烙铁头蛇毒素纤维蛋白原溶酶研究:Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头（T.mucrosquamatus）蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA，但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFg显著延长血浆凝血酶时间、血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时，TMVFg体外也能延长全血凝固时间，表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明：TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片（FDP）除具有抗凝血酶，抑制纤维蛋白聚合活性外，还能促进纤维蛋白的聚合。进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液，得两个FDP断片功能峰，FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成；FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成，抑制TMVA（烙铁头蛇毒血小板活化素，它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集），但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。实验证明，TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的，但在二者之间，前者是主要的。从研究结果发现：TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程，这就发现了FDP断片的新功能。它证明了FDP断片作为血液凝固、纤溶正反馈调节因子的功能。这一类FDP断片还能抑制TMVA诱导的血小板聚集，因此，烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg将成为研究血液凝固调节系统及血小板聚集第三条途径的强有力试剂。     

蛇毒纤维蛋白（原）溶酶

在蝰亚科、蝮亚科和眼镜科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白 (原 )的酶 ,称为纤维蛋白 (原 )溶酶 (简称纤溶酶 ) [1] 。 1 976年 ,Ｏｕｙａｎｇ等第一次从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到纤溶酶[2 ] 。这些纤溶酶可用于溶解在心肌梗塞、中风、血栓等期间形成的血凝块[1] 。作为一种潜在的强有力的抗栓药物 ,纤溶酶已成为蛇毒蛋白酶领域的一个研究热点。1 .蛇毒纤溶酶的分类蛇毒纤溶酶的分类方法主要有 3种 :第一种根据纤溶酶对纤维蛋白原 (ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ ,Ｆｇ)的作用方式 ;第二种是根据纤溶酶的结构特点[3] ;第三种是根据纤溶酶的分…     

菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的分离纯化和理化性质

以前从菜花烙铁头蛇毒中分离纯化到Jerdonitin。与其他Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶相比,Jerdonitin由金属蛋白酶和去整合素两个结构域组成。但没有检测到其出血和纤维蛋白原降解活性,推测可能高压液相色谱的有机溶液影响了其酶活性。采用不含高压液相色谱柱层析的新分离手段分离得到Jerdonitin。Jerdonitin在还原和非还原SDS—PAGE电泳中分别呈现一条表观分子量为38和36kDa的条带。像其他典型的蛇毒金属蛋白酶一样,Jerdonitin优先降解人纤维蛋白原的alpha链,并且该活性能被EDTA完全抑制,而PMSF对其没有影响。Jerdonitin不诱导小白鼠皮下出血。     

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究——Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头(T.mucrosquamatus)蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA,但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFS显著延长血浆凝血酶时间。血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时,TMVFg体外也能延长全血凝固时间,表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明:TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片(FDP)除具有抗凝血酶,抑制纤维蛋白聚合活性外,还能促进纤维蛋白的聚合。 进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液,得两个FDP断片功能峰,FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成;FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成,抑制TMVA(烙铁头蛇毒血小板活化素,它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集),但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。 实验证明,TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的,但在二者之间,前者是主要的。 从研究结果发现:TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程,这就发现了FDP断片的     

菜花烙铁头蛇毒中一种具有激肽释放酶与纤维蛋白原溶酶活性的Jerdonase

通过DEAESephadexA 5 0阴离子交换、超细SephadexG 10 0分子筛和反相高效液相C4 色谱层析 ,从菜花烙铁头蛇毒冻干粉中纯化出一种具有激肽释放酶活性和α纤维蛋白原溶酶活性的丝氨酸蛋白酶 ,命名为Jerdonase。在 12 .5 %胶浓度的SDS还原电泳条件下 ,该酶分子量大约为 5 5kD ,在非还原电泳条件下 ,分子量大约为 5 3kD。此酶是一种糖蛋白 ,含有约 35 .8%的中性糖。它的N末端氨基酸序列为IIGGDEENINEHPFLVALYDA ,其序列和蛇毒中其他丝氨酸蛋白酶具有非常高的序列相似性。Jerdonase能够催化BAEE、S 2 2 38和S 2 30 2的水解 ,其水解活性可被PMSF抑制 ,但是EDTA对此没有影响。Jerdonase能优先水解人纤维蛋白原的Aα链 ,同时伴随有微弱的Bβ链水解活性。另外 ,此酶能够水解牛低分子量的激肽原 ,释放舒缓激肽。总之 ,所有的结果表明Jerdonase是一个具有多功能活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶     

蛇毒纤维蛋白(原)溶解酶综述

蛇毒纤维蛋白溶解酶能直接溶解纤维蛋白(原).对蛇毒纤溶酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒患者的凝血病理机制,而且为其开发应用提供了理论基础.该文综述了蛇毒纤溶酶的研究进展及应用前景,重点阐述了蛇毒纤溶酶的分布和种类、分子结构及酶学特性等方面的内容.     

