益生菌对肝硬化患者免疫功能的影响

肝硬化患者易发生多种感染，与免疫功能下降、肠道菌群紊乱有关。目的：观察口服微生态制剂对肝硬化患者细胞免疫功能、外周血单核细胞内毒素受体表达以及血清细胞因子和血浆内毒素水平的影响。方法：选取连续入院的肝硬化患者，予常规保肝治疗和口服微生态制剂4周，应用流式细胞术检测患者治疗前后外周血T细胞及其亚群和自然杀伤细胞、外周血单核细胞内毒素受体Toll样受体（TLR）4和CD14的表达。分别以酶联免疫吸附测定法和偶氮基质显色法检测细胞因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-10水平和血浆内毒素水平。结果：治疗前肝硬化患者外周血总T细胞（CD3）和CD4细胞数明显低于正常对照组（P〈0．05），微生态制剂治疗后CD3和CD4亚群显著升高（P〈0．05）。治疗前肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体TLR4和CD14的表达显著高于正常对照组（P〈0．01），微生态制剂治疗后CD14表达显著降低（P〈0．01），TLR4表达也呈下降的趋势，但差异无统计学意义。治疗前肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α、IL-10水平显著高于正常对照组（P〈0．05），微生态制剂治疗后血清细胞因子和血浆内毒素水平均无明显改变。结论：肝硬化患者存在细胞免疫功能下降和慢性炎症状态，微生态制剂可改善患者免疫功能的紊乱。因此可将其作为一种慢性肝病的辅助治疗。     

病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞Toll样受体4基因表达的研究

目的研究病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞内Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。方法采用鲎试剂法测定86例肝炎患者和11例对照组的血浆脂多糖(LPS)浓度,外周血单核细胞TLR4mRNA的表达用RT-PCR法检测。结果肝炎患者血浆LPS浓度均有不同程度的升高,高于对照组(P<0.05),重型肝炎组升高最显著,与其他各型肝炎比较差异有显著性(P<0.05);重型肝炎组单核细胞TLR4mRNA的表达升高最明显,与其他各型肝炎及对照组比较差异有显著性(P<0.05),其他各型肝炎与对照组比较差异不明显(P>0.05)。结论各型肝炎均存在内毒素血症,以重型肝炎最为显著,且重型肝炎患者外周血单核细胞内TLR4mRNA的表达水平最高,可能与肝细胞损伤相关。     

肝硬化患者外周血单核细胞表面TLR4和TLR2表达的临床意义

目的:探讨肝硬化患者外周血中单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR2表达与肝硬化患者细菌感染的关系,观察抗生素治疗对TLR4与TLR2表达的影响.方法:采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR2/抗TLR4/抗CD14mAb对42例肝硬化患者及正常人的血液单核细胞表面TLR2、TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果:肝硬化腹水组TLR2和TLR4表达(n=30,TLR2,47.65±0.75;TLR4,22.28±0.80)与正常对照组(n=15,TLR2,24.40±2.77;TLR4,14.45±3.23)比较有显著性差异(P<0.05),肝硬化腹水患者治疗前(n=20,TLR2,47.79±0.76;TLR4,28.58±0.79)和治疗后(n=20,TLR2,17.22±2.48;TLR4,12.37±0.35)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化腹水患者与肝硬化无腹水患者组(n=12,TLR2,25.37±1.62;TLR4,14.81±0.29)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化无腹水患者组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:肝硬化腹水患者TLR4与TLR2的表达显著上调,抗生素治疗后显著下调.     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2和4的变化

目的探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2 （TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的变化情况及其意义。方法用流式细胞仪检测正常对照、慢性乙型肝炎患者和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清TNFα的水平。Student-t检验比较3组间TLR2、TLR4和TNFα表达的差异;3组病例TLR2、TLR4的表达水平间及它们与血清TNFα水平间的相关性分析采用线性相关分析。结果正常对照组（30例）、慢性乙型肝炎组（31例）和慢性重型乙型肝炎组（30例）外周血单核细胞TLR2和TLR4的平均免疫荧光强度（MFI）分别为21．5±2．7、39．0±4．1．47．7±21．4和2．3±1．1、3．7±2．3、6．9±4．1;外周血清TNFα（ng／L）水平分别为53．8±38．1、164．3±89．9、359．8±1 40．0,自正常对照组到慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR2、TLR4表达强度和外周血清TNFα水平均依次显著升高;经线性相关分析研究发现,外周血单核细胞TLR2、TLR4表达水平和血清TNFα表达水平间均呈现显著的正相关性。结论TLR2和TLR4可能与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

