荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法 本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立猪源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。     

荧光PCR法检测畜禽肉中的鸡源性成分

为了建立畜禽肉中鸡源性成分荧光定量PCR检测方法,以鸡、鸭、鹅、猪、牛、羊、兔、鸽和鹌鹑等9种动物线粒体DNA 16S rRNA基因序列为靶位点,通过比对分析设计筛选出鸡特异性引物,以9种动物肌肉DNA为模板进行特异性扩增,确立荧光定量PCR扩增条件;同时将鸡DNA模板浓度进行10倍梯度稀释,一直稀释至108倍,检测所建立的荧光PCR方法的灵敏度;并用此方法对市场上样品进行随机抽检。结果显示:所设计的鸡引物仅对鸡肉DNA模板有典型扩增曲线,Ct值为22.11,对其它动物DNA模板无扩增,特异性较强;当鸡DNA模板稀释倍数达到104倍,即DNA浓度为17.5 pg/μL时,仍有典型扩增曲线,Ct值为30.37,方法灵敏度较高;市场流通环节样品抽检结果显示所抽测样品均合格。可见,建立的基于荧光定量PCR和线粒体DNA 16S rRNA基因的畜禽肉中鸡源性成分检测方法,快速而准确,实用性强。     

基于线粒体DNACOⅠ基因鉴别畜禽肉中鸡源性成分

为建立畜禽肉中鸡源性成分的快速检测方法,以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列为靶点,比较羊、牛、猪、兔、鸽、鹌鹑、鸡、鸭、鹅9种动物COⅠ基因的差异位点,设计筛选鸡特异性引物,进行常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和荧光定量PCR检测。结果表明:所设计的引物仅对鸡肉DNA模板有扩增条带和典型扩增曲线,且循环阈(cycle threshold,Ct)值为21.78,对其他动物DNA模板无扩增。方法特异性较强,灵敏度较高,达pg级,可以用于畜禽肉与肉制品中鸡源性成分的快速、有效、准确检测。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

肉制品中羊源性成分的定性和定量检测

通过检测肉制品中DNA的来源进行动物源性检测是打击鲜肉及加工肉制品制假掺假的重要技术手段。依据GB/T 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分定性检测方法 实时荧光PCR法》合成用于TaqMan 实时荧光聚合酶链式反应的引物和探针,利用鲜肉及加工肉制品进行羊源性成分定性和定量检测方法研究。首先利用12 种不同动物鲜肉组织的DNA检测方法的特异性,然后以羊源DNA梯度稀释液为模板进行灵敏度实验,最后在加工肉制品中检测方法的适用性和定量检测能力。结果表明：此方法具有羊源性成分检测特异性,对其他动物来源的鲜肉DNA均无扩增信号,可以检出羊肉和猪肉混合样品中0.1%的羊肉;方法灵敏度高,可以检出10 pg的羊源DNA;方法适用性广,可以对加工肉制品（羊肉干）进行羊源性成分的定性和定量检测。     

Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分

目的:建立一种能实时同步检测动物源性食品中猪肉源性和鸡肉源性成分的Taqman探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,应用于动物源性食品的成分掺假快速检验。方法:分别依据猪和鸡的种间保守基因(Cytb)序列设计、合成特异性引物及不同荧光标记(FAM、HEX)的Taqman探针,建立可同步检测动物源性食品中的猪源性和鸡源性成分的Taqman探针双重荧光PCR方法。结果:所建立的Taqman探针双重荧光PCR检测方法特异性强,仅对猪、鸡成分有扩增;灵敏度高,最低检测到猪源、鸡源DNA的含量分别为0.02、0.10 ng;抗干扰性强,当DNA混样中猪源、鸡源性成分含量在2%以上水平时,所建立的混合检测体系均能对DNA混样给出正确判断。结论:所建立的混合检测体系具有高特异性、高灵敏度,能够适用于动物源性食品中猪肉、鸡肉成分的同时快速检测。     

实时荧光PCR法检测肉制品中猪源性成分

目的S建立一个高特异性和高灵敏度的有效检测猪源性成分的检测方法。方法S以猪雌激素受体基因设计合成一对特异性引物,采用液氮研磨结合试剂盒抽提的方法提取猪肉中的DNA,分别以300S,30S,3S,0.3S和0.03Sng为模板量进行梯度反应,基于荧光定量PCR技术(SYBR法)建立检测方法。结果S以Ct值作为纵坐标,以lgXS(X为DNA的量,ng)的值作为横坐标,得到标准曲线方法Ct=30.473-3.542lgX,SR2=0.9997;该方法的检测灵敏度达到2 Spg。结论S该猪源性成分检测方法简单快捷,特异性和重复性好,灵敏度高,可作为市场监督和检测鉴定的可行性方法。     

基于线粒体16SrRNA基因鉴别畜禽肉中5种动物源性成分

目的:建立一种快速、特异、灵敏的动物源性成分检测方法。方法:以线粒体16S r RNA基因序列为靶位点设计特异性引物,以常见畜禽包括羊、牛、猪、兔、鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑等参考动物为研究对象,提取肌肉组织DNA,进行PCR扩增,设计筛选羊肉、牛肉、猪肉和兔肉特异性引物对,并进行引物特异性研究。结果:选择的特异性引物能够有效地对包括羊肉、牛肉、猪肉、兔肉以及鸡肉在内的5种动物源性成分进行快速检测,方便简洁。结论:该方法可以快速、准确地检测畜禽肉中羊肉、牛肉、猪肉、兔肉和鸡肉成分。     

TaqMan实时荧光PCR法定量检测生肉中猪源性成分的建立

目的:建立基于Taq Man实时荧光PCR技术的猪源性成分的定量检测方法。方法:选择朊蛋白基因为猪特异性基因和线粒体12S r RNA为内参基因,使用△Ct法进行相对定量。通过对其他种类的肉源DNA进行扩增,以验证方法的特异性;对含有1%猪肉的混合肉DNA进行系列稀释,确定检出限,并对自制模拟掺假肉进行猪源性掺假的测定,对该方法进行验证。结果:所用的引物具有较好的特异性,当模板浓度为50 ng/μL时对猪源性扩增的平均Ct值为22.73,而其他种类的肉源进行扩增时均未能检测到扩增信号,检出限为0.25%(w/w);检测结果在猪肉含量为1%~100%(w/w)范围内具有良好的线性关系,相关系数R2=0.9955。内部验证结果表明,根据标准曲线得到的盲样检测结果同样品真实含量具有较高的一致性,变异系数在0.1270%~1.2044%之间。结论:所建立的Taq Man实时定量PCR法可用于生肉中猪源性成分的定量检测。     

PCR法检测鱼及其制品中的鱼源性成分

目的:建立一种快速、特异、灵敏的鱼源性成分聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据鱼线粒体基因组12S r RNA中的保守序列设计鱼源性特异性引物,进行PCR扩增,建立鱼源性成分检测方法;对24种鱼及鸡、牛、羊、猪、鸭、虾6种常见的易混于鱼制品的动物源性成分进行特异性检测;将草鱼肉混入其他动物肉中,混合均匀后提取DNA进行PCR扩增,确定肉样水平的检测灵敏度;将草鱼DNA混入其他动物DNA中,以混合后的DNA为模板进行PCR扩增,确定DNA水平的检测灵敏度。结果:该方法能特异性的对鱼源性成分进行快速检测,检测灵敏度达0.5%。结论:该方法能对食品中是否含有鱼源性成分进行初筛,到达快速检测的目的,对防止食品掺假、维护消费者利益、规范市场秩序有重要意义。