湖北部分肉种鸡群J亚群禽白血病血清学调查及PCR检测

采用间接ELISA和ALV-J特异性PCR方法,对湖北省荆州市的两个肉种鸡场共94只淘汰肉种鸡进行J亚群禽白血病血清学调查和ALV-J前病毒核酸检测.两个鸡场共检测出13份ALV-J抗体阳性血清和11份核酸阳性样品,抗体阳性率分别为13.2%和14.6%,核酸阳性率分别为11.3%和12.2%.血清学调查和PCR检测结果表明,湖北鸡群已存在J亚群禽白血病.     

福建省蛋鸡血管瘤型J亚群白血病的分子生物学诊断

针对福建省某鸡场的蛋鸡群发生产蛋下降和部分死亡,病鸡脚趾明显呈现血管瘤特征,运用实时荧光定量PCR方法对病鸡组织和血液样品进行检测,检出了J亚群白血病病毒(ALV-J);通过基因序列的比较分析,发现其氨基酸序列与国外及国内其他省份报导的ALV-J有很高的同源性,从病原分子生物学诊断角度证实福建省蛋鸡群中ALV-J的存在。     

淋巴细胞性J亚群禽白血病的诊断及其病理组织学观察

对2例疑似感染J亚群禽白血病病毒(J-Subtype Avian leukosis virus,ALV-J)的病禽进行临床观察和病理解剖,结果发现肝脏和脾脏均肿大,肝脏、心脏、肺脏、腺胃有肿瘤样结节;设计1对引物针对ALV-J的gp85基因,对2例病死鸡的肝脏组织进行PCR检测,结果 2份组织样品均扩增出与预想结果一致的924 bp的ALV-J特异片段;取病死禽的心、肝、脾脏等组织制做石蜡切片,HE染色,进行病理组织学观察,结果发现肝组织有大量成淋巴细胞和淋巴样瘤细胞,呈灶状聚集;脾组织结构松散,白髓和红髓界限不清,脾小体消失,间隙有大量淋巴样瘤细胞;心包脂肪、心肌间、心脏血管中大量淋巴样瘤细胞;腺胃肌层、腺胃乳头间隙有淋巴样瘤细胞,1病例腺胃乳头可见出血;肺泡隔及肺泡腔中有大量淋巴样瘤细胞填充等病理变化。试验结果证实,2例土鸡均为淋巴细胞性J亚群禽白血病。     

J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立及初步应用

采用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立检测ALV-J的降落PCR(TD-PCR)方法,并对反应体系进行优化。结果表明:建立TD-PCR方法灵敏度高、特异性强,可检测0.105 ng的DNA,该方法与网状内皮组织增生症病毒、马立克病病毒、鸡贫血病毒及I群禽腺病毒没有交叉反应。运用TD-PCR、ELISA以及病毒分离对临床病料进行检测,TD-PCR方法与ELISA检测结果一致(100%),均比病毒分离检出率(75%)高。证明TD-PCR检测ALV-J的方法具有快速、灵敏、特异等优点,可满足临床、生产实际检测的需要。     

三群商品代蛋鸡J亚群白血病跟踪观察

【目的】了解J亚群白血病在海兰褐蛋鸡群中发生和发展的真实表现及其与病毒分离和抗体反应的关系；【方法】对来自3个鸡场39至43周龄31只疑似ALV-J感染鸡做了连续两个月的临床、病理、病毒血症和抗体反应动态观察和比较；【结果】这3群鸡对ALV-J感染率非常高，有28只鸡在死前感染ALV-J或呈现持续性病毒血症，其中14只表现为无抗体反应的免疫耐受性持续性病毒血症。这3群鸡都表现为典型J亚群白血病髓细胞样肿瘤特征性病变，且在几乎所有不同脏器和组织均可出现。在31只鸡中，有13只鸡同时在3个或3个以上不同脏器中出现肿瘤/血管瘤，有1只鸡出现在5个器官中；【结论】中国近年来不仅仍有ALV-J在蛋鸡群中流行，而且在过程中，ALV-J致病性逐渐增强。     

云南省昆明地区种鸡J亚群禽白血病血清学调查

[目的]了解云南省昆明地区种鸡场J亚群禽白血病的感染状况。[方法]从云南省昆明市疑似感染禽白血病的某种鸡场采集644份泄殖腔(公鸡)拭子和460份蛋清(母鸡)样品,采用ELISA法对种鸡J亚群禽白血病进行抗原检测。[结果]在检测的460份蛋清样品中,172份抗原呈阳性,阳性率为37.39%;在检测的644份泄殖腔拭子中,520份抗原呈阳性,阳性率为80.75%。A养殖场共检测644份样品,总阳性率为63.66%,其中蛋清样品的阳性率为39.13%,泄殖腔样品的阳性率为82.07%。B养殖场共检测460份样品,总阳性率为61.30%,其中蛋清样品的阳性率为34.78%,泄殖腔样品的阳性率为78.99%。此次检测结果表明云南省昆明地区种鸡群已严重感染J亚群禽白血病。[结论]该研究可为种鸡J亚群禽白血病的防治提供理论依据。     