高血压病患者外周血单核细胞Toll样受体4的表达

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在高血压伴靶器官损害患者外周血白细胞上的表达及其表达差异在高血压发病中的意义。方法采用流式细胞仪检测45例轻型高血压不伴靶器官损害患者、40例高血压伴靶器官损害患者及40名健康对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上TLR4的表达。结果3组外周血淋巴细胞和中性粒细胞TLR4的阳性率平均值低于6%;高血压不伴靶器官损害组单核细胞的TLR4阳性率为(48.2±14.3)%,高血压伴靶器官损害组(55.9±15.2)%,均显著高于健康对照组的阳性率[(40.8±13.6)%,P均<0.01),高血压伴靶器官损害组的TLR4阳性率高于高血压不伴靶器官损害组(P<0.05)。结论TLR4主要表达于外周血单核细胞,在高血压及伴靶器官损害患者其阳性率升高;TLR4及其介导的炎性反应与高血压的发生发展存在一定的相关性。     

高血压病患者外周血单核细胞Toll样受体4的表达

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在高血压伴靶器官损害患者外周血白细胞上的表达及其表达差异在高血压发病中的意义.方法 采用流式细胞仪检测45例轻型高血压不伴靶器官损害患者、40例高血压伴靶器官损害患者及40名健康对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上TLR4的表达.结果 3组外周血淋巴细胞和中性粒细胞TLR4的阳性率平均值低于6%;高血压不伴靶器官损害组单核细胞的TLR4阳性率为(48.2±14.3)%,高血压伴靶器官损害组(55.9±15.2)%,均显著高于健康对照组的阳性率[(40.8±13.6)%,P均＜0.01),高血压伴靶器官损害组的TLR4阳性率高于高血压不伴靶器官损害组(P＜0.05).结论 TLR4主要表达于外周血单核细胞,在高血压及伴靶器官损害患者其阳性率升高;TLR4及其介导的炎性反应与高血压的发生发展存在一定的相关性.     

肝硬化患者外周血内毒素水平及其临床意义

体循环内毒素血症在各种严重肝病，尤其是肝硬化时发生率很高，影响病情发展预后。本文应用鲎试剂改良基质显色法，定量检测了５０例肝硬化患者、３０例乙型肝炎病毒者及２０例同期无肝脏疾病、肝功能正常的胃肠疾病患者的外周血内毒素水平。结果显示，肝硬化患者同人毒素水平显著主增高。     

干扰素治疗前后慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体4水平的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者干扰素治疗前后外周血单核细胞Toll样受体(TLR)4水平的变化及其意义.方法 用流式细胞仪检测30例健康人、65例CHB患者外周血单核细胞表面TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清白细胞介素(IL)-6的水平,鲎试验检测血清内毒素.结果 CHB患者组与正常对照组比较,外周血单核细胞TLR4表达水平、血清IL-6及内毒素水平均升高,具有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).患者应用干扰素针治疗12周时TLR4水平及IL-6水平均下降,但无显著性差异(P＞0.05),内毒素水平下降较明显(P＜0.05);治疗24周时,患者TLR4水平、血清IL-6水平及内毒素水平均明显下降,与治疗前比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论 外周血单核细胞TLR4表达水平与CHB的发病及治疗转归有关,且TLR4水平与IL-6及内毒素水平密切相关.     

内毒素受体、内毒素血症与肝硬化

内毒素在肝脏内可激活Kupffer细胞,合成和释放多种细胞因子和炎症介质,使肝细胞受损,其作用机制主要是通过Kupffer细胞上的内毒素受体启动宿主免疫反应和效应功能。肝硬化患者因多种原因引起肠道菌群生长过度和菌群易位,可导致内毒素血症;反之,内毒素本身又可加重肝脏损伤。因此,通过改变肝硬化患者的肠道微生态,调节肠道菌群,可减少肠道内毒素的产生,防止内毒素血症的发生,减轻肝脏损伤,延缓肝硬化的进程。     

Toll样受体4与肝损伤

Toll样受体是近几年发现的天然免疫受体，主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号传导，是天然免疫与获得性免疫的连接点。Toll样受体4介导内毒素引起的感染性免疫反应，参与了肝脏内的损伤、纤维化、再生与修复等炎症反应过程。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞FCGR3A和TYROBP mRNA的表达及其临床意义

