灵芝孢子粉多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性初探

采用水浴回流法提取灵芝孢子粉粗多糖,再依次使用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sepharose CL-6B凝胶色谱柱分离纯化得到2种多糖组分GLP1a和GLP1b,HPSEC法测得2种组分均呈单一峰,重均分子量分别为1.12×106和1.21×105。HPLC、红外光谱和核磁共振分析的结果表明,GLP1a和GLP1b主要由葡萄糖组成,主链都是以β-(1,6)糖苷键连接,GLP1b在部分1→6连接的葡萄糖的3位和4位有分支。MTT实验表明,2个多糖级分均具有一定的免疫活性,而且都存在明显的量效关系,GLP1b的免疫活性明显高于GLP1a。     

铁皮石斛多糖分离纯化及单糖组成测定

将铁皮石斛粗多糖经DEAE-52纤维素柱分离得到了四个多糖组分(DO-1、DO-2、DO-3、DO-4),并将组分DO-1经Sephadex G-200柱纯化得到多糖DOP。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化方法进行高效液相色谱分析,分析结果得出,多糖DOP由D-甘露糖、L(+)-鼠李糖和D-葡萄糖三种单糖组成,通过外标法定量得知D-甘露糖∶L(+)-鼠李糖∶D-葡萄糖=1.936∶0.856∶0.691。测定了多糖DOP抗氧化活性,结果显示其具有良好的清除能力。     

土三七多糖提取分离及其单糖组成分析

采用水提醇沉法对土三七多糖进行提取分离,加三氯乙酸使蛋白质沉淀去除后,经Sepharose Cl-6B柱分离纯化,洗脱液采用苯酚-硫酸法跟踪检测,得到2个多糖组分土三七多糖A (TSQPA)、土三七多糖B (TSQPB),采用高效凝胶过滤色谱法对2种多糖进行分子量测定,通过离子色谱法进行多糖的单糖组成分析。结果表明,多糖TSQPA分子量为12 884 Da,其单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖,其物质的量比n (阿拉伯糖)∶n (半乳糖)∶n (葡萄糖)=1∶0.6∶4.5; TSQPB分子量为506 Da,单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖,其物质的量比为1∶0.8∶10。     

石花菜多糖的分离纯化及单糖组成分析

以石花菜为原料,对石花菜多糖进行分离纯化,并对纯化后多糖组分的理化性质及单糖组成进行分析。利用复合酶法提取石花菜多糖并采用Sevage法脱蛋白,通过DEAE-52离子交换柱层析及Sephadex G-200凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,按峰收集主要的多糖组分GAP1,对其总糖、蛋白质、糖醛酸及硫酸基质量分数进行测定,并采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)对多糖进行衍生化,通过高效液相色谱法测定其单糖组成。结果表明:石花菜粗多糖经柱层析后收集得到主要多糖组分GAP1,其总糖质量分数为92. 56%,糖醛酸质量分数为44. 53%,硫酸基质量分数为6. 92%,不含蛋白质; PMP柱前衍生高效液相色谱法测得GAP1主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和L-岩藻糖6种单糖按照不同比例缩合而成,各单糖物质的量比为1. 00∶1. 00∶4. 45∶27. 31∶2. 27∶1. 88。     

胶网藻多糖分离纯化、化学组成及其抗氧化活性

研究胶网藻（Dictyosphaerium sp.1A10）多糖的抗氧化活性并分析多糖的基本结构特征。采用超声辅助提取法对胶网藻多糖进行提取,并用DEAE-52纤维素柱层析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,测定其 2,2-二苯基-1-苦基肼 [2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH]、2,2''-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸 [2,2''-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）,ABTS]、羟自由基清除率和还原能力,通过紫外光谱（ultraviolet spectrum,UV）、红外光谱（infrared spectrum,IR）、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）和高效凝胶色谱（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）等技术进行基本结构分析。结果表明：（1）经过DEAE-52纤维素柱层析分离得到4个组分PC-1、PC-2、PC-3和PC-4,对抗氧化活性较高的多糖组分PC-4进行Sepharose CL-6B凝胶柱层析进一步纯化得到PCP-4;（2）胶网藻纯化多糖组分PC-4、PCP-4均具有一定的抗氧化能力;（3）胶网藻纯化多糖组分PCP-4的重均分子量（weight average molecular weight,Mw）为121 762 Da。多糖组分PCP-4含有吡喃糖和硫酸基。多糖组分PCP-4主要由鼠李糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成,还有少量的葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖。     

