联合转染PDGF和c-myc反义寡核苷酸抑制移植血管狭窄研究

目的探讨血管移植后联合应用血小板源性生长因子（PDGF）和原癌基因c-myc反义寡核苷酸（AODN）抑制血管平滑肌（VSMC）增殖和防止移植血管狭窄的作用。方法选48只新西兰雄性白兔,随机分为对照组、PDGF-AODN组、c-mycAODN组和PDGF-AODN加c-myc-AODN组,每组12只;将同一只兔的左、右髂外动脉（各1．0cm）对换移植,移植血管用PDGF-AODN和c-myc-AODN液浸泡,血管吻合口用AODN液浸泡过的缝线吻合;取移植血管制片显微镜下观察内膜增生情况,计算机图像分析测量其内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并分别用原位杂交组织化学和免疫组织化学染色计数PDGF和c-myc阳性细胞数。结果PDGF-AODN加c-myc-AODN组的移植血管内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和PDGF阳性细胞及C-myc阳性细胞数均显著低于对照组（P〈0．01）,而且亦明显低于单独转染PDGF-AODN组或C-mycAODN组（P〈0．05）,PDGF-AODN组和c-myc-AODN组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论联合应用PDGF-AODN和c-myc-AODN能有效抑制VSMC增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄,为利用反义核酸技术联合调控多个基因防止移植器官内血管狭窄提供参考。     

c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响

目的 :探讨c -myc反义基因治疗肿瘤的机制。方法:将正义 (sense)、反义 (antisense)、错配 (mismatch)的c -myc寡核苷酸作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC -7721 ,分别应用免疫组化、RT -PCR、PCR -ELISA等方法 ,观察对c -myc蛋白表达、端粒酶亚单位及活性表达的影响。结果:10μmol/L浓度的反义c -myc寡核苷酸作用于SMMC -772124h、48h后 ,相应的c -myc蛋白、端粒酶催化亚单位hTERTmRNA及其端粒酶活性与空白对照组相比 ,差别有统计学意义(P<0.01);而正义组和错配组与空白对照组相比 ,差别无统计学意义(P>0.05)。结论:c -myc反义寡核苷酸可能通过抑制端粒酶活性而抑制肿瘤细胞增殖。     

c-myc反义寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用

目的　探讨c myc反义寡核苷酸 (c mycASON)对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用的影响。方法　立体定向法将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾壳核建立鼠脑胶质瘤模型 ,采用人工合成的c mycASON和c myc正义寡核苷酸 (c mycSON)注射于瘤区。按接种后给药的种类、浓度及给药间隔时间将动物随机分成ASON 1组、2组、3组 ;SON 1组、2组、3组 ;生理盐水 1组、2组 (NS1组、2组 )。电镜观察凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果　 (1)反义组出现较多的凋亡细胞 ,正义组与生理盐水组凋亡细胞少。 (2 )各治疗组均显示凋亡峰 ,ASON 1组、2组、3组细胞凋亡率分别为 (18 8± 1 3) %、(2 0 3± 1 4 ) %、(17 8± 1 1) % ,各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (3)反义组肿瘤细胞在细胞周期G0 /G1期所占比例较大 ,各反义组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　c myc反义寡核苷酸能诱导鼠脑胶质瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖。     

Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响.方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性.结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降.免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性.结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性.     

IGF-IR反义寡核苷酸对IGF-IR蛋白表达影响

目的探讨IGF-IR反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞中IGF-IR蛋白表达的影响。方法采用免疫组化法SP法,检测各组EC9706细胞中IGF-IR的蛋白表达及观察IGF-IR反义寡核苷酸对EC9706细胞中IGF-IR蛋白表达的影响。结果IGF-IR蛋白在EC9706细胞中呈阳性表达;3条IGF-IR反义寡核苷酸转染的EC9706细胞中IGF-IR蛋白表达,差异无显著性(P>0.05),但均显著低于无关寡核苷酸转染组及无转染组(P<0.05)。结论IGF-IR反义寡核苷酸可抑制食管癌EC9706细胞中IGF-IR蛋白表达。     

