h 后Fos阳性产物开始增多,2 h达高峰。结论海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加,反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节。     

匹罗卡品致痫大鼠海马神经肽Y中间神经元数目变化及其轴突出芽

目的:探讨神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)中间神经元在颞叶癫痫的发生和自我修复中的作用.方法:建立匹罗卡品致痫模型,应用免疫组织化学技术动态观察大鼠海马NPY中间神经元的数目变化及其轴突出芽.结果:实验组大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品后,癫痫持续状态(status epilepticus, SE)诱发成功率为92.9%,死亡率19.2%.免疫组织化学结果显示,实验组大鼠海马门区NPY中间神经元数目在SE后下降,至7 d时降至最低(P<0.01),慢性期开始恢复,SE后60 d时NPY神经元数目与对照组相比仍有减少(P<0.05);CA区域除SE后7 d CA3区NPY神经元数目稍减少外(P<0.05),其余时间点均无明显变化(P>0.05);SE后30 d齿状回分子层可见增多的NPY阳性纤维.结论:NPY中间神经元在不同部位不同时段对颞叶癫痫所致损伤的敏感性不同,NPY中间神经元的缺失在颞叶癫痫发生中起重要作用,NPY中间神经元的轴突出芽在颞叶癫痫的自我修复中起作用.     

匹罗卡品致痫大鼠慢性期海马神经元突触重建的实验研究

目的 探讨颞叶癫痫海马的异常兴奋性与抑制性突触联系变化.方法 建立匹罗卡品致痫大鼠模型,在致痫后60 d左右,利用立体定位仪在活体内注射逆行性示踪剂荧光金(FG)至海马CAI、CA3区,免疫组化方法观察海马异常兴奋性突触联系,免疫荧光双标记法检测NPY中间神经元与FG的共表达,观察海马异常抑制性突触联系.结果 FG注人大鼠海马CA1区,实验组远离注射部位的CA1区、海马CA3区、下托可见FG标记的锥体细胞,实验组CA1区远离注射部位处、CA3区、门区均有FG标记的NPY中问神经元,对照组未见.FG注入大鼠海马CA3区,对照组及实验组CA3区全层、门区锥体细胞均可见大量FG标记,实验组中CA1区部分锥体细胞被FG标记,门区可见双标记的NPY中间神经元,对照组未见.结论 颞叶癫痫大鼠海马慢性期存在异常的兴奋性和抑制性回路重组,包括CAl区锥体细胞之间、下托-CA1区、CA1-CA3区异常的兴奋性联系,以及CA1区中间神经元之间、CA3-CA1区、门区-CA1区、门区-CA3区异常的抑制性神经网络.神经元网络的异常重组町能在颞叶癫痫慢性期的自发发作中起重要作用.

Abstract：

Objective To explore the aberrant formation of excitatory and inhibitory circuit rearrangements of hippoeampus in temporal lobe epilepsy.Methods Pilocarpine-induced animal model was established.At around Day 60 post-modeling,retrograde tracer fluorogold(FG)was injected in vivo into CA1 and CA3 areas of hippocampus by stereotaxic apparatus.Immunohistochemistry of FG was used to observe the aberrant excitatory circuit rearrangements.Double immunofluorescence with NPY(neuropeptide Y)and FG was performed to observe the aberrant inhibitory circuit rearrangements.Results After an iniection of FG into CA1 area.the FG-labeled pyramidal cells could be observed distantly from the zone of dye soread in CA1 area.CA3 area and subiculm.And the FG-labeled non-principal neurons could be seen in stratum oriens of CA1 and hilus in experimental group.Double immunofluorescence revealed that the FG-labeled NPY interneurons were located distantly from the zone of dye spread in CA1 area.CA3 area and hilus in experimental rats.When injection was administered in CA3 area.the FG-labeled pyramidal cells were visible in the whole CA3 area and hilus in both groups.Some pyramidal cells were present in CA1 in experimental group.Also some FG-labeled non-principle cells were foand in hilus and distantly from the zone of dve spread in CA1 area,And the FG-labeled NPY neurons could be seen in hilus in experimental rats.Conclusion Aberrant excitatory and inhibitory synaptic reconstruction exist in hippocampus in chronic phase of temporal lobe epilepsy,including excitatory synaptic connections among pyramidal cells in CA1 area.pyramidal cells between CAl and subiculum and pyramidal cells between CA1 and CA3,inhibitory synaptie connections among dendritie intemeurons in CA1 area,CA3 to CA1,hilus to CA1 and hilus to CA3area,These circuit arrangements may play an important role in the pathogenesis of epilepsy.     

