细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化.方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)刺激VSMC内贮Ca2+释放入胞浆,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响.结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P＜0.05或0.01).RY刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaM-PK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY刺激组相比差异显著(P＜0.01).结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2+、PKC、MAPK来介导.钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖.     

钙激动剂介导血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

为探讨钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在雷尼丁刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用,以培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型,用雷尼丁刺激其内贮Ca^2 释放入胞浆,环孢素A阻断钙调神经磷酸酶信号通路,维拉帕米阻断钙通道,检测血管平滑肌细胞钙调神经磷酸酶、丝裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶C活性,用^3H-亮氨酸及^3H－胸腺嘧啶掺入量作为反应细胞增殖的指标。结果显示,雷尼丁刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著（P＜0．01）;环孢素A及维拉帕米能明显抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白核酸合成速率增高,与雷尼丁刺激组相比差异显著（P＜0．01）。同时发现雷尼丁刺激组钙神经磷酸酶、蛋白激酶C活性与对照组平滑肌细胞相比差异显著（P＜0．05或0．01）。环孢素A和维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞钙调神经磷酸酶活性增高,维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白激酶C活性的增高。提示钙调神经磷酸酶信号通路在雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖中起重要作用,但钙调神经磷酸酶信号通路不是雷尼丁介导平滑肌细胞增殖的唯一信号通路,以丝裂素活化蛋白激酶为核心的信号通路亦参与了雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖。     

细胞内信号传递与血管平滑肌细胞的增殖

细胞增殖是细胞增殖信号作用于细胞膜或胞浆受体并经细胞内信号传递进而影响细胞周期的结果 ;与细胞增殖有关的细胞内信号传递系统包括 G蛋白、蛋白激酶 A和 C以及酪氨酸蛋白激酶系统等 ;细胞内信号在基因水平上的传递是细胞内信号传递系统的延续 ;细胞周期时相的改变是推动细胞增殖的重要原因。血管平滑肌细胞 ( VSMC)的增殖也不例外 ,但是致 VSMC增殖的细胞内信号传递过程的细节还不十分清楚 ,探讨 VSMC增殖的细节对于心血管疾病的防治有着重要的理论意义     

SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 在培养液中加入或不加SHH信号通路特异抑制剂Cyclopamine体外培养人血管平滑肌细胞,然后用四唑蓝(MTT)比色试验检测细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期,分别计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI).结果MTT结果显示,Cyclopamine对血管平滑肌的抑制具有时间及浓度依赖性;流式细胞术检测结果显示,Cyclopamine使血管平滑肌增殖指数降低,凋亡指数升高.结论 SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中发挥重要作用.     

信号转导子和激活子3通路调控大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移机制研究

目的研究转录信号转导子和激活子3（stat3）通路与大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的关系,明确VSMCs增殖的信号转导过程。方法应用脂质体转染Stat3反义寡核苷酸作用于大鼠VSMCs,应用酶联免疫法（ELISA）检测Stat3水平变化及MTF法检测细胞增殖状态,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测stat3、磷酸化stat3及其靶基因产物Cyclin D1、Bcl—XL的表达。结果转染Stat3反义寡核苷酸后,大鼠VSMCs中Stat3水平明显下降（P〈0．01）,同时其增殖水平降低,而相应空白对照组、脂质体组、转染正义寡核苷酸组变化不明显。转染Stat3反义寡核苷酸的VSMCs中stat3、p-Stat 3、Cyclin D1蛋白表达水平随作用时间延长而下降（P〈0．01）,而Bcl—xL水平无明显变化。结论癌基因stat3信号通路与大鼠VSMCs增殖高度相关,可能通过其下游靶基因Cyclin D1影响其增殖,而阻断此通路则可抑制VSMCs的增殖。     

血管平滑肌细胞增殖和迁移的信号传导调控及其研究进展

动脉中膜平滑肌细胞向内膜的迁移和增殖 ,在动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成行术 (PTCA)术后再狭窄等发病机制中起着重要作用。其在增殖和迁移过程中受蛋白激酶C、Ca2 /钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、磷脂酰肌醇3 激酶 /蛋白激酶B、丝裂原激动蛋白激酶等多种信号传导通路调节。本文就血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和迁移的这些信号传导通路及其治疗的最新研究进展作一综述。     

一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖和凋亡

一氧化氮是重要的血管活性物质、第二信使和神经递质。近年发现一氧化氮还具有调节血管平滑肌细胞增殖和凋亡等作用，其生成多少的变化在血管重建性疾病，如肺动脉高压、高血压等的发生和发展中起着重要作用。外源性给予一氧化氮或基因治疗在这些疾病的防治中有着广泛的应用前景。     

