牛活体采卵技术及其在胚胎体外生产中的应用

自第1头体外生产胚胎(IVP)牛诞生和非手术活体采卵(OPU)技术在牛上应用以来,为了改进IVP和OPU技术,许多研究者致力于提高牛IVP和OPU技术的效率.时至今日,OPU和IVP技术均已成为成熟的技术.阐述了过去十几年中OPU和IVP技术的主要研究成果和研究进展,并总结了该技术的应用历史、应用现状和应用前景.     

通过活体采卵(OPU)的方法来进行牛体外胚胎生产的研究

近年来，体外胚胎生产的技术日益提高，尤其是在牛上应用比较广泛，在1988年由体外生产的胚胎最后可移植到受体的数目达到30000枚，靠超声波引导从活体上采集卵母细胞（OPU）进行体外胚胎的生产的方法现在被广泛采用，这种方法可以使活体持续性的生产胚胎，大大地提高了繁殖效率。且活体采卵是一项非常灵活、方便的技术，通常1周可以采集2次，连续许多周，都不影响供体的繁殖潜力，通常依靠活全采卵的方法（OPU）所获得的平均每8～10个卵母细胞中就可生产出2枚可移植的胚胎，从而提高了胚胎的生产效率，缩短了世代间隔，而且用活体采卵的方法（OPU）所生产的胚胎质量也要好于屠宰的卵巢上所获得的卵母细胞生产的胚胎。目前，这种方法除在牛上应用外、也在其它动物如水牛，马上采用。     

牛活体采卵技术研究进展

活体采卵(Ovum Pick-up,OPU)可生产大量遗传品质优良、系谱明确的体外受精胚胎,成为牛胚胎移植的重要胚胎来源,在奶牛和肉牛生产中得到广泛应用。本文综述了牛OPU技术特点和优势,重点分析了影响OUP效率的因素,以期为牛OUP胚胎生产提供参考。     

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验.在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较.同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法.结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P＜0.01).(2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P＜0.05).(3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化.(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎.     

奶牛活体采卵及体外生产胚胎技术研究

采用盲吸法对17头空怀奶牛和25头青年奶牛进行活体采卵,采集卵母细胞199枚,平均每头采得卵母细胞4.74枚,其中,可用卵母细胞139枚,平均每头获可用卵母细胞3.3枚,经体外系统培养,获受精卵101枚,发育至桑葚胚和囊胚期阶段35枚,受精率和胚胎发育率分别为72.66%和25.17%.选择11枚胚胎移植黄牛受体11头,妊娠4头,妊娠率为36.36%,正常产犊4头.     

牛胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术，可以有效地利用淘汰的高产奶牛和屠宰的青年母牛卵巢中的未成熟卵，大量，廉价地实验室生产胚胎，这对加速我国高产奶牛群和良种肉牛群的繁殖，是一项行之有效的胚胎工程技术，借鉴国外实验室生产牛胚胎的经验和根据我们实验室的实践，本文比较详细地叙述了体外受精牛胚胎（试管牛）的生产过程，包括卵母细胞的获得，培养，精子获能，体外受精以及受精后的胚胎培养，超低温冷冻保存与解冻后的胚胎移植等。     

水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3 d.共采卵120头次.共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的. 3),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细 单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵     

热带亚热带BMY牛的繁殖性状研究

为了探索BMY的繁殖性能，通过在全日制放牧管理和季节性配种条件下，把2001年至2005年的BMY牛繁殖率进行了统计分析，在扩繁点年平均繁殖成活率为68．46％，小哨点为78．72％，表现出良好的繁殖性能。     

牛活体采集卵母细胞的超声波技术

牛活体采集卵母细胞的超声波技术朱化彬罗应荣（中国农业科学院畜牧研究所北京１０００９４）通过超数排卵技术虽然可以得到比自然发情状态下多的胚胎,但是超数排卵效果很不稳定。近十几年来,卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）,体外受精（ＩＶＦ）以及受精后胚胎的体外培养（...     

肉牛冷冻胚胎移植试验初报

2003年6月至2004年10月,在黔南州都匀市高原肉牛有限责仟公司开展了西门塔尔纯种肉牛冷冻胚胎移植工作,经过对25头本地黄牛及杂交奶牛进行诱导同期发情,结果获得80％（20头）的同期发情率和40％（10头）的黄体合恪率,对黄体合格的10头母牛进行了西门塔尔纯种肉牛冷冻胚胎移植,获移植妊娠率40％,移植产（活）犊率20％。结果届示：搞好受体牛品种及个体选择、严格组织和规范饲养管理、必要的适当补饲,准确观察受体牛发情以及合格的黄体要求是胍胎移植取得成功的关键,也是提高胚胎移植受胎率的基础。     

山羊活体采卵及卵母细胞体外受精研究

选择健康空怀山羊母羊,随机分组,分别用PMSG1000u和FSH325~375u超数排卵处理,研究利用外源激素进行超排对山羊活体采卵效果的影响,比较活体采集与屠宰场采集的卵母细胞体外受精效果。结果表明,经超排处理后,卵巢明显增大,同时提高了采集卵母细胞的数量和质量。用FSH超排,≥2mm的卵泡数为23.00个±5.69个,采集卵母细胞数为12.67枚±4.06枚,极显著大于对照组(P<0.01)。活体采集的卵母细胞的体外成熟率及受精率分别为44.44%和33.33%,均略高于从屠宰场获取卵巢采集的可用卵泡卵母细胞,但差异不显著(P>0.05)。     

胚胎移植引进肉用牛品种——安格斯试验初报

湖北省从新西兰美都斯丽公司通过胚胎移植引进安格斯牛品种。该文报道了第1批冻胚移植的初步结果。结果表明,对组织集中的176头受体母牛进行同期发情处理,同期发情率为80.7%,发情牛的移植率为51.4%。     