戊四氮致痫大鼠延髓内脏带内Fos, GFAP和TH的表达

目的 研究戊四氮诱导大鼠癫痫发作后延髓内脏带（MVZ）内神经元和星形胶质细胞的反应。方法 用抗Fos蛋白，抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH)和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的三重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术。显示癫痫发作1h后MVZ内反应性神经元与星形胶质细胞的分布。结果 MVZ内的Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多，三重免疫组化方法显示反应性神经元（Fos阳性）与反应性星形胶质细胞（GFAP阳性）关系密切，发现3种不同标记的“神经元-星形胶质细胞复合体（N-ASC）”：即TH /Fos /GFAP 三标记复合体TH /GFAP /Fos-和Fos /GFAP /TH-二标记复合体。结论 MVZ内的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作时反应强烈。可能以N-ASC作为功能单位参与癫痫发病的调节。     

雷公藤内酯对海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞MHC分子表达的影响

目的:评价雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元的免疫保护作用。方法:结晶紫染色观察神经元形态,免疫组化技术检测小胶质细胞MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。结果:30μg/kg雷公藤内酯可使大鼠的癫痫抽搐状态明显较海人酸组缓和,出现时间较海人酸组晚(P<0.05),且可使海人酸诱导大鼠活化小胶质细胞的数量减少,凋亡神经元数量减少。30μg/kg雷公藤内酯可下调海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子(P<0.01)。结论:雷公藤内酯通过抑制小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子和免疫应答对海人酸诱导大鼠神经元凋亡具有免疫保护作用。     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

马桑内酯致痫大鼠大脑皮层及海马神经元钙离子活度的变化

大脑皮层或海马内注射马桑内酯可以引起大鼠癫痫样发作及脑电图痫样放电，应用钙离子选择性微电极测量了癫痫模型大鼠海马和皮层的钙离子活度的改变，皮层或海马注射５μｌ马桑内酯（５ｍｇ／ｍｌ）３ｍｉｎ后观察到细胞外钙离子活度的明显改变，大脑皮层及海马内Ｃａ２＾＋分别下降了０．６１ｍｍｏｌ／Ｌ及０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，与马桑内酯注射前相比较，注射后皮层或海马内的Ｃａ＾２＋活度具有极显著差异（Ｐ〈０．０１）。马桑     

褪黑素对匹罗卡品致痫大鼠行为及脑电图的影响

目的探讨褪黑素(m elaton in,M el)对匹罗卡品(p ilocarp ine,PILO)致痫大鼠行为及脑电图改变的影响。方法通过腹腔注射(intraperitoneal in jection,i.p)匹罗卡品建立癫痫动物模型。25只雄性W istar大鼠分为5组,即对照组、PILO组、M el 10 mg/kg组、M el 25 mg/kg组、M el 50 mg/kg组,每组5只大鼠。观察大鼠行为、脑电图及海马组织学改变。结果腹腔注射M el 10,25,50 mg/kg均可延长痫样放电的潜伏期、降低痫波发放频率、减轻痫性发作及海马损伤程度,尤其是M el 25 mg/kg组与PILO组比较痫性放电潜伏期[(23.6±5.32)m in vs(16.4±2.70)m in]明显延长(P<0.05),痫波发放频率[(92.8±8.11)次/m in vs(122.6±13.28)次/m in]显著降低(P<0.01)。结论M el在PILO致痫大鼠模型中具有抗惊厥作用,该作用具有一定的剂量依赖性。     

雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响

目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响。方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA TRP)。动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化。结果:(KA NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS NS)组相比差别具有显著性(p<0.05)(;KA TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA NS)组相比差别具有显著性(P<0.05)。结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用。     

