雷公藤内酯醇抗肿瘤作用研究进展

雷公藤内酯醇是从卫矛科植物雷公藤中分离出的环氧化二萜内酯化合物，对多种肿瘤细胞均有很好的杀伤作用，其主要作用机制是通过抑制细胞增殖、干预细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制核因子NF-κB、抑制基质金属蛋白酶（MMP）的表达、影响血管形成等多种途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇通过p38MAPK信号通路诱导Hut102细胞凋亡

目的 探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤蕈样肉芽肿细胞株Hut102的凋亡及其机制.方法 体外培养的Hut102细胞与12.5、25、50、100 nmol/L雷公藤内酯醇共同孵育,分别在24、48、72 h用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)、caspase-3蛋白的表达水平.结果 不同浓度雷公藤内酯醇(12.5、25、50、100 nmol/L)作用Hut102细胞24 h后的增殖抑制率分别为8.67%、30.02%、52.54%、59.62%.Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测经25、50、100 nmol/L雷公藤内酯醇处理24 h后Hut102细胞凋亡率分别为9.19%、21.49%、26.34%,当50 nmol/L雷公藤内酯醇组预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,Hut102细胞凋亡率下降为14.35%.不同浓度雷公藤内酯醇(50、100 nmol/L)处理Hut102细胞后p38、caspase-3蛋白的表达被激活,同样50 nmol/L雷公藤内酯醇组也预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预,结果p-p38的表达降低,caspase-3激活被抑制.结论 雷公藤内酯醇可以抑制Hut102细胞的增殖,其作用机制可能是通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡.     

雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.     

雷公藤内酯醇对T淋巴细胞增殖活性的影响

应用体外细胞培养方法，研究了雷公藤内酯醇对小鼠Ｔ淋巴细胞增殖活性的影响。结果表明：Ｔｒｉ对ＣｏｎＡ激活的淋巴细胞转化及特异性抗原激活的混合淋巴细胞反应均有明显抑制作用，抑制作用的强度与Ｔｒｉ的应用剂量及时机有关。     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的 建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法 雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SBC₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(3∶7)，检测波长为220 nm。结果 雷公藤内酯醇在5～120 μg/mL，线性关系良好(r＝0.9981)。平均回收率96.5%(n＝9)。RSD＜3%。结论 本方法重现性好，灵敏度高。     

雷公藤内酯醇对鳞癌A431细胞增殖凋亡及其COX-2和survivin表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对皮肤鳞癌A431细胞株增殖与凋亡、环氧合酶-2(COX-2)和生存素(survivin)mRNA表达水平的影响,探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定不同浓度TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布以及凋亡峰的出现.RT-PCR法检测TP对A431细胞株COX-2和survivin mRNA表达水平的影响.结果 随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP能够诱导A431细胞株凋亡和改变细胞周期的分布,与对照组相比,G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);另外,TP能抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA的表达,不同浓度处理组两两相比,差异具有显著性(P<0.01).结论 TP通过诱导A431细胞凋亡、抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA表达发挥抗皮肤肿瘤的作用.     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

雷公藤内酯醇对肝癌H22细胞增殖凋亡及COX-2表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌H22细胞增殖、凋亡及环氧合酶-2(COX-2)表达水平的影响. 方法 以体外培养的鼠源性H22细胞株为研究对象,实验分对照组和不同浓度的TPL处理组.MTT比色法测定TPL对H22细胞株增殖抑制情况;TPL处理48 h后,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测COX-2表达变化情况. 结果 随着药物浓度的增加及时间的延长,TPL能明显抑制H22细胞增殖.TPL诱导细胞凋亡及下调COX-2的表达具有浓度依赖性,不同浓度组比较,差别具有统计学意义(P<0.05). 结论 TPL可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制COX-2表达发挥抗肿瘤作用.     

Gli1小分子干扰RNA对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究锌指转录因子Gli1小分子干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌PC-2细胞的增殖和凋亡的影响。方法:筛选出最佳的靶向Gli1siRNA转染人胰腺癌PC-2细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果,四甲基偶氮唑蓝(MTT)和TUNEL+PI双染流式细胞检测Gli1被抑制后细胞增殖和细胞凋亡的情况。结果:Gli1siRNA能在mRNA和蛋白水平下调人胰腺癌细胞株PC-2中Gli1基因的表达,以转染72h时最显著。Gli1表达被抑制后,转染后72h时PC-2细胞生长受到明显抑制,凋亡细胞显著增多。结论:Gli1与胰腺癌细胞的生长和凋亡密切相关,抑制胰腺癌细胞中Gli1表达可抑制胰腺癌细胞生长,促进胰腺癌细胞凋亡。     