葛仙米多糖的单糖组成分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法及HPLC-质谱联用法测定葛仙米多糖的单糖组成,两种方法测定结果相互吻合。同时采用HPLC法测定了相关单糖的标准曲线,相关系数达到0.995以上,经计算,葛仙米多糖的单糖组成物质的量比甘露糖∶葡萄糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖为1∶1.12∶3.24∶1.72∶1.21。     

新疆昆仑雪菊多糖的分离纯化及其结构的初步鉴定

以新疆昆仑雪菊为原料,采用超声波辅助法提取雪菊多糖（KSCP）,经脱蛋白、脱色、透析、DEAE-52层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱纯化后,获得两个多糖组分（KSCP1和KSCP2）;将分离纯化后的多糖组分经紫外光谱分析法、冻融分析法、SephadexG-100凝胶柱层析法对其纯度进行鉴定;采用凝胶渗透色谱法和气质联用法（GC-MS）对KSCP分子质量范围和单糖组成进行分析。结果表明,KSCP1和KSCP2均为单一组分;KSCP1是由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖4种单糖组成,其摩尔比为10.53∶5.02∶4.96∶1,分子质量范围为8 200～8 700 u;KSCP2主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖3种单糖组成,其摩尔比为1∶2.78∶5.07,分子质量范围为6 100～6 500 u。     

高产胞外多糖嗜热链球菌的筛选及胞外多糖的结构分析

目的:嗜热链球菌是一种对人体有明显食疗作用的有益菌。以从传统发酵乳制品中分离得到的442株嗜热链球菌为研究对象,从中筛选出1株高产胞外多糖嗜热链球菌MGD1-4,对该菌株发酵液所产胞外多糖进行分离、纯化与结构分析。方法:采用DEAE-Cellulose 52离子交换柱及Sepharose CL-6B凝胶过滤层析方法从嗜热链球菌MGD1-4液体培养基中获得的胞外多糖中分离得到单一组分,利用凝胶渗透色谱仪(GPC)测定各组分分子质量,采用高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)及核磁共振(NMR)等对各EPS纯化组分的单糖的组成及结构进行解析。结果:EPS-1a为中性多糖,分子质量为1.572×10~5u;EPS-3a为酸性多糖,分子质量为3.825×10~5u,且二者均为单一多糖。单糖组成测定结果表明:EPS-1a主要由葡萄糖、甘露糖和半乳糖构成,三者的物质的量比为3.62∶1∶2.99,占总糖量90%以上;EPS-3a主要由甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖构成,占总糖量80.6%,其物质的量比为1.19∶1∶1.08。对1D NMR的研究表明,EPS-1a和EPS-3a的糖环形式均为吡喃糖环,糖苷键构型均为α型。结论:通过分析该菌株所产胞外多糖结构,初步确定其分子结构及理化性质,对进一步研究EPS的构效关系具有重要意义。     

酒精糟香菇深层发酵水溶性胞外香菇多糖的研究Ⅰ:分离纯化

采用Sevag法和蛋白酶法结合除去蛋白质,以DEAE-纤维素对香茹多糖进行组别分离,分别以蒸馏水、0.01mol·L~(-1)、0.1mol·L~(-1)和0.2mol·L~(-1)硼砂溶液为洗脱剂进行洗脱得到四个组分,其中主要是组分Ⅰ,占总糖的76.9％。以Sepharose CL-6B凝胶色谱对组分I进行分级分离,在相对粘度1.5、样品上柱体积6mL、洗脱剂流速30mL·h~(-1)的条件下,组分Ⅰ被完全分离为两个组分XGA和XGB,XGA:XGB=1:9,XGB的高效法相色谱图显示为一单一对称峰。说明采用DEAE-纤维素和Sepharose CL-6B凝胶色谱分离纯化香菇多糖是可行的。     

壶瓶枣多糖的纯化及结构初步分析

采用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化壶瓶枣多糖（polysaccharides from Zizyphus jujube Mill. cv. Hupingzao,简称ZJP）ZJP-2和ZJP-5组分,并对纯化后多糖的结构进行分析。结果表明：经纯化后得到ZJP-2b和ZJP-5a两种组分均一的壶瓶枣活性多糖,分子质量分别为89.21、61.60 kD,均具备多糖的特征吸收峰,且均以β-构型的吡喃糖为主;ZJP-2b中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比为32.4∶9.5∶9.4∶14.7∶9.7,而ZJP-5a中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖,其物质的量比为20.2∶42.9∶2.2∶7.5∶14.5;当质量浓度为3.5 mg/mL时,ZJP-2b和ZJP-5a的羟自由基清除率分别为30.51%和57.22%。     