反义寡核苷酸药理的研究现状

人工合成的反义寡核苷酸抑制相关基因的转录和翻译，对许多涉及基因表达的疾病有一定的治疗作用。对反义寡核苷酸的药动学和药效学，不良反应已有较多的临床前研究，其对肿瘤，病毒感染等的临床试验初步结果，都显示了它的应用前景。     

靶向HER-2 mRNA反义寡核苷酸对SK-BR-3乳腺癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响

目的　检测HER 2特异性的反义寡核苷酸HA82 4对SK BR 3乳腺癌细胞Caspase 3蛋白表达的影响。 方法　选用HER 2高表达的SK BR 3乳腺癌细胞株作为试验的细胞株。HA82 4合成如前所述 ,HA4为已报道的阳性序列 ,Scramble设定为随机对照序列。上述药物分别以浓度为 2 0 0nmol·L-1孵育SK BR 3细胞 8h和 36h ,之后采用逆转录PCR法与免疫细胞化学技术检测SK BR 3细胞HER 2mR NA及Caspase 3蛋白表达水平。 结果　与Scramble对照序列相比 ,HA82 4、HA4能抑制HER 2mRNA的表达 ,HA82 4作用更强 ;与Scramble相比 ,HA82 4、HA4对Caspase 3蛋白表达水平则无影响。结论　HA82 4、HA4这两种靶向HER 2mRNA反义药物对SK BR 3乳腺癌细胞株增殖的抑制作用可能与激活Caspase 3蛋白无关。     

反义寡核苷酸对多药抗性基因表达影响的研究

多药抗生现象是肿瘤有效化疗的主要障碍，其中ｍｄｒ１基因过量表达产生膜蛋白ＰｇＰ是最关键的一种。利用该多药抗生表型标志建立了ＥＬＩＳＡ法定量检测ｍｄｒ１的表达水平，并用反义寡核苷酸对基因的表达进行调控，结果天然寡核酸在Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ的介导下能一定程度地抑制ＰｇＰ蛋白的合成。     

含气微泡介导反义寡核苷酸转染实验的参数优化

近年的研究表明，含气微泡在超声作用下的声孔效应（sonorporation）可明显增加基因的转染率，不仅安全性高，而且针对不同的基因具有定位和时空可控性。利用含气微泡作为基因与药物的超声靶向递送的载体，要求微泡的包膜材料在包裹气体的同时还必须具有足够的韧性和强度，使其在体内外都能保持一定的稳定性，特别是能克服体内动脉压力的影响。     

丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos、c-myc和c-jun mRNA表达的影响

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡ,TSN)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡA,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法实验用新生大鼠,差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大,丹参酮ⅡA和缬沙坦(valsartan)进行干预;采用相差显微镜测量细胞大小;测定心肌细胞3H-亮氨酸参入作为心肌细胞肥大的指标;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos、c-myc和c-junmR-NA的表达;MTT法检测细胞活力。结果用MTT法检测发现,培养的心肌细胞中加入TSN(5~80μmol·L-1),24h后会产生微弱的细胞毒性,但心肌细胞单层在TSN存在的情况下可以继续同步收缩。在AngⅡ持续作用7d后,血管紧张素Ⅱ组心肌细胞直径增大(28·5±3·8)μm,与对照组(19·8±1·9)μm相比差异有显著性(P<0·05);TSN抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大(21·3±2·5)μm,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0·05),AngⅡ作用24h后,心肌细胞合成速率AngⅡ组(1900±100)cpm较对照组(1205±129)cpm明显增加(P<0·01),TSN和valsartan本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响,但均能抑制AngⅡ刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0·01)。在培养液中加入AngⅡ作用30min后,c-fos、c-myc和c-junmRNA的表达明显增强(P<0·01),预先加入TSN或valsartan作用30min,可阻断AngⅡ的作用(P<0·01),而TSN和valsartan本身对原癌基因c-fos、c-myc和c-junmRNA的表达无影响。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这可能与其抑制了原癌基因c-fos、c-myc和c-jun的表达有关。     