鞘鞍醇激酶-1对胰腺癌SW1990细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨鞘鞍醇激酶-1(SPK1)对胰腺癌SWl990细胞增殖和凋亡的影响.方法 培养的胰腺癌SW1990细胞株,实验分为DMS组、PMA组和对照组,各组细胞接种于孔板中,每组设3个复孔,每个实验至少重复3次.DMS组加入N,N-二甲基鞘氨醇(DMS,50μmol/L),PMA组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA,100 nmol/L),对照组按常规培养,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞生长增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测SPK1 mRNA的表达,Western blot检测SPK1蛋白的表达.结果 PMA组细胞的增殖活力[OD值:(1.37±0.03),细胞克隆数目:(292.45±10.68)]较对照组[OD:(1.00±0.01),细胞克隆数目:(215.34±12.23)]显著增加,DMS组细胞的增殖活力[OD值:(0.65±0.02),细胞克隆数目:(130.56±15.6)]较对照组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).PMA组细胞凋亡率[(9.7±0.62)%]较对照组[(16.71±1.53)%]明显下降,DMS组细胞凋亡率[(31.7±1.32)%]较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),PMA组SPK1 mRNA表达水平(0.202±0.013)及蛋白表达水平(0.258±0.015)较对照组[SPK1 mRNA:(0.148±0.006),蛋白:(0.182±0.044)]显著增加,而DMS组SPK1 mRNA表达水平(0.112±0.022)及SPK1蛋白表达水平(0.101±0.034)较对照组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SPK1与胰腺癌细胞的增殖和凋亡密切相关,SPK1的激活可促进胰腺癌细胞的增殖并抑制细胞的凋亡.     

单用雷公藤内酯醇及联合硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞株作用的对照研究

目的 观察单用雷公藤内酯醇（TPL）及联合硼替佐米（PS-341）对霍奇金淋巴瘤细胞株L428的作用及机制探讨.方法 采用MTT比色法检测TPL、PS-341对L428细胞株体外生长的抑制作用;并予Annexin V和PI双染色,周期分析检测细胞凋亡;同时采用Western-blot法检测PS-341、TPL对L428细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、9及PARP蛋白表达水平的影响.结果 TPL可明显抑制L428细胞增殖,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关,以PS-341（80 ng/m1）联合TPL5～500 ng/ml处理L428细胞24h时的抑制作用优于单用TPL的作用;PI的DNA染色及AnnexinV-PI双标记法结果显示：细胞凋亡率与TPL作用浓度呈正相关;TPL作用L428细胞后,随浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白表达上调;Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白均可出现明显的剪切带.结论 （1）TPL可能通过线粒体途径和改变Bcl-2家族抗凋亡因子和促凋亡因子的蛋白表达比例,诱导L428细胞凋亡;（2）PS-341能增强TPL诱导L428细胞凋亡的作用.     

胃黏膜良恶性病变中增殖和凋亡的关系研究

目的 :探讨细胞凋亡和增殖在胃癌发生发展过程中的作用。方法 :对 115例胃癌及癌前病变患者和正常人采用原位末端标记法 (TUNEL)及免疫组化技术检测胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖。结果 :正常人、浅表性胃炎、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、不典型增生、胃癌患者的细胞凋亡指数分别为 (4 .6 2± 1.87) %、(10 .2 1± 2 .4 9) %、(2 4 .6 3± 35 .19) %、(19.32± 4 .0 7) %、(19.86± 4 .6 1) %。PCNA指数分别为 (3.9l± 1.0 4 ) %、(13.5 2± 4 .71) %、(2 0 ,2 2±4 .83) %、(39.81± 6 .35 ) %、(5 4 .77± 10 .8) %。胃黏膜癌变过程中 ,起初三个阶段细胞凋亡和PCNA同时增加 ,而至萎缩性胃炎伴肠化生 ,细胞凋亡指数显著减少 ,PCNA指数显著增加。结论 :在胃癌演变过程中细胞凋亡起重要作用 ,PCNA是反映胃癌细胞增殖活性的一项重要指标     

