细胞外信号调节激酶与胶原在肝纤维化过程中的表达及相关性

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)在肝纤维化组织中的表达变化及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性,并探讨其在肝纤维化发生中的作用.方法:二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化,于用药1、2、3 wk分别取肝组织;收集临床肝手术标本,包括纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常肝组织做对照.采用免疫组化法检测ERK在肝纤维化组织中表达和定位及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的相关性.结果:随着大鼠注射DMN时间的延长,ERK、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增加,且在各时间组肝组织中ERK的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈正相关(1 wk:r = 0.75,0.68,P<0.05;2wk:r = 0.82,0.78,P<0.05;3 wk:r = 0.74,0.83,P<0.05).同样,ERK在人肝纤维化组较对照组表达增加(1.068±0.258 vs 0.035±0.011,P<0.05),且ERK的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达正相关( r = 0.87,0.88,均P<0.05).结论:ERK可能与肝纤维化的发生机制及胶原合成密切相关.     

蛋白激酶C-胞外信号调节激酶1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路在尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)中的作用.方法 体外培养HUVECs,采用不同实验条件尼古丁进行干预,ELISA法测定细胞上清液中PAI-1的浓度,观察尼古丁作用的最佳浓度和时间.进一步分别用PKC的抑制剂星型胞菌素staurosporine (STS)和ERK的抑制剂PD98059干预HUVECs,观察PKC或ERK被阻断后对尼古丁诱导的HUVECs 表达PAI-1的影响,ELISA测定各组细胞上清液中PAI-1蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞PAI-1 mRNA的表达.结果 100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白水平[(22.6 ± 1.1)μg/L]明显高于对照组[(14.2± 2.8)μg/L,q=5.64,P＜0.05];以100 μmol/L 尼古丁分别与HUVECs孵育0、4、6、8、12及24 h,各组PAI-1蛋白表达呈时间依赖性升高,并在12 h达到高峰(F=32.063,P＜0.05);尼古丁组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.32±0.20),(21.08±0.83)μg/L]明显高于对照组[(0.73±0.10),(13.39± 0.93)μg/L,q=8.43、11.97,均P＜0.05];尼古丁+STS组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.07±0.10),(16.19±2.15)μg/L]较尼古丁组降低(q=5.61、7.61,均P＜0.05),但仍高于对照组(q=7.84、4.36,均P＜0.05);尼古丁+ PD98059组PAI-1 mRNA及蛋白表达[(1.12±0.11),(17.52±1.72)μg/L]低于尼古丁组(q=4.68、5.54,均P＜0.05),仍高于对照组(q=8.77、6.43,均P＜0.05).结论 PKC-ERK1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞PAI-1表达上调中发挥一定作用.

Abstract：

Objective To explore the role of protein kinase C (PKC)- extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 signal pathway in the process of plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) protein and mRNA expression in cultured human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) induced by nicotine. Methods HUVECs were cultured to examine the effect of nicotine on the expression of secreting PAI-1 in HUVECs on different experimental conditions. The expression of PAI-1 protein was measured by ELISA. PKC inhibitor staurosporine (STS)and ERK1/2 inhibitor PD98059 were used to detect PKC or ERK1/2 function on the expression of PAI-1 in HUVECs induced by nicotine. The PAI-1 mRNA expression was determined by RT-PCR. Results The expression level of PAI-1 protein in 100 μmol/L nicotine treated group [(22.6±1.1) μg/L] increased significantly compared to the control group [(14.2±2.8) μg/L; q=5.64,P<0.05]. After stimulation with 100 μmol/L nicotine for 0,4,6,8,12 and 24 h, the levels of PAI-1 protein increased over time and reached the peak at 12 h (F=32.063,P<0.05).The PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine treated group [(1.32±0.20), (21.08 ± 0.83) μg/L] increased significantly compared to the control group [(0.73±0.10), (13.39±0.93) μg/L; q=8.43,11.97,all P<0.05].Compared with nicotine treated group , the PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine and STS treated group [(1.07±0.10),(16.19±2.15) μg/L] decreased significantly(q=5.61,7.61, all P<0.05), but still higher than the control group (q=7.84,4.36, all P<0.05). In nicotine and PD98059 treated group, the PAI-1 mRNA and protein expression [(1.12±0.11),(17.52±1.72) μg/L] decreased significantly compared to the nicotine treated group(q= 4.68,5.54, all P<0.05), still higher than the control group (q=8.77,6.43, all P<0.05). Conclusion PKC-ERK1/2 signal pathway may play a partial role in the up-regulation of PAI-1 induced by nicotine in HUVECs.     