烙铁头蛇毒对体外血凝及纤溶的影响

行体外血凝及纤溶观察结果表明：①烙铁头蛇毒能明显延长凝血活酶时间（ＰＴＴ）、凝血酶原时间（ＰＴ）及蝰蛇毒磷脂时间（ＲＶＶＣＴ）,显示出较强的抗凝活性;②对人纤维蛋白原及纤维蛋白有较强的溶解作用,这种作用不完全是单一的活化素样作用,还有脆浆素样作用     

湖南烙铁头蛇毒蛋白组分的双向电泳分析

烙铁头蛇是世界上剧毒的蛇种之一,其所携带的毒素能够导致严重的机体损伤。应用蛋白质双向电泳技术,对湖南烙铁头蛇蛇毒蛋白的蛋白质组分进行分析。通过等电聚焦和SDS-PAGE凝胶电泳分析获得完整的烙铁头蛇毒全蛋白质的图谱,经胶体考马斯亮蓝染色后,应用PDQuest软件对蛋白表达谱进行分析。通过等电聚焦和SDS-PAGE凝胶电泳有83个蛋白质组分被检测出来。其中大约90.00%的蛋白质的相对分子质量(Mr)分布在15～45 kDa之间,大约72.29%的蛋白质等电点(pI)在4.0～7.0之间。通过对烙铁头蛇毒的蛋白组学研究,获得其蛇毒蛋白质组分的表征特点,为后续进一步研究各组分的身份和潜在功能奠定基础,既可以提出新的治疗方案又可以为新的药理应用提供宝贵资源。     

猪血纤维蛋白溶酶原的纯化及性质研究

 用偶联有L-赖氨酸的Sepharose 4B亲和柱对猪血纤维蛋白溶酶原进行分离纯化,所得酶原在酸性及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质区带,在碱性条件下电泳及等电聚焦电泳表现出较明显的不均一性。还原及非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得酶原分子量为88kD,经尿激酶激活后,进行还原SDS-凝胶电泳,出现两条新的蛋白质区带,分子量分别为63kD和26kD。酶原含中性糖1.35％,N-末端为异亮氨酸。尿激酶激活后产生的血纤维蛋白溶酶以对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯为底物,测得Km为4.2m mol/L,V_(max)为13.5 IU。6-氨基已酸对酶活性有双重影响。此外,还观察了胰蛋白酶对猪血纤维蛋白溶酶原的激活。     

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF PHOSPHODIESTERASE I FROM Walterinnesia aegyptia VENOM

A phosphodiesterase I (EC 3.1.4.1; PDE-I) was purified from Walterinnesia aegyptia venom by preparative native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). A single protein band was observed in analytical native PAGE and sodium dodecyl sulfate (SDS)-PAGE. PDE-I was a single-chain glycoprotein with an estimated molecular mass of 158 kD (SDS-PAGE). The enzyme was free of 5′-nucleotidase and alkaline phosphatase activities. The optimum pH and temperature were 9.0 and 60°C, respectively. The energy of activation (Ea) was 96.4, the V_max and K_m were 1.14 µM/min/mg and 1.9 × 10^?3 M, respectively, and the K_cat and K_sp were 7 s^?1 and 60 M ^?1 min^?1 respectively. Cysteine was a noncompetitive inhibitor, with K_i = 6.2 × 10^?3 M and an IC₅₀ of 2.6 mM, whereas adenosine diphosphate was a competitive inhibitor, with K_i = 0.8 × 10^?3 M and an IC₅₀ of 8.3 mM. Glutathione, o-phenanthroline, zinc, and ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) inhibited PDE-I activity whereas Mg²⁺ slightly potentiated the activity. PDE-I hydrolyzed thymidine-5′-monophosphate p-nitrophenyl ester most readily, whereas cyclic 3′-5′-AMP was least susceptible to hydrolysis. PDE-I was not lethal to mice at a dose of 4.0 mg/kg, ip, but had an anticoagulant effect on human plasma. These findings indicate that W. aegyptia PDE-I shares various characteristics with this enzyme from other snake venoms.     

穴居狼蛛毒中一个抗菌活性多肽的鉴定和纯化

从我国新疆地区产穴居狼蛛的毒液中分离纯化了一种多肽——狼蛛抗菌肽(Lycosin)。穴居狼蛛的粗毒在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳中可分出11条蛋白带,用0.6％的大肠杆菌琼脂胶覆盖在凝胶上进行鉴定表明,电泳迁移率最快的区带有抗菌活性。经鉴定该多肽分子系由43至45个氨基酸残基组成,N-末端为丙氨酸,分子中的碱性和疏水性氨基酸分别占总氨基酸残基数的1/4和1/3。     