目的通过研究原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲa(Fc fragment of IgG,low affinity Ⅲ a,receptor,FCGR3A)和酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein,TYROBP)mRNA的表达,探讨FCGR3A和TYROBP在PBC发病机制中的作用及临床意义。方法采用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测80例PBC、55例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis type B,CHB)和68名健康对照者(healthy control,HC)PBMC中FCGR3A和TYROBP mRNA基因表达水平,以2-△△Ct法计算基因表达的量,并比较FCGR3A mRNA与TYROBP mRNA表达水平的相关性及FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平与肝功能指标的相关性。结果 PBC患者PBMC中FCGR3A mRNA表达水平(1.96±1.87)显著高于疾病对照组CHB患者(1.38±1.19,P=0.044)和HC组(0.75±0.40,P=0.000),CHB患者也明显高于HC组(P=0.000);PBC患者PBMC中TYROBP mRNA表达水平(1.29±0.66)显著高于HC组(0.98±0.36,P=0.009),而与CHB患者无明显差异(1.19±0.76,P=0.233);PBC患者FCGR3A与TYROBP mRNA表达水平有显著相关性(r=0.519,P=0.000);FCGR3A mRNA表达水平与PBC患者肝功能指标r-谷氨酰转肽酶(GGT)的含量呈明显正相关(r=0.427,P=0.000),而与其他指标无相关;PBC患者TYRBOP mRNA表达水平与肝功能指标无相关。结论 PBC患者FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平的异常,表明FCGR3A和TYROBP可能参与PBC的发病和疾病的维持。FCGR3A mRNA的表达和肝功能指标GGT相关,可能直接参与PBC肝损伤。     

炎症性肠病患者外周血单个核细胞细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原4的表达

背景:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)4是一种重要的免疫细胞共刺激分子,主要表达于活化的T淋巴细胞,对T细胞的激活起抑制作用。目的:通过检测炎症性肠病(IBD)患者外周血单个核细胞表面CTLA4的表达,探讨CTLA4在IBD发病中的作用和功能。方法:将18例活动性溃疡性结肠炎(UC)、4例活动性克罗恩病(CD)患者以及21名健康对照者外周血单个核细胞分离后,以流式细胞仪检测细胞表面CTLA4、CD4 和CD8 的表达。结果:自然状态下,UC和CD患者CD4 CTLA4 表达显著高于对照组(8.2%±4.7%对1.4%±1.3%,P<0.001;4.3%±2.9%对1.4%±1.3%,P=0.011);CD8 CTLA4 表达亦显著高于对照组(9.1%±7.2%对0.9%±0.3%;8.7%±3.5%对0.9%±0.3%,P均<0.001)。经植物血凝素(PHA)刺激后,IBD患者和对照组外周血单个核细胞CTLA4的表达均增加;CD组CD8 CTLA4 表达显著高于对照组(35.0%±10.9%对18.1%±10.1%,P=0.005)。结论:活动性UC和CD患者外周血单个核细胞CTLA4表达增强,提示T细胞激活第二信号通路B7/CD28/CTLA4在IBD的发病过程中起重要作用。     

炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆中肿瘤坏死因子受体相关因子-6的激活

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子-6（tumor necrosis factor receptor—associated factor-6,TRAF-6）在炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆的表达,及其与内镜下疾病活动性的相关性。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF-6蛋白的表达,SYBR—green real time PCR方法分析炎症性肠病患者和正常对照者外周血单个核细胞中TRAF-6 mRNA的表达。数据处理使用Graph Pad Prism 5。结果克罗恩病患者（P=0．000）和溃疡性结肠炎患者（P=0．000）血浆TRAF-6水平显著高于正常对照者,但是克罗恩病患者（r=-0．114,P=0．377）以及溃疡性结肠炎患者（r=0．044,P=0．727）血浆TRAF-6表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性。克罗恩病患者（P=0．000）和溃疡性结肠炎（P=0．000）患者外周血单个核细胞TRAF-6 mRNA表达均显著高于正常对照者外周血单个核细胞中mRNA的表达。结论炎症性肠病患者血浆和外周血单个核细胞中均存在TRAF-6的激活,但血浆TRAF-6的高表达不能反映内镜下的疾病活动程度。     

炎症性肠病患者外周血Th17细胞的变化及其临床意义

背景:Th17细胞是一类能特异性产生白细胞介素-17(IL-17)的CD4~+T细胞亚群,研究显示其参与了多种自身免疫性疾病的发病过程。目的:研究炎症性肠病(IBD)患者外周血Th17细胞比例和IL-17mRNA表达的变化,探讨Th17细胞在IBD发病机制中的意义。方法:纳入10例健康体检者(正常对照组)和53例IBD患者,其中克罗恩病(CD)25例,溃疡性结肠炎(UC)28例,以流式细胞术检测外周血Th17细胞比例,实时PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)IL-17 mRNA表达水平。结果:IBD患者外周血Th17细胞比例明显高于正常对照组,其中活动期又明显高于缓解期,差异均有统计学意义(P0.05);其PBMC中IL-17 mRNA表达水平亦显著高于正常对照组(P0.05),但活动期与缓解期之间差异无统计学意义。结论:IBD患者外周血Th17细胞比例和IL-17 mRNA表达水平明显升高,Th17细胞参与了IBD的发生、发展过程,可能对临床疾病活动度的判断有一定意义。     

miR-197 Expression in Peripheral Blood Mononuclear Cells from Hepatitis B Virus-Infected Patients