航天诱变肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化、结构解析及功能活性研究

以一株航天诱变的高产胞外多糖肠膜明串珠菌L21-49为对象,分离纯化其胞外多糖(exopolysaccharide, EPS),测定多糖的结构及功能活性,并分析其结构与功能活性之间的关系。首先采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sepharose CL-6B分子筛层析纯化该菌株的胞外多糖;然后采用凝胶渗透色谱、红外光谱、液相色谱对纯化后多糖进行结构分析;随后测定纯化组分的抗致病菌生物被膜、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性。结果显示,L21-49产胞外多糖经纯化得到EPS-A、EPS-B和EPS-C 3种组分,相对分子质量分别为60 629、36 959、24 714 Da。EPS-A主要含有甘露糖和葡萄糖,EPS-B主要含有甘露糖和半乳糖,EPS-C主要含有葡萄糖和半乳糖。体外功能活性研究表明,此3种胞外多糖对致病菌生物被膜均表现出较好的抑制活性;EPS-C的抗氧化能力以及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性均高于其他组分,原因可能与其分子质量及所含官能团有关。研究结果对乳酸菌胞外多糖的综合开发利用具有积极意义。     

香料烟烟叶多糖的热裂解产物研究

为了研究香料烟叶纯化多糖的热裂解产物,采用Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对香料烟叶粗多糖进行分离纯化得到2个多糖组分。通过气相色谱和气质联用分析得出,组分1的单糖组成为甘露糖∶半乳糖∶核糖∶鼠李糖∶阿拉伯糖(2.5∶2∶1.5∶1∶1),组分2的单糖组成为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖(1.7∶1.5∶1)。并利用裂解-气相色谱-质谱联用(Py-GC/MS0),定性定量测定分析热裂解产物,比较不同多糖组分分别在600℃,900℃下的裂解产物差异,对裂解产物进行归类分析,研究纯化后香料烟叶多糖在无氧条件下的热裂解情况。并分析主要裂解产物致香成分的致香效果,以期为烟草多糖成分在卷烟中的作用提供一些理论基础。     

植物乳杆菌胞外多糖的分离纯化及其乳化特性

在脱脂乳中分别培养植物乳杆菌菌株YW11和菌株SKT109,经三氯乙酸除蛋白、离心、乙醇沉淀、透析、冷冻干燥得到胞外多糖粗品,再经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sepharose CL-6B凝胶柱纯化,得到两种胞外多糖纯品。利用气相色谱法分析此两种多糖的单糖组成,并采用KBr压片法观察红外光谱,利用动态光散射方法测定多糖的流体力学半径（Rh）。结果显示：YW11胞外多糖的单糖组成为葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为3.45∶1,流体力学半径为69.20 nm;SKT109胞外多糖的单糖组成为葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为1.43∶1,流体力学半径为41.74 nm;YW11胞外多糖的乳化能力强于SKT109胞外多糖,但前者的乳化稳定性略低;两种胞外多糖分别与其他乳化剂之间具有一定的协同作用,乳化颗粒的半径主要集中在1～2 μm之间。本研究获得的植物乳杆菌胞外多糖在食品加工中具有潜在的应用前景。     

草本刺嫩芽根多糖AKSP2纯化、鉴定及体内抗氧化活性

研究了草本刺嫩芽根可溶性多糖(AKSP)主要的组成及其抗衰老活性.采用DEAE-纤维素柱对粗提多糖进行分离,Sephadex-G100层析对AKSP2多糖进一步纯化,HPLC层析确定AKSP2组成及组分比例,利用红外光谱鉴定多糖AKSP2糖苷键.建立了小鼠衰老模型,对饲喂AKSP2多糖小鼠进行抗衰老活性的生物化学指标测定.采用DEAE-纤维素柱分离多糖, 得到5种组分分别为AKSP1、AKSP2、AKSP3、AKSP4、AKSP5.对AKSP2进行理化性质研究,HPLC证实AKSP2水解物由木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖组成,并且它们之间的摩尔比值为1∶1.05∶0.89∶1.32.红外光谱确定多糖AKSP2为呋喃糖苷,其构型为β-型糖苷,且糖基中含有乙酰基.草本刺嫩芽根多糖AKSP2提高了小鼠肝脏与血清中的SOD、CAT值,降低了MDA含量.说明AKSP2具有抗氧化活性,对衰老有一定的预防作用.     