ALV-J人工感染鸡病毒血症和抗体反应动态

 【目的】了解J亚群白血病病毒（ALV-J）感染鸡后抗体反应和带毒排毒的规律,以便为制定鸡群中 ALV-J感染的预防控制和净化措施提供可靠的流行病学依据。【方法】1日龄和49日龄SPF鸡分别通过注射、口服和接触感染ALV-J,对各感染组的病毒血症、泄殖腔排毒及抗体反应进行动态检测。【结果】不同日龄感染ALV-J后的病毒血症和抗体的动态有很大差异。1日龄SPF鸡注射感染ALV-J后,自2周起开始可检出泄殖腔p27抗原和病毒血症。注射感染组有71%（5/7）鸡在26周内持续带毒排毒,其中有3只鸡在感染后45周仍带毒排毒。其中一只鸡在16周时产生一过性抗体,另两只鸡完全没有抗体。口服感染组仅11%（1/9）鸡呈持续带毒排毒,44%（4/9)鸡仅呈短暂性带毒排毒,且自第8周起即可检测到较高的抗体水平。同笼接触组既不带毒排毒,也无抗体水平,表明未发生传染。49日龄SPF鸡即使注射攻毒后,在19周内的5次检测中,p27抗原和病毒血症均为阴性。攻毒后1周开始出现抗体反应并维持一段时间。49日龄SPF鸡经口服和接触感染,病毒血症和泄殖腔p27均为阴性,也无抗体反应。【结论】1日龄SPF鸡感染ALV-J很容易发生免疫耐受,感染鸡持续带毒排毒而不产生抗体;49日龄SPF鸡感染后,1周可产生高水平的抗体,但不带毒排毒。不同接种方式对ALV-J感染的动态有很大影响,注射感染诱发的病毒血症和耐受性病毒血症显著高于口服感染。     

2019年安徽部分规模鸡场禽白血病血清学调查

为了解安徽省规模鸡场禽白血病感染情况,本研究选取10个不同规模的鸡场,采集血清样品进行禽白血病A/B亚群和J亚群血清学检测。结果显示,在10个规模鸡场中,有5个鸡场检测出A/B亚群禽白血病血清学阳性,有3个鸡场检测出J亚群禽白血病血清学阳性,其中有3个鸡场同时检出A/B亚群和J亚群禽白血病血清学阳性。     

蛋鸡白血病的PCR检测和序列分析

采用PCR方法对某蛋鸡场送检感染鸡进行实验室诊断,针对禽白血病病毒逆转录酶3’区域设计鉴定内外源病毒共同下游引物H5,针对ALV-J亚群gp85囊膜糖蛋白基因保守区域设计上游引物H7,A-E亚群gp85囊膜糖蛋白基因保守区域设计上游引物AD1,提取肝脏病料中核酸进行PCR扩增,测序分析结果表明为内源性禽白血病病毒感染。     

血管瘤型禽白血病的实验室诊断

采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率分别为66.7%(4/6)、75%(3/4);取ALV 囊膜糖蛋白gp85 基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和 SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR 产物.试验结果证实本次疫病是由ALV-A 亚群病毒引起的血管瘤型白血病.     

安徽省地方品种鸡J-亚群禽白血病感染状况的血清学研究

[目的]了解安徽省优良地方品种鸡群中禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)的感染状况。[方法]对安徽省8个鸡场、7个不同地方品种鸡开展了ALV-J感染的血清学调查。[结果]安徽省被检测鸡场均存在ALV-J感染,被检测鸡群个体阳性率高达49.9%,甚至部分鸡场鸡群个体阳性率高达86.2%。AHDF5品种鸡个体阳性率高达86.2%,其次为AHDF2、AHDF6、AHDF3、AHDF7、AHDF4和AHDF1品种鸡。4个周龄段的鸡群均有ALV-J抗体阳性鸡,但存在一定程度的差异.12周龄以下鸡群ALV-J阳性感染率相对较低,为7.1%;随着周龄的增大,ALV-J阳性率总体上呈现上升趋势,最高达50%。[结论]安徽省地方品种鸡中ALV-J的感染非常严重,应及早对ALV-J进行净化和采取综合防控措施。     