蛇毒产量与相关因素的测试观察

本文报道我国常见毒蛇的采毒量及不同月份的产量。探讨取毒时间,喂食与蛇毒产量、质量间的相互关系。研究结果表明,取毒时间以间隔20—30天取一次最好,不仅产量高而且活力较强,饥饿情况下蛇毒产量高、质量好,食物投放最好在取毒后,每月或20天投食1—2次,喂食频繁则对产量、质量均行影响。蛇毒毒性以3—4月、10—11月最佳,6—9月毒力低。     

福建产圆斑蝰蛇毒中性磷脂酶A2的降压作用与机理

福建产圆斑蝰蛇毒中性磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２－３）对麻醉Ｗｉｓｔａｒ大鼠、猫和家兔均产生急性降压效应,并具快速耐受性。该降压作用能被吲哚美辛取消。应用放射免疫法测定血浆前列环素（其稳定产物６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦｌａ）含量,与给药前相比,降压高峰时血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦＩｌａ含量增高。离体入胃网膜动脉条实验观察到,ＰＬＡ２－３呈剂量依赖性降低入胃网膜动脉条静息张力;对预先用去甲肾上腺素或５－羟色胺收缩的人胃网膜动脉条也具松弛作用。结果表明该ＰＬＡ２降压机制与前列环素（ＰＧＩ２）的释放和外周血管扩张有关。     

竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒凝血酶样酶的分离纯化及其理化性质的研究

用CM—Sephadex C—25分离竹叶青粗毒,再经DEAE—Sephadex A—50和CM—Sephadex C—25纯化得到凝血酶样酶组分Ⅰ。用DEAE—Sephadex A—50分离竹叶青粗毒,再经DEAE—Sepharose CL—6B纯化得到凝血酶样酶组分Ⅱ。用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,组分Ⅰ在两种电泳中均为一条带; 组分Ⅱ在两朴电泳中均为二条带,经切割后鉴定证明组分Ⅱ的二条带都是凝血酶样酶。组分Ⅰ的分子量为54,500,由261个氨基酸残基组成,其中Asp和Glu含量较高,含14％中性己糖,13.1％己糖胺和14.7％唾液酸,等电点为3.5,在280nm处的消光系数为E_(1cm)~(0.1％)=0.855。组分Ⅱ的分子量分别为54,000和47,000。经凝胶电泳分离后用过碘酸—Schiff's试剂染色,证明组分Ⅰ和组分Ⅱ都是糖蛋白。     

蛇毒纤维蛋白（原）溶解酶的研究进展

蛇毒纤溶酶能直接溶解纤维蛋白（原）,具有作为强力溶栓剂的潜在价值。对蛇毒纤溶酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒患者的凝血病理机制,而且为其开发应用提供了理论基础。文章综述蛇毒纤溶酶的研究进展及应用前景,重点阐述其分子结构、酶学特性及其与出血活性的关系     

巨蝮蛇(Lachesis muta)毒出血毒素的纯化和性质研究

应用Sephadex G—75凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和DEAE-3 SW Spherogel高压液相层析三步分离纯化程序,从巴西巨蝮蛇毒中获得二个具有蛋白水解酶活力的出血毒素Ⅳ—Ⅱ和Ⅳ—Ⅲ。它们在SDS凝胶电泳鉴定时显示出单一的蛋白带。IV—Ⅱ和Ⅳ—Ⅲ的分子量用SDS凝胶电泳测定分别为22,000和23,000,而等电点分别为6.50和6.12。Ⅳ—Ⅱ的最小出血剂量是25微克,Ⅳ—Ⅲ是0.5微克。当这两个出血毒素分别与纤维蛋白原保温时,都具有像胞浆素水解纤维蛋白原的作用,它们的分子中都含有金属Zn。     

酶标免疫分析法鉴定蛇毒

蛇伤的治疗与蛇伤种类的快速诊断密切相关。我们用亲和层析法纯化了三种蛇毒的抗体Fab,它们之间无免疫交叉反应。然后用高碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记到抗体Fab上。我们建立的三夹心式酶标免疫测定蛇毒的方法,可在90分钟内检测到5毫微克以下的蛇毒,人体血清对该测定无干扰现象,临床检测效果良好。     

虎纹捕鸟蛛毒的生物学活性鉴定

本文报道了采集广西产虎纹捕鸟蛛（Selenocosmia huwena)毒液的方法,并对粗毒进行了部分生物学活性的测定,该粗毒对小鼠和蜚蠊的LD50分钟为1．16mg/kg和300ug/g,该粗毒具有透明质酸酶,碱性磷酸酶,蛋白水解酶和脱氧核糖核酸酶活性,未测到磷脂酶A和胆碱脂酶性,通过电生理实验发现该粗毒含有阻断蟾蜍神经肌肉接头传递的毒素,并观察到当小鼠接受腹腔注射致死剂量（5mg/kg)粗毒后便迅速出现呼吸麻痹。