细胞外信号调节激酶抑制剂对间歇低氧早期大鼠神经元凋亡及P53表达的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对间歇低氧早期大鼠海马CA1区神经元凋亡及凋亡相关蛋白P53表达的影响。方法选择雄性Wistar大鼠135只,采用随机数字法分为对照组、间歇低氧组、U0126组,每组45只,每组又分为1、3、7、10、14d共5个时间点,每个时间点9只。各组大鼠采用免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测海马CA1区ERK1/2、P53表达;TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡情况。结果与间歇低氧组比较,U0126组海马CA1区神经细胞1、3、7、10、14dERK1/2蛋白和P53蛋白表达明显降低(P0.05)。与对照组比较,间歇低氧组和U0126组海马CA1区3、7、10、14d神经细胞凋亡指数明显升高(P0.05)。与间歇低氧组比较,U0126组海马CA1区3、7、10、14d神经细胞凋亡指数明显降低(0.100±0.021 vs 0.133±0.015,0.160±0.017 vs 0.253±0.019,0.239±0.027 vs 0.351±0.024,0.332±0.033 vs 0.500±0.048,P0.05)。结论 ERK抑制剂U0126通过阻断ERK信号通路减少间歇低氧早期神经细胞的凋亡,可能与其降低P53表达有关。     

血小板衍生生长因子β受体和细胞外信号调节激酶1/2在大鼠肝纤维化中的表达

血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor．PDGF）对多种细胞均有促增殖和趋化作用，它是HSC最强的有丝分裂原。PDGF受体由两种亚单位α及β构成，静止的HSC只表达α亚单位，激活的HSC才表达β亚单位，PDGFl5受体在肝纤维化过程中的作用尤为突出。[第一段]     

细胞外信号调节激酶1/2通路抑制剂PD98059对体外培养γδT细胞增殖和杀伤功能的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路抑制剂PD98059对体外培养人γδT细胞增殖和杀伤功能的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞,加入到含有唑来膦酸和白细胞介素2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养获得γδT细胞。用ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断γδT细胞ERK1/2信号通路后,用细胞计数仪测定γδT细胞增殖和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定杀伤能力;采用流式细胞术检测γδT细胞颗粒酶B和穿孔素的表达。计量资料组间比较采用t检验。结果培养10 d后的γδT细胞纯度达到(87.94±2.36)%。PD98059作用后的γδT细胞数低于对照组[(6.74±0.36)×105/ml vs(9.42±0.31)×105/ml],而PD98059作用后γδT细胞颗粒酶B阳性表达率[(48.89±1.31)%vs(41.58±1.58)%]、穿孔素阳性表达率[(65.92±3.29)%vs(33.49±2.83)%]、对肝癌Hep G2细胞的杀伤率[(69.28±4.96)%vs(48.34±3.01)%]均高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为-12.708、7.582、15.478、11.201,P值均0.001)。结论 ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2信号通路能抑制γδT细胞的增殖,但能增强γδT细胞的体外杀伤功能。     

实验性大鼠肝纤维化中Smad3蛋白和细胞外信号调节激酶1的表达

对大鼠纤维化肝组织中Smad3蛋白和细胞外信号调节激酶1(ERK1)的表达进行检测，初步探讨这两种信号分子在肝纤维化发生中的作用。     

细胞外调节蛋白激酶在蛛网膜下腔出血中的研究进展

细胞外调节蛋白激酶(ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中的一类,磷酸化激活的ERK由胞质转位于胞核,激活下游的信号分子,从而发挥相应的生物学效应。近期的研究表明,该蛋白在蛛网膜下腔出血(SAH)后的炎症、自噬、凋亡及脑血管痉挛中发挥着重要的作用。进一步阐述SAH后ERK参与炎症、自噬、凋亡及脑血管痉挛的相关分子机制,以ERK作为分子靶点,有效地利用该激酶在SAH病理条件下表达的变化,将为研究SAH提供新的方向。     

