肺癌K—ras基因突变的检测及临床应用

为探讨基因检测在肺癌中的应用价值，应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测１０２例肺癌患者手术标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１２密码子突变的状况。并将肺腺癌按临床病理特征分组进行对比分析。结果显示，肺癌中总突变率为２４％，腺癌中为４９％，鳞癌为１５％，而小细胞癌中无一例突变。吸烟是促发Ｋ－ｒａｓ基因突变的重要因素（Ｐ〈０．０５），肺腺癌突变组淋巴结转移早、部位远，其一年复发率达８５％，明显高于未突变组（Ｐ〈０．０１）。     

老年吸烟者肺癌H-ras基因突变的研究

目的探讨老年吸烟者肺癌Ｈｒａｓ基因变化的意义。方法对３３例吸烟肺癌和２２例不吸烟肺癌患者采用纤维支气管镜毛刷刷取支气管脱落细胞,应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法进行Ｈｒａｓ基因突变检测。结果肺癌中Ｈｒａｓ基因总突变率为５２７％（２９／５５）,其中吸烟组肺癌Ｈｒａｓ基因突变率为６６７％,不吸烟组肺癌为３１８％,二者差异有显著性（Ｐ＜００５）,吸烟组肺鳞癌患者Ｈｒａｓ基因突变率为７００％,明显高于不吸烟组肺鳞癌患者的１６７％（Ｐ＜００５）。结论提示Ｈｒａｓ基因可能是被烟草激活的一个特殊位点,吸烟是导致Ｈｒａｓ基因突变的重要因素。     

K—ras基因与肺腺癌

Ｋ－ｒａｓ基因突变主要发生在肺腺癌，吸烟是促发Ｋ－ｒａｓ基因突变的重要因素。Ｋ－ｒａｓ基因突变是肺腺癌估计复发、判断预后的良好指标。在肿瘤发生时，细胞中原癌基因被激活成为癌基因，从而使细胞正常生长、增殖、分化及调控紊乱，继而发展成肿瘤细胞。近年来Ｋｉｒｓｔｅｎ－ｒａｓ（Ｋ－ｒａｓ）基因与肺癌，特别是与肺腺癌的关系日益受关注。本拟对近年来Ｋ－ｒａｓ基因点突变与肺腺癌的关系予以综述。     

血清HBsAg阳性患者肝癌及癌旁组织中P^53和K—ras基因突变及其相…

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对２４例血清ＨＢｓＡｇ患者肝癌及癌旁组织中Ｐ＾５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变进行了检测。肝癌组织中Ｐ＾５３基因突变率为３３％，Ｋ－ｒａｓ基因突变率为２５％，癌旁正常组织中无Ｐ＾５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变，癌旁硬化组织中Ｋ－ｒａｓ突变为１５％，无Ｐ＾５３基因突变。     

食管腺癌与鳞癌中H-ras12位点突变与P53 Exon 4杂合缺失探讨

应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法对２２例食管癌及癌旁组织（８例腺癌、１４例鳞癌）Ｈ－ｒａｓ１２位点突变、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失规律进行了探讨。结果发现，２２例食管癌组织中发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变６例（６／２２、２７．２％）、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失５例（５／２２、２２．７％），与癌旁组织比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。８例腺癌与１４例鳞癌中两种基因变化无差异。两种基因改变在食管癌标本中散在分布，无标本同时具有两种基因变化。Ｈ－ｒａｓ改变与Ｐ５３缺失相比无明显优势表现，反之亦然。研究表明，二种基因的改变可能在食管癌的的致病过程中起协同作用，也可能受不同致病因子影响而有不同表现。Ｈ－ｒａｓ基因突变、Ｐ５３基因杂合缺失可能是食管癌癌变机理之一。     

胃粘膜中增殖细胞核抗原及p53、K-ras、bc1-2基因蛋白的表达

为了解胃粘膜癌变过程中多基因蛋白的表达及意义，应用免疫组化技术检测１０７例内镜活检胃粘膜组织中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ｂｃ１－２基因蛋白。结果各基因蛋白阳性率随病变程度加重而增加。Ⅲ型肠化生者增殖细胞核抗原标记指数（ＰＣＮＡＬＩ）及Ｋ－ｒａｓ、ｂｃ１－２基因蛋白阳性率较之Ⅰ、Ⅱ型肠化亦有增高趋势但未见统计学差异（Ｐ≥０．０５）。１２例Ⅲ型肠化中有９例出现Ｋ－ｒａｓ或ｂｃ１－２蛋白异常表达（７５．０％），显著高于Ⅰ、Ⅱ型肠化（２３．８％）（Ｐ＜０．０５）。在肠型及胃型胃癌ｐ５３表达率为５３．３％、３７．０％（Ｐ＞０．０５）；Ｋ－ｒａｓ为４０．０％、７．４％（Ｐ＜０．０５）；ｂｃ１－２为９３．３％、５９．３％（Ｐ＜０．０５）。１５例肠型胃癌中有９例同时存在２种或２种以上蛋白异常表达（３例ｐ５３与ｂｃ１－２表达异常，２例ｂｃ１－２与Ｋ－ｒａｓ表达异常，４例ｐ５３与ｂｃ１－２、Ｋ－ｒａｓ异常表达），高于胃型胃癌（Ｐ＜０．０５）。结果提示以上基因产物的表达异常与胃粘膜癌变相关，Ⅲ型肠化属于胃癌癌前病变范畴，肠型胃癌发生发展的分子机制与胃型胃癌显著不同。     