Background/Aims

This study aimed to investigate the microRNA (miRNA) expression profiles in peripheral blood mononuclear cell (PBMC) of hepatitis B virus (HBV)-infected patients with different clinical manifestations and to analyze the function of miR-197.

Methods

PBMC miRNA expression profiles in 51 healthy controls, 70 chronic asymptomatic carriers, 107 chronic hepatitis B patients, and 76 HBV-related acute on chronic liver failure patients were analyzed by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). miR-197 mimic and inhibitor were transfected in THP-1 cells. qRT-PCR and ELISA for interleukin (IL)-18 mRNA and protein levels were performed, respectively.

Results

The microarray analysis revealed that 17 PBMC miRNA expression profiles (12 miRNAs downregulated and five miRNAs upregulated) differed significantly in HBV-induced liver disease patients presenting with various symptoms. The qRT-PCR results suggested that the PBMC miR-197 levels regularly decreased as the severity of liver disease symptoms became aggravated. IL-18, a key regulator in inflammation and immunity, was inversely correlated with miR-197 levels. Bioinformatic analysis indicated that IL-18 was a target of miR-197. Exogenous expression of miR-197 could significantly repress IL-18 expression at both the mRNA and protein levels in THP-1 cells.

Conclusions

We concluded that multiple PBMC miRNAs had differential expression profiles during HBV infection and that miR-197 may play an important role in the reactivation of liver inflammation by targeting IL-18.     

肝硬化患者脂质代谢紊乱及其临床意义

目的：了解肝硬化（LC）患者的血脂质变化及其临床意义。方法：选择89例LC患者及20例对照者清晨空腹采静脉血检测TC、TG、HDL－C、LDL－C、apoA、apoB,Lpa及肝功能,比较各组血脂水平的差异性并将血脂质与肝功能进行相关性检验。结果：LC患者各项血脂质除TG外普遍低于对照组,其中LDL－C、apoA,Lp a具显著性意义（P＜0．05－0．0001）,部分脂质LC各亚组间亦存在显著性差异,其下降程度与肝损害程度平行。血脂质与肝功能相关性检验显著TC、LD-C,apoA,Lpa与TBiL呈负相关（P＜0．05）－0．0001）,TG,apoB与ALT呈正相关（P＜0．05）,TG,apoB与AST呈正相关（P＜0．05－0．001）,apoA,Lpa与AST呈负相关（P＜0．01）,TC,HDL－C,HDL－C,apoA,apoB,Lpa与Alb呈正相关（P＜0．01－0．001）。结论：LC患者存在多项血脂质不同程度下降且与TBiL,ALT,AST,Alb等常规肝功能试验有很好的相关性,因此可将血脂质的水平作为评价肝功能的一项参考指标。     

Relationship between Peripheral Portal Blood Flow and Liver Function in Patients with Liver Cirrhosis: Pulsed Doppler Ultrasonographic Study

Nishihara K, Sakata K, Yagyu T, Nakashima K, Suzuki T. Relationship between peripheral portal blood flow and liver function in patients with liver cirrhosis. Pulsed Doppler ultrasonographic study. Scand J Gastroenterol 1994;29:859-864.

Background: The relationship between portal hemodynamics and liver function in patients with liver cirrhosis remains unclear. Methods: Using pulsed Doppler ultrasonography, we investigated portal hemodynamics in the trunk and the intrahepatic peripheral vessels and its relation to liver function in cirrhotic patients. Results: The portal blood flow in the right anterior branch (RAB) in cirrhotic patients (n equals; 40) was significantly lower (p < 0.01) than that in normal subjects (n equals; 40). In the cirrhotic patients the portal blood flow in the RAB was significantly correlated with the values of serum albumin, total bilirubin, cholesterol, cholinesterase, prothrombin time, and ICG R-15, and that in group C (Child's grading) was significantly decreased (p < 0.01) compared with that in group A. No such difference was found in the main portal vein, the right posterior branch, or the umbilical portion of the left portal vein. Conclusions: The decrease in blood flow in the RAB is closely related to the impairment of liver function in cirrhotic patients.