康莱特诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨康莱特(KLT)对人胰腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用MTT法观察KLT对人胰腺癌细胞株8988细胞增殖的抑制作用。采用TUNEL染色、DNA梯度电泳法和流式细胞术检测细胞凋亡改变，并以RT-PCR和Western blot检测凋亡调节基因p53和bcl-2的表达。结果 KLT能明显抑制人胰腺癌8988细胞的生长，且呈时间和浓度依赖性。KLT作用后8988细胞呈现凋亡特征，TUNEL染色可见发黄绿色荧光的凋亡细胞，DNA电泳可见典型梯形条带，流式细胞术显示凋亡细胞比例升高。RT-PCR和Western blot检测可见p53基因表达显著增加，而bcl-2基因表达减少。结论 KLT能诱导人胰腺癌细胞凋亡，其作用可能与凋亡调节基因p53的上调和bcl-2的下调有关。     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞抑制及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以5～50μmol/L的姜黄素分别处理Hela细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测凋亡,透射电镜进行形态学观察.SABC免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bcl-XL、Caspase-3蛋白表达水平.结果:curcumin对Hela细胞增殖有抑制作用.并呈剂量依赖性.DNA直方图上可见亚"G1"峰;透射电镜观察见部分细胞发生凋亡形态学改变.Bcl-2、Bcl-XL表达均下调,Caspase-3表达增强.结论:姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显抑制作用.上调Cas-pase-3,下调Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

蟾毒灵对CAPAN-2胰腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 研究蟾毒灵在胰腺癌CAPAN-2细胞系中的抗肿瘤作用,探讨其在胰腺癌中的抗肿瘤分子机制。方法 CCK-8法测定蟾毒灵对人胰腺癌CAPAN-2细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测蟾毒灵对细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting法检测蟾毒灵作用于CAPAN-2细胞后Caspase-3酶原(pro-caspase-3)、Bcl-2、Bax、CDC25C、cyclinB1、CDC2蛋白表达水平的变化情况。结果 蟾毒灵对胰腺癌CAPAN-2细胞有抑制增殖的作用,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵未能诱导CAPAN-2细胞凋亡,但经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞周期被阻滞在G2/M期;经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞中CDC25C、cyclinB1、CDC2等关键周期蛋白的表达量显著下降,但是pro-caspase-3、Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白的表达没有发生明显改变。结论 蟾毒灵可显著抑制胰腺癌CAPAN-2细胞增殖,通过诱导G2/M细胞周期阻滞而非诱导细胞凋亡,在CAPAN-2细胞中发挥抗肿瘤作用。     

胃泌素受体拮抗剂与环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺与特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的调控作用。方法MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加丙谷胺(终浓度5.0mmol/L)和/或NS-398(10.0μmol/L),连续培养48h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析检查细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测凋亡抑制基因bcl-2mRNA及蛋白表达。结果丙谷胺和NS-398协同抑制MKN-45细胞增殖;丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为24.7%±3.2%,26.7%±3.4%和36.1%±4.6%,显著高于对照组的1.6%±0.6%(均P<0.01);联合用药组的细胞凋亡率明显高于单一用药组(P<0.05)。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA及蛋白表达(均P<0.05)。结论丙谷胺、NS-398抑制MKN-45细胞增殖,通过下调bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合具有协同抗癌作用。     

雷公藤内酯醇对成纤维细胞的影响

目的：研究雷公藤内酯醇(Tri)对成纤维细胞的细胞动力学及形态学影响，以探讨其抑制增生性瘢痕的机制。方法：用光镜、电镜观察用药前后成纤维细胞的形态学变化，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果：用药组在光镜下细胞密度较低，细胞体细长，部分失去正常的细胞形态、细胞质红染，并可见典型的凋亡小体；电镜下粗面内质网疏松，内容物减少，并可见各期凋亡细胞。细胞动力学检测(FCM)示用药组凋亡比例(AI)明显增加，并呈一定的量效关系，对细胞周期则无影响。结论：Tri促进成纤维细胞的凋亡，可能对胶原的分泌也有一定的影响。     

雷公藤内脂醇对SW480细胞的生长抑制作用

目的观察雷公藤内酯醇(Tritolide,TL)对体外培养的SW480细胞(人结直肠癌细胞)的诱导分化机制,为人结直肠癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测SW480细胞周期进程及凋亡率,相差显微镜观察不同浓度的TL对SW480细胞形态学改变,电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果不同浓度的TL对SW480细胞增殖均有抑制作用,具有明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,细胞数减少,细胞圆缩,电子显微镜下细胞高度空化,线粒体肿胀,可见凋亡小体。结论TL对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,阻止SW480细胞G1期向S期的转化进程并诱导SW480细胞凋亡及超微结构改变。