Antisense oligodeoxynucleotides downregulated c sis mRNA expression to inhibit proliferation of vascular smooth muscle cells 1

目的：研究ｃｓｉｓ反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对ｃｓｉｓ表达及血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖抑制效应．方法：用合成ｃｓｉｓ正、反义ＯＤＮ培养ＶＳＭＣ;用液闪测定［３Ｈ］ＴｄＲ掺入并细胞计数,观察细胞增殖;用逆转录ＰＣＲ,评价ｃｓｉｓ表达．结果：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ２,４,６,８,１０μｍｏｌ·Ｌ－１抑制ＶＳＭＣ（１０３％±０７％,２２６％±０９％,３１０％±１１％,３５４％±０９％,４３３％±１２％）和降低［３Ｈ］ＴｄＲ掺入（６８％±０３％,９７％±０７％,２９０％±０６％,３２０％±０７％,５０６％±１３％）呈有剂量依赖性．反义ＯＤＮ１０μｍｏｌ·Ｌ－１培养细胞４ｄ,最大抑制率达６０３％±１０％,［３Ｈ］ＴｄＲ掺入降低５６３％±０９％,ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达明显降低;而正义ｃｓｉｓＯＤＮ对ＶＳＭＣ无抑制,细胞数和［３Ｈ］ＴｄＲ掺入及ｃｓｉｓｍＲＮＡ水平与对照无差异．结论：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ明显下调ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达,显著抑制ＶＳＭＣ增殖     

细脚拟青霉多糖诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成和iNOS mRNA的表达

目的研究单一组分细脚拟青霉多糖(Paecilomyces tenuipespolysaccharide,PTPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其作用机制。方法应用水提、乙醇沉淀、DEAE-纤维素色谱,对PTPS进行提取并分级;用CCK-8试剂检测PTPS对小鼠脾细胞的增殖作用,硝酸盐还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量和RT-PCR半定量法检测iNOS mRNA的表达。结果从细脚拟青霉菌丝体中分离出含糖量为92%的中性多糖PTPS,可促进脾细胞的增殖,并在一定浓度下显示剂量依赖效应;能明显诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成和iNOS mRNA的表达。结论PTPS通过诱导小鼠巨噬细胞NO合成和iNOS的转录,表明其具有免疫调节和潜在的抗肿瘤活性。     

可溶性CD40配体对NB4细胞增殖及survivin mRNA表达的影响

目的 研究可溶性CD40配体(Soluble CD40 Ligand,sCD40L)对人白血病NB4细胞增殖的作用,并探讨其对生存素mRNA(survivin mRNA)及白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法 采用MTT法检测sCD40L孵育NB4细胞体外增殖的影响;通过RT-PCR检测survivin mRNA表达;ELISA测定IL-6的影响.结果 不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml)的sCD40L对NB4细胞随着药物浓度增加、作用时间延长,细胞增殖抑制率上升,差异有统计学意义(P＜ 0.05);sCD40L对NB4细胞survivin及IL-6的表达有明显的抑制作用,与细胞对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量-时间依赖性.结论 sCD40L在体外能够明显抑制NB4细胞增殖,具有剂量-时间依赖性.sCD40L抑制NB4细胞增殖与survivin及IL-6表达相关,并可能与其下调有关.     

不同条件对RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量的影响

目的 探讨RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量可能的影响因素。方法 在不同裂解液浓度、裂解时间、样品稀释浓度和参比品条件下,使用RiboGreen荧光染料法对不同生产工艺的mRNA疫苗的mRNA含量进行检测。结果 在裂解液为0.1%〜2.5% Triton X-100、裂解5〜30 min、样品稀释至mRNA含量0.5〜1.5 μg/ml时,mRNA含量检测结果的差异无统计学意义;不同参比品序列下样品mRNA含量检测结果差异有统计学意义。结论 根据检测样品的mRNA含量的回收率,初步确定了mRNA疫苗中mRNA含量检测的最适条件。     

屈洛昔芬对妊娠大鼠黄体细胞凋亡和C-myc、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响(英文)