丁苯酞对氯化锂-匹鲁卡品诱发的癫痫大鼠海马神经元损伤的作用

目的〓〖HTK〗探讨丁苯酞对颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用。 〖HTW〗方法〓〖HTK〗随机将30只雄性成年Wistar大鼠分为丁苯酞组、癫痫组和空白对照组。丁苯酞组和癫痫组先分别给予丁苯酞80mg/kg、等量生理盐水腹腔注射,再分别给予氯化锂、匹鲁卡品建立癫痫模型,在癫痫发作终止后3、24h时将动物处死,分别取出海马在光镜和电镜下观察,并检测超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量。 〖HTW〗结果〓〖HTK〗丁苯酞组能明显延长癫痫发作的潜伏期,增加超氧化物歧化酶的活力（P＜0.01,P＜0.05）,降低丙二醛的含量（P＜0.05,P＜0.01）,细胞结构基本正常,但核仁有边聚、间隙肿胀,部分线粒体膜有断裂和嵴缺失现象。癫痫组细胞肿胀、破裂,神经元数目明显减少, 胞质中线粒体变形、肿胀, 线粒体嵴缺失。 〖HTW〗结论〓〖HTK〗丁苯酞能减轻颞叶癫痫对海马神经元造成的损伤,其作用机制可能与丁苯酞对神经元线粒体的保护有关。     

碱性成纤维细胞生长因子转基因治疗对放射性脑损伤大鼠星形胶质细胞相关蛋白表达的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转基因治疗对全脑放射后脑损伤(radiation injuries of brain,RIB)模型鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达的影响,为探索治疗RIB的新途径提供实验基础.方法 分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑单次25Gy照射建立RIB模型,bFGF转基因治疗组采用侧脑室注射bFGF-pcDNA3.1(±)质粒,并设未照射组为对照.在照射前及照射后20 d和60 d分别观察各组脑组织GFAP和VIM表达情况.结果 照射组病理检查显示海马和皮层神经元轻度变性,胞体萎缩,白质区域较对照组呈现组织结构梳松、血管周隙扩大等表现;bFGF治疗组病变程度明显较照射组轻.各组大鼠照射后GFAP表达均增加,20 d时bFGF治疗组GFAP阳性细胞数[(65±6.2)个]高于照射组[(49±5.8)个]和对照组[(18±2.4)个](P＜0.05),60 d时bFGF治疗组GFAP阳性细胞数(44±5.1)较20 d时明显减少(P＜0.05),其他各组GFAP阳性细胞数与20 d时无显著性差别(P＞ 0.05).bFGF治疗组照射后20 d VIM表达(0.94 ±0.12)较照射组(1.45±0.26)明显减少(P＜0.05),60 d时各组VIM表达量无显著性差别.结论 25 Gy射线照射可提高RIB鼠脑GFAP和VIM急性期表达量,bFGF转基因治疗可增加急性期GFAP的表达,降低VIM表达.     

托吡酯对戊四氮点燃慢性癫(癎)大鼠脑海马胶质细胞增生的影响

目的:探讨脑海马胶质细胞增生在癫(癎)发生、发展中的作用及托吡酯对其的影响.方法:采用戊四氮制备慢性癫(癎)模型,利用托吡酯干扰,选取不同时间点,观察大鼠行为学变化及胶质纤维酸性蛋白在海马回中的表达(免疫组织化学染色).结果:托吡酯组点燃率在27 d明显低于模型组;模型组及托吡酯组胶质纤维酸性蛋白表达增加,并随时间延长更加明显;而不同时间点该表达的增加程度,托吡酯组均低于模型组.结论:胶质纤维酸性蛋白表达的增加,说明出现了胶质细胞活化及脑可塑性变化,而托吡酯明显地抑制了该表达的增加.     