胞外信号调节激酶在大鼠肝纤维化形成中的作用机制研究

目的 研究胞外信号调节激酶（ERK）在大鼠肝纤维化形成中的表达及作用机制。方法 对32只雄性SD大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）,制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射后1、4、8周处理动物,采用免疫组化、RT-PCR等方法对大鼠肝组织中ERK1表达进行检测。结果 免疫组化显示,ERK1主要表达于肝星状细胞（HSC）中。注射CCl4诱导后,大鼠肝组织中ERK1表达较正常对照组明显增强（P〈0．01,〈0．05）,且1、4、8周肝组织中ERK1的表达强度呈明显递增趋势（P〈0．01,〈0．05）。RT-PCR检测结果显示,ERK1mRNA表达与其酶蛋白改变一致。结论 ERK激活促进HSC活化增殖,参与了肝纤维化的发生发展过程。     

细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞凋亡中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,为阐明血管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液(10-6mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hochest33258荧光染色观察凋亡细胞形态学的变化,利用RT-PCR法分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01),与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,18 h达到高峰(P<0.01),24 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论 ERK1/2信号转导途径参与血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

从细胞外信号调节激酶-1mRNA在肝纤维化大鼠肝组织中的表达来探讨姜黄素的治疗作用

目的:探讨ERK-1mRNA在CCl4致实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及姜黄素(curcumin)对它们的影响。方法:建立CCl4诱导的大鼠实验性肝纤维化的模型,用免疫组化法比较正常组、模型组以及姜黄素组大鼠的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle action,α-SMA)的表达,用RT-PCR法比较各组大鼠肝组织胞外信号调节激酶-1(Extracellular-regulated kinase-1,ERK-1)的表达。结果:模型组大鼠α-SMA以及ERK-1mRNA的表达增高明显,而姜黄素组则较模型组低。结论:姜黄素可能通过抑制α-SMA的表达,抑制ERK-1的促肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的增殖作用,从而产生抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用。     

细胞外信号调节激酶1/2途径参与甲状旁腺素1-34诱导的心肌细胞肥大

目的 观察丝裂素活化蛋白激酶的上游激酶1(MAPKK,MEK1)抑制剂PD98059对大鼠甲状旁腺素1-34(rPTH1-34)诱导的心室肌细胞肥大的影响及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的变化,分析MEK/ERK途径的可能作用. 方法 体外培养新生大鼠心室肌细胞,10-7mol/LrPTH1-34诱导建立心肌细胞肥大模型,在模型中加入2×10-5mol/L PD98059,Motic Images Advanced 3.0软件测定细胞直径、3H-亮氨酸掺入实验检测细胞蛋白合成速率、RT-PCR半定量测定心房利钠肽mRNA、Western blot方法观察ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白表达的变化. 结果 与正常组相比,10-7mol/L rPTH1-34孵育24 h可使体外培养的心肌细胞直径增加13.6 μm、细胞蛋白合成速率增加898 cpm/well,使心房利钠肽mRNA表达增加73.9%,p-ERK1/2蛋白表达增加15%(P＜0.05).与PTH组相比,预先给予PD98059可使细胞直径减少7.1 μm,细胞蛋白合成速率减少644 cpm/well,心房利钠肽mRNA表达下降52.2%,磷酸化ERK1/2蛋白表达减少18%(P＜0.05).单独使用PD98059对正常心肌细胞没有影响(P＞0.05). 结论 PD98059通过抑制ERK1/2、磷酸化ERK1/2的表达阻断了心肌细胞肥大反应,MEK/ERK1/2途径的活化参与了rPTH1-34的致肥大作用.     