南海鸢乌贼墨汁多糖分离纯化及组分分析

目的:从南海鸢乌贼墨汁中分离纯化多糖,并分析其多糖组分。方法:利用水提醇沉法得粗多糖,通过固相萃取层析法除色素对多糖进行纯化,纯化多糖依次经DEAE-52离子交换柱、Sephacryl HR-300凝胶柱分级纯化,按峰收集得单一组分,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)衍生化方法,通过超高效液相色谱分析多糖组分。结果:粗多糖经DEAE-52离子交换柱、Sephacryl HR-300凝胶柱后收集得到3个糖组分,分别为SIP1、SIP2、SIP3;通过PMP衍生化方法分析单糖组成,得:SIP1是由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖3种单糖缩合而成;SIP2和SIP3分别是由D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖及L-(-)-岩藻糖5种单糖按照不同比例缩合而成。     

胖大海酸性多糖的分离纯化及初步结构研究

采用水溶醇沉法从胖大海中提取水溶性粗多糖,通过棉纤维和DEAE-Sephrose CL-6B离子交换柱分离得到含量较大的酸性多糖ASP Ⅰ;经凝胶色谱和高效凝胶渗透色谱鉴定其为均一组分,气相色谱和离子色谱测其单糖组成（质量比）为鼠李糖：阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：木糖：半乳糖醛酸=24.55：14.22：10.45：1.84：1.22：28.05.红外光谱测定表明,ASP Ⅰ具有多糖的特征吸收峰.     

黄酒多糖的分离纯化及理化性质研究

以绍兴黄酒为原料,采用乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到黄酒粗多糖,经DEAE-Sepharose FF色谱柱和葡聚糖凝胶G75色谱柱对黄酒粗多糖进行分离纯化,并采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对黄酒多糖的相对分子质量和纯度进行检测,进一步采用紫外光谱、红外光谱以及核磁共振波谱对黄酒多糖组分CRWP1的结构特征进行初步解析。结果表明:所得多糖组分为纯度较高的中性多糖组分,其重均相对分子质量为7 850;主要由主阿拉伯糖、葡萄糖和木糖组成,并含有少量岩藻糖、半乳糖和甘露糖;所得多糖组分CRWP1为在1,3糖苷键主链上连接有1,4糖苷键支链的杂多糖,含有α糖苷键构型,并且其单糖残基为吡喃型。     

南瓜多糖的提取及纯化

南瓜是一种具有药用价值的食品,实验用热水浸提、醇析、Severge法除蛋白,水相透析得到南瓜粗多糖,通过DEAE-Sepharose和SephadexG-100柱的分离纯化得到2种水溶性多糖,经酸解,纸色谱分析得组分1的单糖组成为D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸,组分2的单糖组成为D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和葡萄糖醛酸。     

柱前衍生化HPLC法分析枸杞多糖中单糖组成

利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化高效液相色谱（high?performance?liquid?chromatography,HPLC）法,建立6?种常见单糖的色谱分离条件,并用于10?种不同产地的自制枸杞多糖的单糖组成分析和8?种市售枸杞多糖的分析鉴定。该HPLC方法简便、灵敏度高、重复性好,可用于枸杞多糖的组分分析和质量控制。对自制枸杞多糖的单糖组成分析结果表明,自制枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖6?种单糖组成,平均物质的量比为1.00∶1.38∶0.63∶92.37∶1.18∶3.55。对市售枸杞多糖的分析鉴定结果表明,其中6?种枸杞多糖的含量在正常范围内,另外2?种多糖含量高于均值,其中葡萄糖相对物质的量比为自制枸杞多糖的2～3?倍。     

草菇多糖VVP-1b的分离纯化及其光谱分析

从草菇子实体中提取水溶性粗多糖,经脱蛋白、脱色、DEAE-Sepharose F.F和Superdex-200柱层析,分离纯化得到一种水溶性草菇多糖组分VVP-1b。采用液相色谱、紫外光谱、红外光谱等光谱方法对其部分理化性质和结构进行测定。结果表明:VVP-1b为均一组分,具有明显的多糖特征峰,含有β-吡喃糖苷键;其总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量分别为88.7%、7.8%、27.6%,相对分子质量为5.84×105;单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖∶甘露糖∶半乳糖∶葡萄糖=4.0∶1.0∶1.4∶35.4。因此VVP-1b是一种均一的具有β-吡喃糖苷键的酸性多糖。