目的:观察屈洛昔芬对妊娠大鼠黄体细胞凋亡的影响,并分析黄体中C-myc,Bax和Bcl-2蛋白表达与屈洛昔芬所诱导的黄体细胞凋亡间的可能联系。方法:大鼠于妊娠第2天口服给予屈洛昔芬20mg·kg~(-1)后,分别于第4天和第8天取卵巢,HE染色和TUNEL法检测黄体中凋亡细胞的存在,免疫组织化学方法观察黄体中C-myc,Bax和Bcl-2蛋白的表达,同时测定卵巢重量、蛋白质含量及血中孕酮水平。结果:大鼠经屈洛昔芬处理后,第4天卵巢黄体中出现明显的凋亡细胞,第8天时更加明显。卵巢重量、蛋白质含量及血清孕酮水平在第8天时显著下降。屈洛昔芬处理组大鼠卵巢黄体中C-myc蛋白表达在第4天即显著增加,Bax蛋白表达的显著增加在第8天可观察到,而Bcl-2蛋白在卵巢黄体中的表达无明显改变。结论:屈洛昔芬可诱导妊娠大鼠着床前黄体细胞凋亡,C-myc蛋白及Bax/Bcl-2蛋白表达的增加可能与该过程有关。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3mRNA表达的影响研究

目的 探讨汉黄芩素对胶质瘤U251细胞Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 192株人胶质瘤U251细胞株分别用汉黄芩素（96株）、替莫唑胺（TMZ）（48株）处理,留取48株作为空白对照组,半定量RT-PCR法检测Survivin mRNA与Caspase-3 mRNA表达强度,并在3组之间进行对比分析.结果 空白对照组Survivin mRNA表达强度为（0.773±0.176） μM,显著高于汉黄芩素组的（0.382±0.087） μM及TMZ组的（0.408±0.092） μM （P ＜ 0.05）;Caspase-3 mRNA表达强度为（0.097±0.043） μM,显著低于汉黄芩素组的（0.454±0.213） μM及TMZ组的（0.432±0.187） μM（P ＜ 0.05）,汉黄芩组与TMZ组之间比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）.结论 汉黄芩素可通过下调Survivin mRNA的表达并上调Caspase-3 mRNA的表达起到有效诱导人胶质瘤U251细胞凋亡的作用.     

Tissue specific basal expression of soluble murine epoxide hydrolase and effects of clofibrate on the mRNA levels in extrahepatic tissues and liver

 The soluble epoxide hydrolase mRNA level in liver was increased eight-fold upon administration of the hypolipidemic drug and peroxisome proliferator clofibrate for 7 days to mice. The soluble epoxide hydrolase mRNA was back at control levels within 1–2 days after clofibrate withdrawal. The highest expression was in liver, intestine and kidney. Lower levels were found in heart and muscle and very low levels were found in testes, lung, brain and spleen. The mRNA levels were increased in liver, kidney and heart by clofibrate. Received: 17 January 1995/Accepted: 12 June 1995     

京万红软膏上调PDGF mRNA表达改善大鼠缺血合并外伤型糖尿病足的研究

目的考察京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足的疗效及作用机制。方法建立糖尿病大鼠模型,在此基础上建立大鼠缺血合并外伤型糖尿病足模型。实验设置4组,每组大鼠15只,分别为假手术组、模型组、京万红软膏组、重组人表皮生长因子外用溶液(rhEGF)组。给药14 d,记录给药前后大鼠体质量、血糖、足部形态及溃疡面积的变化情况。并于给药后取足部溃疡部位组织行HE染色,采用RT-PCR法检测京万红软膏对血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT-1 mRNA表达的影响。结果京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足具有消肿生肌,促进创面愈合的功效。与模型组相比,京万红软膏组给药14 d后可极显著减少大鼠足部外伤部位的溃疡面积(P0.01);可极显著上调PDGF mRNA的表达(P0.01)。结论京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足具有促进伤口愈合的功效,可能与上调PDGF mRNA的表达相关,但对VEGF及其受体Flt-1 mRNA的表达没有影响。