氟通过胞外信号调控激酶通路对成骨细胞增殖作用的影响

目的 观察氟通过胞外信号调控激酶(ERK)通路对成骨细胞(MC3T3-E1)增殖作用的影响.方法 取小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)进行体外培养,加入不同浓度的氟(Fˉ,0、200、400、600、1000、2000、4000、8000、10 000 μmol/L)培养24、48 h,甲基噻唑蓝(MTT)法筛选出促进细胞增殖的最适浓度.根据最适浓度,将成骨细胞单纯随机分为3组:对照组(Fˉ,0 μmol/L)、染氟组(Fˉ,400 μmol/L)、染氟抑制组(Fˉ,400 μmol/L+PD9805,10 μmmol/L).培养48 h后应用流式细胞术检测各组细胞周期;Western bolt法和免疫荧光法检测各组磷酸化ERK(P-ERK)蛋白表达.结果 400 μmol/L的氟是促进成骨细胞增殖的最适合浓度.与对照组比较[(76.12±10.08)％、(2.06±0.31)％],染氟组G0/G1期细胞数[(63.04±8.12)％]明显减少,S期细胞数[(9.13±2.08)％]明显增多(P均＜ 0.05);而染氟抑制组G0/G1期细胞数[(92.11±9.01)％]明显增多(P＜0.05).Western blot结果表明,与对照组[(100.00±0.00)％]比较,染氟组成骨细胞P-ERK蛋白表达水平[(131.24±13.88)％]明显增高(P＜0.05),染氟抑制组P-ERK蛋白表达[(91.33±9.68)％]未见明显改变(P＞0.05);免疫荧光法检测结果与Western blot法相似.结论 400 μmol/L氟可以促进成骨细胞增殖,ERK通路在氟促进成骨细胞的增殖作用中起到了关键的作用.     

肾炎宁对LPS诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的 探讨肾炎宁对人肾小球系膜细胞(HMC)细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)的影响.方法 应用细胞培养技术,进行HMC培养,采取血清药理学方法,制备肾炎宁药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,应用四唑盐(MTT)比色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞的增殖和磷酸化ERK1/2的表达.结果 肾炎宁可显著抑制HMC增殖,抑制率在12、24和48 h分别为16.0%、15.4%、18.2%,LPS组磷酸化ERK1/2的含量与空白组比较明显升高(P<0.05);中药组与空白组比较,磷酸化ERK1/2含量明显降低(P<0.05);LPS+肾炎宁组与LPS组比较,磷酸化ERK1/2表达明显降低 (P<0.05).结论 肾炎宁具有抑制正常培养条件及LPS刺激条件下磷酸化ERK1/2,从而发挥对肾小球硬化的治疗作用.     

替米沙坦对高血压大鼠血管前纤维蛋白1及ERK磷酸化水平的影响

目的：探讨替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）血管前纤维蛋白1（Profmn-1）及细胞外信号调节激酶（ERK1／2）磷酸化水平的影响。方法：选取10周龄SHR及其同源对照魏-凯氏（WKY）大鼠,给予替米沙坦（5～10mg／kg·d）或安慰剂,为期10周。尾套法测量大鼠尾血压。采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）和Western免疫印迹检测治疗后大鼠主动脉组织中Profilin-1mRNA和蛋白及ERK1／2磷酸化水平。结果：与WKY对照组相比,SHR大鼠血压明显升高[（126±3．5）mmHg：（195±6．1）mmHg],伴血管Profilin—1mRNA[（1．0±0．11）;（7．8±0．57）]及ERK硫酸化水平[（1．0±0．11）：（2．43±0．19）]表达明显升高（P均〈0．01）,而经替米沙坦治疗后SHR大鼠血压明显降低[替米沙坦低剂量组（169±6．2）mmHg,高剂量组（161±4．9）mmHg],伴Profilin-1mRNA[替米沙坦低剂量组（4．45±0．92）,高剂量组（1．95±0．41）]表达及ERK1／2磷酸化水平[替米沙坦低剂量组（1．62±0．20）,高剂量组（1．34±0．09）]明显下调（P均〈0．05）。结论：长期替米沙坦治疗可降低高血压大鼠血压水平,降低血管Profilin-1表达及ERK1／2磷酸化水平,提示替米沙坦对高血压血管重塑具有一定的保护功效。     