Effects of Ovum Pick-up Frequency and FSH Stimulation: A Retrospective Study on Seven Years of Beef Cattle In Vitro Embryo Production

The aim of this retrospective study was to compare the number of follicles, cumulus oocyte complexes (COCs) and cultured In Vitro Produced (IVP) embryos obtained from 1396 non‐stimulated Ovum Pick‐up (OPU) sessions on 81 donor animals in a twice weekly OPU scheme. Results were obtained from 640 sessions following FSH‐LH superstimulation, on 112 donors subjected to OPU once every 2 weeks. The stimulation protocol started with the insertion of an ear implant containing 3 mg norgestomet (Crestar, Intervet, Belgium) 8 days before puncture (day ?8). The dominant follicle was ablated by ultrasound‐guided follicle puncture on day ?6. On day ?3 and day ?2, cows were injected with FSH (Ovagen, ICP) twice daily (8 am to 8 pm ), i.e. a total dose of 160 μg FSH and 40 μg LG per donor per stimulation cycle. Animals were punctured 48 h after the last FSH injection (day 0). Progesterone implants were removed the next day. Stimulated donor cows were treated with this protocol at 14‐day intervals. Follicles were visualized with a Dynamic Imaging ultrasound scanner, equipped with a 6.5 MHz sectorial probe. Follicles were punctured with 55 cm long, 18 gauge needles at an aspiration pressure corresponding to a flow rate of 15 ml/min. Cumulus oocyte complexes were recovered and processed in a routine IVF set‐up. Results demonstrate that, expressed per session, FSH stimulation prior to OPU increases production efficiency with significantly more follicles punctured and oocytes retrieved. However, when overall results during comparable 2‐week periods are considered (four non‐stimulated sessions vs one stimulated), more follicles are punctured and more oocytes are retrieved using the non‐stimulated protocol. No significant differences in the number of cultured embryos could be detected, indicating that FSH/LH stimulation prior to OPU might have a positive effect on in vitro oocyte developmental competence as more embryos are cultured with less, presumably better‐quality, oocytes.     

高产奶牛连续活体采卵及卵母细胞体外受精

在超声波扫描仪的指导下,用双孔型采卵针以 １４．７ ｋ Ｐａ 抽吸压经阴道对 ５ 头高产奶牛分别连续实施 ７ 次活体采卵,每 ７ ｄ １ 次,共采集卵子 ２１４ 个,占可见卵泡数的 ５３．９％ ,每次头均采集卵子 ６．１ 个。卵子经过体外培养、体外受精、体外受精胚体外发育培养,于体外受精后 ４８ ｈ 、１６８ ｈ 统计的卵裂率、囊胚发育率分别为 ７５．２％ 和 ２９．７％ 。研究结果表明,在超声波扫描仪指导下对奶牛连续进行活体采卵是可行的,所得卵子应用体外成熟、体外受精、体外培养技术,可生产用于冷冻或移植的胚胎。     

Collection of Oocytes Through Transvaginal Ovum Pick-up for In Vitro Embryo Production in Nanyang Yellow Cattle

The objectives of this study were to use ultrasound-guided transvaginal follicular aspiration to develop a technique for preservation of Nanyang Yellow cattle germ plasm. In Nanyang Yellow heifers, aspiration twice per week yielded a higher mean numbers of aspirated follicles, recovered oocytes and viable oocytes per session than once-weekly aspiration. Intriguingly, twice-weekly aspiration from Holstein heifers yielded a higher mean numbers of aspirated follicles, recovered oocytes and viable oocytes per session than in Nanyang Yellow heifers. Moreover, the oocyte recovery rate was significantly higher in Holstein heifers than in Nanyang Yellow heifers. Importantly, similar rates of embryos undergoing cleavage division were observed in Nanyang Yellow and Holstein, as was the number of viable day 8 blastocysts. These observations demonstrate that twice-weekly aspiration harvested the similar proportions of viable oocytes from Nanyang Yellow and Holstein follicles, and that twice-weekly aspiration yields a higher number of viable oocytes than once-weekly aspiration in Nanyang Yellow heifers. The results also suggest that the combination of ultrasound-guided transvaginal follicular aspiration and in vitro production is an effective and practical strategy for establishment of a germ plasm preservation programme for Nanyang Yellow cattle.     

超排过程中不同发情时间对胚胎生产效果的影响

在牛胚胎生产过程中,由于不同牛只存在个体差异（如超排月龄、体重、营养状况、卵巢发育情况及初情期月龄等）,其对外界环境的适应能力存在不同的差异;目的：如何有效的控制好供体母牛同期发情的发情时间,提升超排后胚胎的质量与数量。方法：笔者选用10-16月龄的纯种肉用型西门塔尔牛进行胚胎生产,通过对112头次10-16月龄牛只超排进行胚胎生产并对相关数据进行统计分析;结果：根据认真观察记录供体牛只拆栓后的发情期表现,出现部分牛只提前发情或延迟发情现象,其中大部分牛只处于拆栓后24h前后两h集中发情情况;结论：供体母牛在拆栓后24h前后两h集中发情的牛只,其头均生产胚胎的数量与质量均优于延迟发情和提前发情的牛只。     

牛胚胎移植试验报告

2000年9月至2003年9月,在大通县青林、多林、逊让、向化等9个乡镇开展了安格斯牛、荷斯坦、皮埃蒙特牛冷冻胚胎移植工作。经过对298头当地黄牛母牛及杂交母牛进行了诱导同期发情,结果获得93.29%的同期发情率和38.13%的黄体合格率。对于黄体合格的106头母牛进行了安格斯、荷斯坦、皮埃蒙特牛冷冻胚胎移植,获得移植妊娠率42.5%。