PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌的影响

本试验探讨PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌量的影响。选择已免疫CSFV弱毒疫苗的猪为实验动物,提取四肢长骨骨髓,进行T淋巴细胞的分离培养。分别在培养后的24、72 h,用PRRSV特异性肽N1、N2对所培养细胞进行刺激,再进行培养12 h,经离心方法得到细胞上清液,最终检测上清液中细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌含量变化。结果显示,PRRSV特异性肽-N对于免疫猪骨髓中IFN-γ的分泌影响较小,能够抑制IL-12的分泌,不利于机体免疫反应,对IL-10的分泌影响复杂,需进一步研究。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒对受精卵发育的影响

１４头同期发情青年母猪排卵后３２小时，取出受精卵进行微注射或在（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｅ）胚胎培养液－３（加或不加猪繁殖与呼吸综合征病毒，ＰＲＲＳＶ）中培养７２小时。使用猪肺泡巨噬细胞分离病毒，反转录酶聚合酶链式反应和荧光抗体技术检测样品中的病毒。结果与对照组相比，微注射或加有ＰＲＲＳＶ的胚胎培养均未明显抑制体外猪胚胎发育（分别为Ｐ＝０．７５和Ｐ＝０．１４）。用１０～２０ＴＣＩＤ５０的病毒微注射或大浓度病毒处理胚胎进行培养，在胚胎中均检测不出ＰＲＲＳＶ。本试验得出结论是：４～１０－细胞期猪胚胎对ＰＲＲＳＶ体外感染不敏感。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)是严重危害养猪业的一种较新的重要病原。近年来国内外学者对其研究不断深入 ,在病毒分子生物学方面取得了重要进展。PRRSV基因组的结构与功能得以明确 ,基因组所编码的蛋白及蛋白结构和 PRRSV的基因变异进一步得以认识。此外 ,PRRSV与其它病原体之间的相互作用愈来受到重视 ,关于此方面的研究也不断增多。这些研究为 PRRS疫苗的设计及制定全面、有效的防制措施提供了科学依据     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是严重威胁养猪业发展的一种重要的病原。近几年来,国内外学者对其进行了深入的研究,尤其在病原的分子生的学方面取得了许多新的进展。病毒的基因组结构及其所编码的蛋白质的功能已基本搞清,这些研究为进一步研究有效的基因工程疫苗、有效控制该病的发生提供理论依据。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP1对猪体免疫抑制作用

为了研究高致病性PRRSVNSP1蛋白的免疫作用,本研究将高致病性PRRSVNSP1重组腺病毒（rAd—NSP1）接种体外培养的猪肺泡细胞（PAM）,用实时荧光定量PCR和ELISA方法分别检测IFN-γ和IL-10水平,结果为rAd—NSP1接种PAM细胞72h后可显著降低细胞上清中IFN-γ的水平,而IL-10的含量显著提高。将rAd—NSP1接种无PRRSV感染的30日龄商品仔猪,分别检测其外周血液淋巴细胞增殖作用和IFN-γ与IL-10的水平,结果显示,NSP1可显著减低淋巴细胞增殖和IFN-7的表达,同时诱导产生较强的IL-10反应。采用无PRRSV感染的30日龄商品仔猪免疫猪瘟疫苗后1周接种rAd—NSP1,结果猪瘟抗体的水平明显低于wtAd组（P〈0．05）,证明高致病性PRRSVNSP1蛋白具有免疫抑制作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗和变异株灭活疫苗的免疫效果评价

分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄～45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察和病毒抗原定位.结果显示变异毒株灭活疫苗免疫攻毒后导致的病理变化和病毒抗原分布程度均明显高于CH-1R弱毒疫苗免疫组.免疫病理学研究结果表明CH-1R 弱毒疫苗对HU-4株强毒免疫保护效果好于变异毒株灭活疫苗.     

PRRSV GP5类特异性肽对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓中细胞因子分泌的影响

试验从猪骨髓中分离T淋巴细胞,待细胞培养达到相应时间点时,分别用PRRSV GP5类特异性肽进行刺激,继而检测细胞因子IL-10、IL-12以及IFN-γ分泌量的变化情况。结果显示:在PRRSV GP5类特异性肽刺激后,骨髓中IL-10分泌量减少,表明G1、G2肽具有减弱免疫抑制,促进抗炎性细胞因子产生的作用;此外,IL-12的分泌量也减少,提示猪的免疫保护作用减弱,表明PRRSV GP5类特异性肽可能具有双面性;而IFN-γ的分泌量变化不稳定,有待于进一步研究。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株GP4蛋白免疫活性研究

克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的ORF4基因,将疏水序列缺失后,再克隆到原核表达载体pET-32a中,得到阳性重组质粒,经IPTG诱导,纯化后由Western blotting分析,并将所得的包涵体、变性蛋白和复性蛋白分别免疫小鼠,获取的血清抗体进行效价和中和活性的检测。为深入研究GP4蛋白的免疫特征奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研究进展

单克隆抗体在兽医领域的应用价值越来越受到研究人员的重视。本文概述了近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）结构蛋白单克隆抗体的研究概况，以及它们在该病病毒分子生物学研究中的应用。     

脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的抗病毒免疫反应的影响

为研究脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)诱导的抗病毒免疫反应的影响,本研究采用100 TCID₅₀的PRRSV感染猪肺巨噬细胞（porcine alveolar macrophage,PAM）,感染12 h后用100 ng/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理感染细胞,分别培养12、24、36、48 h后收集细胞及上清,同时设PRRSV组、LPS组和PAM细胞组,用河南农业大学兽医微生物研究室已建立的Real-time qPCR方法对LPS+PRRSV组和PRRSV组中PRRSV复制水平及各组PAM细胞中IFN-α、TNF-α mRNA转录水平变化进行定量分析。结果显示,LPS+PRRSV组与PRRSV组相比,PRRSV拷贝数12～48 h均较低,IFN-α mRNA转录水平显著升高（P＜0.05）,TNF-α mRNA转录水平升高,在48 h时转录水平降低。而与LPS组相比,LPS+PRRSV组IFN-α mRNA转录水平在12 h时升高,24、36、48 h均降低。结果表明,PRRSV感染PAM细胞经LPS刺激后,IFN-α、TNF-α mRNA转录水平显著升高（P＜0.05）,从而抑制了PRRSV在PAM细胞内的复制。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒引发的免疫抑制

猪繁殖与呼吸综合症病毒主要侵害猪体的巨噬细胞系统,特别是肺泡巨噬细胞,使感染猪的免疫力降低,引发免疫抑制.但许多研究证明PRRSV引起的免疫抑制是暂时性的,仅在肺中并局限于一定的水平.由PRRSV引发的猪的呼吸道病常伴发细菌感染是PRRSV感染的一大特征.由PRRSV引起的免疫损伤和在合并症中各种病原微生物的关系在试验中没有得到复制,不同PRRSV毒株在诱发机体产生免疫抑制方面的差别也没有得到比较.所以在没有实验室证据前,应慎重看待PRRSV在诱发猪体产生免疫抑制方面的作用.     

猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律研究

为制定科学的免疫程序,从根本上控制猪繁殖与呼吸综合征的发生,用ELISA诊断试剂盒分别对母猪、仔猪进行了母源抗体和免疫抗体检测。试验证明母猪在配种前15 d首免,怀孕2个月时二免,在下一次配种前15 d再免,如此按生产周期免疫可以抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。在母猪产前1个月免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,所产仔猪母源抗体60日龄时为阴性,故45日龄左右对仔猪进行首免最佳,为确定仔猪首免日龄提供了理论依据。对40日龄仔猪免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗后,仔猪58日龄时抗体S/P平均值最高,到160日龄育肥猪时抗体S/P平均值为阴性,这时不能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。对40日龄仔猪肌肉注射2 mL猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,70日龄同剂量二免,85日龄时抗体S/P值平均值最高,到180日龄育肥猪时抗体S/P平均值仍为阳性,还能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染,如果作为肉猪可以安全上市;作为后备母猪,在配种前进行免疫即可。非免疫母猪、仔猪对照组抗体均为阴性。通过试验基本上查明了猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律,为以后制定免疫程序提供了理论依据。     

猪生殖——呼吸综合征病毒研究进展

对猪生殖与呼吸综合征病毒新的分类地位,基因结构特点,病毒蛋白的功能、病毒在细胞的增殖过程,增殖特点、毒株变异等新进展及病毒独特的生物学行性作了综述,提出了病毒变异和毒力差异的分子基础是需要进一步研究的问题。     

猪繁殖与呼吸综合征致病机理的研究进展

PRRS(猪繁殖与呼吸综合征)复杂的发病机制包括抗体依赖性增强、引起机体免疫抑制和在机体内持续性感染等现象,以及病毒遗传多样性;这些是该病难以防控的主要原因,本文就近年有关进展进行综述。     

抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用

用PRRSV感染SPF猪，血清检测结果显示，机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1)，而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同，应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头，7d后经鼻腔感染PRRSV，定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；2头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；3头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著，可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体，保护机体免受PRRSV的感染。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北京分离株（BJ－4）后48h接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48h接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。现已遍及世界各主要养猪国家和地区,成为危害养猪业最严重的传染病之一。作者就猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理方面的研究情况作一综述,为诊断技术、免疫机理研究、疫苗设计和疫病防制提供借鉴。     

猪繁殖—呼吸综合征病毒的形态学

利用电子显微技术，对从上海某发病猪场分离到3株猪繁殖－呼吸综合征病毒（PRRSV）和标准美洲株（ATCC－VR2332）进行了形态特征的比较。结果表明，这4株病毒形态特征无显著差异。负染显示该病毒以球形为主，具有囊膜，囊膜上有纤突，大小为60－85nm。超薄切片可见病毒粒子大量存在于细胞浆内，有囊膜的直径为60－80nm，没有囊膜的直径为40－50nm，在细胞的线粒体，高尔基体和双基核膜内可见病毒粒子。在病毒增殖的同时，Marc-145细胞的显微结构逐渐发生破损，显示病毒的释放是通过破坏细胞膜结构的完整性来实现的。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫保护机制及疫苗研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的高变异性、免疫逃逸以及异源毒株间的交叉保护效果差,致使现有疫苗保护效力的持久性和有效性受限。本文归纳了PRRSV国内外流行毒株的进化和抗原变异以及毒株中和表位的免疫保护机制研究现状,系统分析了传统疫苗、反向遗传学构建的嵌合疫苗、基因工程疫苗、干扰素诱导激活疫苗以及纳米疫苗等的研究进展,提出了通过不断改良佐剂、改进接种方式等途径开发新型PRRSV疫苗,有望加快终结PRRS的全球流行,为研发安全高效的新型PRRSV疫苗提供了参考。