细胞外调节蛋白激酶在大鼠急性坏死性胰腺炎发病机制中的作用

目的 研究细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated kinase 1/2,ERK1/2)信号转导通路在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)时的变化规律,探讨ERK1/2特异性抑制剂PD98059对ANP时胰腺的保护作用.方法 以5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立ANP模型,5只大鼠作为正常组,余75只大鼠按数字表法随机分为假手术组、ANP组及PD98059组,各25只.术后15 min、30 min、1 h、3 h和6 h分批处死动物,取血及胰腺组织.常规胰腺病理检查并评分;ELISA方法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α水平;酶化学法检测胰腺组织内MPO活性;Western blotting法检测胰腺组织磷酸化ERK1/2的表达量.结果 假手术组胰腺无明显病理改变;ANP组胰腺损伤明显,3 h的病理评分为9.9±0.4,PD98059组胰腺损伤减轻,3 h病理评分为4.0±0.4,与ANP组相差显著(P<0.05).假手术组、ANP组和PD98059组大鼠3 h时血清TNF-α水平分别为(65.8±20.5)pg/ml、(286.5±50.3)pg/ml、(180.4±32.9)pg/ml;IL-1β水平为(85.8±25.5)pg/ml、(293.8±46.3)pg/ml、(200.5±33.6)pg/ml;胰腺MPO活性为(0.19±0.02)U/g、(0.61±0.05)U/g、(0.52±0.03)U/g.ANP组和PD98059组均显著高于假手术组,而PD98059组又显著低于ANP组(P值均<0.05).正常大鼠胰腺磷酸化ERK1/2表达量为1100±141;ANP组15 min、30 min时磷酸化ERK1/2表达量分别为5300±486、5621±384,1 h开始下降,6 h时几乎与假手术组相似;PD98059组造模后15 min、30 min的磷酸化ERK1/2表达量分别为4200±370、3600±290,显著低于同时间点ANP组(P值均<0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与大鼠ANP发病机制,PD98059干预可减少IL-1β、TNF-α的产生,降低胰腺组织MPO活性,改善胰腺的病理损伤程度.     

细胞外信号调节激酶1与肝星状细胞增殖关系的体内实验研究

目的　探讨在纤维化发生中 ,细胞外信号调节激酶1(ERK1)与肝星状细胞 (HSCs)增殖的关系。方法　采用胆总管结扎 (BDL)方法建立大鼠肝纤维化模型 ,应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术研究ERK1及其mRNA在肝纤维化不同时期肝组织中的分布及含量的动态变化 ;采用免疫组织化学方法测定α SMA。结果　正常肝组织有少量α SMA、ERK1分布 ,随着肝纤维化发展 ,α SMA、ERK1阳性细胞明显增多 ;正常大鼠肝组织中有ERK1mRNA表达 ,分别于造模 2d开始上调 ,造模 4w表达最多。ERK1与α SMA呈显著正相关 (r =0 958,P <0 0 5)。结论　肝纤维化形成过程中ERK1及其mRNA表达明显增加 ,ERK1在HSCs增殖及肝纤维化形成过程中发挥重要作用     

慢性氟中毒大鼠脑组织细胞外调节蛋白激酶表达及大鼠学习记忆能力的变化

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导系统细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的表达与活性,及其与学习记忆能力改变之间的关系,从而进一步探讨氟中毒神经系统损害的发病机制.方法 72只SD大鼠按性别和体质量随机分为3组.每组24只.对照组:自由饮用自来水,含氟量低于0.5 mg/L;低剂量染氟组:饮水含氟量为5.0 mg/L;高剂量染氟组:饮水含氟量为50.0 mg/L.实验6个月后.取大鼠脑组织,用蛋白印迹方法检测细胞外ERK1/2的蛋白表达与活性;用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)方法测定ERK1/2的mRNA水平;用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力改变.结果 对照组、低、高剂量染氟组的ERK1/2蛋白水平分别为0.94±0.10、1.25±0.02、1.95±0.07,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);对照组、低、高剂量染氟组的phospho-ERK1/2蛋白水平分别为0.73±0.08、0.77±0.07、1.28±0.11,任意两组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);低、高剂量染氟组的ERK1/2活化率[(68.4±3.8)%、(64.1±3.2)%]低于对照组[(82.3±10.7)%],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);在第2、3、5、6天,低剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(46.0±8.0)、(24.0±2.7)、(8.9±5.3)、(7.4±4.1)s]长于对照组[(39.3±6.9)、(19.1±9.1)、(8.3±3.4)、(4.8±2.7)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期[(36.9±16.8)、(37.7±12.9)、(19.7±7.6)、(12.2±5.7)s]也长于对照组(P＜0.05),第3、5、6天,高剂量染氟组的大鼠逃避潜伏期长于低剂量染氟组(P＜0.05);低剂量组、高剂量染氟组的大鼠第1次穿越平台位置时间[(1.17±0.75),(4.18±1.10)s]长干对照组[(5.89±0.56)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),低、高剂量染氟组的大鼠在原平台所在象限逗留时间[(17.05±4.25)、(18.20±4.57)s]短于对照组[(25.37±5.65)s],组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);大鼠脑组织中ERK1/2的活化率与空间探索实验第1次到达平台区域时间呈正相关(r=0.364,P＜0.05).与第6天定向航行实验找到平台时间呈正相关(r=0.497,P＜0.05).结论 慢性氟中毒导致大鼠脑组织中ERK1/2蛋白表达水平及活性改变,与慢性氟中毒大鼠学习记忆能力的降低有一定关系.     