痰液癌基因突变的检测在肺癌诊断中的应用

目的从分子生物学检测角度来寻求敏感的肺癌诊断新方法。方法应用多聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性长度片段多态性分析法（ＲＦＬＰ）及免疫组化技术（ＩＨＣ），检测６２例肺癌和３４例肺部良性疾病患者痰标本中ｋｒａｓ、ｐ５３基因的突变状况，检测结果与组织学、脱落细胞学诊断进行对比分析。结果肺癌痰标本的脱落细胞学敏感性为６１％、阴性预计值（ＮＰＶ）为５９％；ｐ５３阳性表达的敏感性为７７％、ＮＰＶ为６６％；ｋｒａｓ变异阳性的敏感性为３４％、ＮＰＶ为４２％；ｐ５３、ｋｒａｓ和痰脱落细胞学联合检测：敏感性提高至９２％（Ｐ＜０．０５）、ＮＰＶ为８４％（Ｐ＜０．０５）。２４例痰细胞学假阴性痰标本中ｐ５３或ｋｒａｓ变异阳性１７例（７１％）。结论痰标本ｐ５３、ｋｒａｓ的联合检测可增加痰检的敏感性，补充和提高脱落细胞学的诊断价值。     

胰腺癌患者胰液中K-ras基因突变的检测及其意义

目的 通过对经逆行胰胆管造影（ＥＲＣＰ）所获胰液的Ｋ－ｒａｓ基因突变检测,以探索胰腺癌诊断的新方法。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－限制性片段长度多态性的方法检测胰腺良、恶性疾病组织物、胰液上清和细胞的Ｋ－ｒａｓ突变。结果 胰腺癌和胰腺良性疾病标本分别有７１％（１５／２１）,而胰腺良性疾病无一例有Ｋ－ｒａｓ的突变。用胰液细胞有４％ＰＣＲ未能获得成功,胰腺癌胰液细胞Ｋ－ｒａｓ的突变率为６５％（１１     

原发肝癌N-ras基因点突变研究

目的研究Ｎｒａｓ基因第１２位密码子突变与原发性肝癌（ＨＣＣ）发生发展的关系．方法采用聚合酶链延伸反应限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对３０例ＨＣＣ手术切除标本Ｎｒａｓ第１２密码子点突变进行检测．结果在３０例ＨＣＣ中，发现Ｎｒａｓ第１２密码子点突变５例，突变率为１６７％．点突变与肿瘤大小、分化程度、有无转移及ＨＢＶ感染无显著相关（Ｐ＜００５）．结论Ｎ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变参与了部分ＨＣＣ的发生与发展．     

胃癌癌旁组织中幽门螺杆菌感染及基因改变

应用ＰＣＲ、ＰＣＲ／ＲＦＬＰ对胃癌及癌旁组织中Ｈｐ感染进行了检测，并应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＤＮＡ测序探讨了Ｈｐ感染与ｒａｓ基因、ｐ５３基因变化的关系。研究结果发现：２４例胃癌组织Ｈｐ阳性１２例（１２／２４，５０％），２４例癌旁组织Ｈｐ阳性１１例（１１／２４，４８．５％），两者无显著差异，胃癌组基因改变者１７例（１７／２４，７０．８３％），其中Ｈｐ阳性１２例（１２／１７，７０．５９％），７例无基因改变者未发现Ｈｐ感染。癌旁组基因改变者１例，其中Ｈｐ为阴性。２４对胃癌ｐ５３Ｅｘｏｎ４的杂合缺失率为４７．３７％（９／１９）。ｐ５３Ｅｘｏｎ５、６、７、８突变在癌组织中有１１例（１１／２４；４５．８％），癌旁组仅一例，发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变者７例（７／２４，２９．１７％），癌旁组则无突变。胃癌基因改变与Ｈｐ＋相关性比较发现，Ｈｐ感染与基因改变关系密切（Ｐ＜０．０１）。各种基因改变中以ｐ５３改变似与Ｈｐ感染关系更紧密（ｒ＝０．５Ｐ＜０．０５）。结果表明，ｒａｓ基因及ｐ５３基因的协同作用在胃癌的致病机理中显示出重要作用。在癌变过程中，可能Ｈｐ的感染是基因改变进而促进组织恶变的促动因素之一。