诱导胶质纤维酸性蛋白阳性神经前体细胞系向神经元分化

目的：探讨来源于人胚胎脑室下区(SVZ)的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性神经前体细胞系向神经元分化的潜能。方法：分别采用定量RT-PCR、Western印迹分析及免疫荧光染色检测被全反式视黄酸诱导前后GFAP阳性神经前体细胞系中神经干细胞和神经元特异性标志物表达量的变化情况。采用免疫荧光染色检测GFAP阳性神经前体细胞系移植到动物体内后神经元特异性标志物表达情况。结果：在体外诱导后，GFAP阳性神经前体细胞系中神经元特异性标志物在mRNA和蛋白水平的表达量上升，而神经干细胞标志物表达量下降。移植动物体内，GFAP阳性神经前体细胞系可分化产生神经元。结论：GFAP阳性神经前体细胞系在体内外可以向神经元诱导分化。     

二苯乙烯苷对癫痫大鼠神经细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对癫痫(epilepsy,EP)大鼠神经细胞增殖的影响,并探讨其可能机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二苯乙烯苷干预组。应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠癫痫模型。造模前30 min腹腔注射给药,致痫后6 h腹腔内注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,次日开始每日8时给予腹腔注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,每日1次,连续注射,共注射42 d,KA模型组动物及假手术组给予等量生理盐水腹腔内注射。用免疫组织化学技术观察TSG对大鼠海马齿状回颗粒细胞下层BrdU阳性细胞数目及海马齿状回区星形胶质细胞数目增殖的影响。结果癫痫发生后各组海马齿状回区及皮层均存在GFAP免疫反应阳性细胞,经统计分析二苯乙烯苷干预组较模型组GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞减少,差异有统计学意义(P0.01);BrdU免疫组织化学染色研究显示二苯乙烯苷干预组较假手术组及模型组海马齿状回区细胞增殖数目增加(P0.01),差异有显著统计学意义。结论二苯乙烯苷存在抑制大鼠海马区星形胶质细胞增生,促进增神经细胞增殖的作用。     

黄精口服液对血管性痴呆大鼠行为和海马星形胶质细胞的影响

目的 观察大鼠学习记忆能力和海马星形胶质细胞的变化,探讨黄精口服液对血管性痴呆大鼠的干预效果.方法 应用Morris水迷宫、免疫组织化学法和透射电镜等技术观察血管性痴呆大鼠海马组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达和CA1区星形胶质细胞超微结构的变化.结果 (1)术后3.5个月,痴呆+黄精口服液组大鼠平均逃避潜伏期[(21.5±6.6)s]较血管性痴呆组[(31.8±7.2)s]和痴呆+盐水组[(31.0±9.2)S]减少(P＜0.01).(2)血管性痴呆组和痴呆+生理盐水组大鼠海马结构GFAP免疫反应阳性细胞数增多、校正灰度值比空白对照组增加(P＜0.01);痴呆+黄精口服液组大鼠海马结构GFAP免疫反应阳性细胞数及其胞浆校正灰度值[CA1辐射层、腔隙层和齿状回分子层分别为(27.3±7.6),(28.1±5.8),(35.4±9.6)]较痴呆+生理盐水组大鼠[(53.6±8.1),(57.9±6.4)和(59.7±6.5)]减少(P＜0.01).(3)血管性痴呆组和痴呆+生理盐水组大鼠海马组织微血管周围的星形胶质细胞肿胀,细胞内线粒体变形、肿胀、嵴断裂,胞质内大量溶酶体形成;并见空泡化的胶质细胞足突和退变的星形胶质细胞胞体.痴呆+中药组大鼠海马CA.区中,毛细血管周围的星形胶质细胞突起有轻度水肿,局部区域胶质细胞增生.结论 黄精口服液可抑制海马CA.区星形胶质细胞反应,减少其终足水肿,改善学习记忆能力.     

他罗利姆对癫痫持续状态大鼠海马的影响及脑保护作用

目的研究免疫抑制剂他罗利姆（FK506）对癫痫持续状态（SE）大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的影响及其脑保护作用。方法随机将162只Wistar大鼠分为癫痫组、FK506干预组、对照组各54只。采用匹鲁卡品腹腔注射制作SE模型,FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24、1?h 2次腹腔注射FK506,对照组注射等体积生理盐水;采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中NO、MDA含量、NOS、SOD活性;采用免疫组化法检测海马组织神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达;采用HE染色观察神经元形态变化。结果与癫痫组相比,FK506干预组NO、MDA含量、NOS活性明显降低（P均＜0.01）,SOD活性在癫痫发作后12?h以内降低（P＜0.05）,在3?d之后升高（P＜0.01）;海马nNOS的表达降低（P＜0.01）,存活神经元增加。结论FK506可能通过抑制NOS/NO途径发挥抗癫痫和脑保护作用。