Dynamic expression of extracellular signal-regulated kinase in rat liver tissue during hepatic fibrogenesis

INTRODUCTION Mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway is an important intracellular signal transduction system[1], and extracellular signal-regulated kinase 1 (ERK1) is the critical and classical pathway of MAPK and plays an important role in sever…     

Increased expression of mitogen-activated protein kinase and its upstream regulating signal in human gastric cancer

AIM: To investigate the expression of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and its upstream protein kinase in human gastric cancer and to evaluate the relationship between protein levels and clinicopathological parameters.METHODS: Western blot was used to measure the expression of extracellular signal-regulated kinase (ERK)-1, ERK-2, ERK-3, p38 and mitogen or ERK activated protein kinaseMEK-1 proteins in surgically resected gastric carcinoma, adjacent normal mucosa and metastatic lymph nodes from 42 patients. Immunohistochemistry was employed for their localization.RESULTS: Compared with normal tissues, the protein levels of ERK-1 (integral optical density value 159526&#177;65760 vs 122807&#177;65515, P=0.001), ERK-2 (168471&#177;95051 vs 120469&#177;72874, P&lt;0.001), ERK-3 (118651&#177;71513 vs 70934&#177;68058, P&lt;0.001), P38 (104776&#177;51650 vs 82930&#177;40392, P=0.048) and MEK-1 (116486&#177;45725 vs 101434&#177;49387, P=0.027) were increased in gastric cancer tissues. Overexpression of ERK-3 was correlated to TNM staging [average ratio of integral optic density (IOD)tumor:IODnormal in TNM Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ tumors was 1.43&#177;0.34, 5.08&#177;3.74, 4.99&#177;1.08, 1.44&#177;1.02, n=42, P=0.023] and serosa invasion (4.31&#177;4.34 vs 2.00&#177;2.03, P=0.037). In poorly differentiated cancers (n=33), the protein levels of ERK-1 and ERK-2 in stage Ⅲ and Ⅳ tumors were higher than those in stage Ⅰ and Ⅱ tumors (2.64&#177;3.01 vs 1.01&#177;0.33, P=0.022; 2.05&#177;1.54 vs 1.24&#177;0.40, P=0.030). Gastric cancer tissues with either lymph node involvement (2.49&#177;2.91 vs 1.03&#177;0.36, P=0.023; 1.98&#177;1.49 vs 1.24&#177;0.44, P=0.036) or serosa invasion (2.39&#177;2.82 vs 1.01&#177;0.35, P=0.022; 1.95&#177;1.44 vs 1.14&#177;0.36, P=0.015) expressed higher protein levels of ERK-1 and ERK-2. In Borrmann Ⅱ tumors, expression of ERK-2 and ERK-3 was increased comparedwith Borrmann Ⅲ tumors (2.57&#177;1.86 vs 1.23&#177;0.60, P=0.022; 5.50&#177;5.05 vs 1.83&#177;1.21, P=0.014). Borrmann Ⅳ tumors expressed higher p38 protein levels. No statistically significant difference in expression of MAPKs was found when stratified to tumor size or histological grade (P&gt;0.05). Protein levels of ERK-2, ERK-3 and MEK-1 in metastatic lymph nodes were 2-7 folds higher than those in adjacent normal mucosa. The immunohistochemistry demonstrated that ERK-1, ERK-2, ERK-3, p38 and MEK-1 proteins were mainly localized in cytoplasm. The expression of MEK-1 in gastric cancer cells metastasized to lymph nodes was higher than that of the primary site. CONCLUSION: MAPKs, particularly ERK subclass are overexpressed in the majority of gastric cancers. Overexpression of ERKs is correlated to TNM staging, serosa invasion, and lymph node involvement. The overexpression of p38 most likely plays a prominent role in certain morphological subtypes of gastric cancers. MEK-1 is also overexpressed in gastric cancer, particularly in metastatic lymph nodes. Upregulation of MAPK signal transduction pathways may play an important role in tumorigenesis and metastatic potential of gastric cancer.