血管成形术后平滑肌细胞增殖的机制

本文介绍冠脉成形术后血管平滑肌细胞增生的细胞生物学机制和影响其增殖程度的相关因素。     

血管损伤影响离体平滑肌细胞增殖与钙稳态有关

本实验采用球囊剥脱术在体损伤血管，于术后３天和１０天取出血管做平滑肌细胞培养。结果发现，血管损伤后血管平滑肌细胞增殖活性显著增加，ＤＮＡ和蛋白质合成加速，细胞数目增多。在血管平滑肌细胞增殖过程中，钙内流增加，胞内钙含量升高。应用１０μｍｏｌ·Ｌ￣（－１）异搏定不但对钙稳态变化有一定的抑制作用，而且还对血管损伤诱导的平滑肌细胞增殖有抑制作用。这些结果提示血管损伤可致血管平滑肌细胞增殖；钙稳态失衡可能是血管损伤诱导血管平滑肌细胞增殖的细胞学机制之一。     

内皮素-1在血管平滑肌细胞增殖作用中的研究进展

血管重构是血管壁功能和结构异常改变的过程,涉及血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和细胞外基质的病理改变。血管平滑肌细胞增殖在血管重构中起关键性的作用。内皮素-1是一种活性多肽,参与调控血管平滑肌细胞收缩、增殖、迁移和基因表达等多项细胞功能。内皮素-1在平滑肌细胞增殖的作用机制可能是防止血管重构的关键靶点。     

γ射线对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :了解γ射线对血管平滑肌细胞 (SMC)增殖的影响及剂量—效应关系。方法 :在无菌条件下取猪的胸主动脉 ,用组织块贴壁法培养SMC ,取进入指数生长期的猪主动脉SMC分别用 0Gy、3 5Gy、7 0Gy、14 0Gy、2 8 0Gyγ射线照射 ,用3 H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)掺入试验分别在照射后 12h、2 4h、36h、48h测SMC的3 H TdR掺入量 (以每分闪烁计数值表示 ) ,同时观察细胞形态的变化。结果 :不同照射剂量在各时点3 H TdR掺入量均较照射剂量为 0Gy时明显减少 (P <0 0 5 ) ,γ射线对SMC增殖的抑制作用为 7 0Gy及 14 0Gy >3 5Gy ,而 2 8 0Gy抑制作用最强。形态学观察发现各组细胞轮廓明显增强 ,胞浆中可见颗粒状物质 ,14 0Gy照射细胞时出现空泡样变 ,照射剂量 2 8 0Gy可见大量细胞死亡。结论 :γ射线 ( 3 5Gy～ 2 8 0Gy)能明显抑制SMC增殖 ,且抑制作用随剂量增大而增强 ;照射剂量 <14 0Gy时以细胞抑制作用为主 ,照射剂量 2 8 0Gy时以致死效应为主     

BMP信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMC,将其随机分为正常对照组、高磷组、华法林(10μmol/L)干预组及华法林(10μmol/L)+维生素K(10μmol/L)干预组。对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红染色检测钙结节,Western blot检测细胞中Runx2蛋白的表达变化,RT-PCR检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad1及Runx2的表达变化。结果茜素红染色结果显示,与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组钙化结节明显增多;钙含量测定结果与茜素红染色结果基本一致。与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组ALP活性明显增加(P0.05),Runx2 mRNA和蛋白表达水平及BMP-2、Smad1 mRNA表达明显增高(P0.05);与华法林干预组相比,华法林+维生素K干预组细胞钙含量、ALP活性及BMP-2、Smad1、Runx2的表达均明显降低(P0.05)。结论BMP信号通路参与了华法林促进的大鼠VSMC钙化,其可能的作用机制是介导了VSMC的表型转化。     

凝血酶诱导CBP高表达刺激大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的:探讨凝血酶诱导大鼠CBP高表达影响大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用机制.方法:采用10-3、10-2、0.1、1、10 U/ml的凝血酶干预体外培养的VSMCs 30min.RT-PCR法、蛋白印记法分别检测rCBPmRNA和蛋白质的表达变化.流式细胞技术检测细胞周期,评价细胞增殖能力.结果:凝血酶可在...     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的免胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞，在与凝血酶(4．0ku／L)共同孵育的条件下，分别给予水蛭素(6．0ku／L)和肝素(6．0ku／L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞周期，免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现，重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖，其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制.选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.O ku/L)进行干预.通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达.结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关.     

同型半胱氨酸经由N-甲基-D-天冬氨酸受体-Cyclin D通路诱导血管平滑肌细胞增殖

目的探讨同型半胱氨酸可否经由N-甲基-D-天冬氨酸受体通路诱导血管平滑肌细胞增殖及其可能的终末靶分子。方法以同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞增殖,并合用N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂MK801以观察其对血管平滑肌细胞增殖的影响。应用MTT法检测血管平滑肌细胞增殖;流式细胞术测定细胞周期;逆转录聚合酶链反应检测Cyclin D1 mRNA的表达。结果同型半胱氨酸显著刺激血管平滑肌细胞增殖、促进血管平滑肌细胞从G0/G1向S期转换,并上调Cyclin D1 mRNA的表达。而N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK801同步抑制血管平滑肌细胞增殖及血管平滑肌细胞从G0/G1向S期转换,同时降低Cyclin D1 mRNA的表达,上述效应皆具明显的剂量-效应关系。结论同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞的促增殖效应可能部分是通过N-甲基-D-天冬氨酸受体介导,并最终经由Cyclin D通路实现。