J亚群禽白血病病毒中国分离株的人工致病性试验

 通过接种 1日龄AA肉用型鸡和 11日龄SPF鸡胚 (蛋用型鸡 )对 4个J亚群禽白血病病毒 (ALV J)中国分离株的致病性进行了研究。在连续观察的 6个月中 ,只有从病鸡分离到的SD990 2株ALV J可诱发急性髓细胞瘤(ML)。在SD990 2株病毒人工接种的 12只 1日龄的AA肉用型鸡中 ,有 9只分别在 2 2～ 38日龄死亡 ,其肝、脾显著增生性肿大 ,并显现弥散性分布的细小的灰白色结节 ,心肌上可见许多大小不一的肿瘤结节。病理组织切片中 ,在肝脏、心肌和骨骼肌等组织中均可见胞浆中大量充满嗜酸性颗粒的髓细胞样肿瘤细胞。其余 3株病毒感染的肉用型鸡无肉眼可见的肿瘤性变化 ,生长和临床表现正常。显然 ,SD990 2株ALV J为急性转化型病毒 ,而SD990 1、YZ990 1和YZ990 2这 3株病毒仍属致病性较弱的非转化型病毒。 11日龄的SPF鸡胚 (蛋用型鸡 )在接种这 4株病毒后孵出的鸡 ,在近 7个月的连续观察中 ,没有发现肿瘤性变化 ,其生长和临床表现基本正常 ,表明这 4株中国株ALV J对蛋用型鸡不表现致瘤性     

Study on the Pathogenicity of Chinese Strains of Subgroup J Avian Leukosis Viruses

The pathogenicity of 4 Chinese strains of subgroup J avian leukosis viruses (ALV-J), SD9901,SD9902, YZ9901 and YZ9902, was studied. The results showed that only SD9902 among the 4 strains induced mortality from myeloid leukosis (ML). In the 12 meat-type chickens inoculated with SD9902 at 1-day-old, 9died between 22 days and 38 days after inoculation. No death or ML was found in chickens inoculated with the other 3 strains during the period of 6 months. These results suggested the SD9902 strain of ALV-J was an acute transforming virus, but SD9901, YZ9901 and YZ9902 were non-transforming viruses. All 4 Chinese strains did not induce any tumors in egg-type SPF chickens during 7 months after hatching when viruses were injected into 11-day-old embryos.     

实验感染肉鸡组织中J亚群禽白血病病毒的抗原定位

从实验感染J亚群禽白血病病毒(ALVJ)的髓细胞性白血病肉鸡病例中,选取典型病例,用J亚群禽白血病病毒单克隆抗体通过免疫酶组化试验对不同组织进行了抗原定位观察。结果显示:在实验感染阳性肉鸡体内实质组织细胞及瘤细胞的核膜和细胞浆里可见不同程度的棕黄色阳性反应,可为探讨ALVJ对体内组织细胞的嗜性提供依据。     

贵州鸡淋巴性白血病A亚型血清学调查及PCR诊断

鸡白血病是由禽白血病病毒引起的多种肿瘤性疾病的总称,以造血组织恶性增生为特征的一种病型很复杂的慢性传染病.通过对贵州省鸡淋巴性白血病血清学调查,采用ELISA方法对采集分离的273份血清样本进行了血清学抗体检测,检测结果阳性率为14.65%;运用PCR方法对莱鸡场血管瘤型病例进行生物学诊断,检测结果证实了血管瘤型病例是由ALV-A亚群病毒引起的禽A亚型淋巴性白血病.     

蛋鸡群发生马立克氏病继发H9亚型禽流感的诊治

马立克氏病是一种重要的免疫抑制病,严重影响养鸡业的健康发展。通过对一例发生马立克氏病继发H9亚型禽流感的蛋鸡群的症状进行分析、剖检变化及实验室诊断,提出了治疗和预防措施,为马立克氏病和H9亚型禽流感的防治提供参考。     

An Evaluation of the Infection Status and Source of Subgroup J Avian Leukosis Virus in Cloned Free-Range Layers

In recent years, subgroup J avian leukosis virus (ALV-J) has been found to frequently infect layers in China. This virus is responsible for economic losses due to both mortality and decreased performance in chickens. In this study, 45-d-old cloned free-range layers were suspected to be infected with ALV and other immunosuppressive diseases because their feathers were unkempt and their growth rate was impaired. To estimate the infection status and determine the source of ALV-J in the flock, 30 cloacal swabs were randomly collected to measure the p27 antigen level by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Among the birds that were tested, 87% (26/30) were positive. In addition, 6 anticoagulant blood samples were aseptically collected at random from the flock when the layers were 60 d old. These samples were centrifuged to obtain the leukocytes, which were then used to inoculate chicken embryo fibroblast (CEF) cells for the identification of ALV-J by indirect immunofluorescence (IFA). Of the samples tested, 100% (6/6) were positive. The flock's production performance was also investigated, and 10 layers were necropsied to evaluate pathological changes at 115 d of age. The flock never laid eggs even though they reached the age of the first laying (110 d). Furthermore, there were pathological changes present, including atrophy of the thymus and bursa of Fabricius, undeveloped ovaries, glandular stomach haemorrhage, and hepatosplenomegaly. Paraffin-embedded sections of intumescent liver and spleen were prepared for antigen localisation using IFA. Positive signals were prevalent in paraffin-embedded sections of the intumescent liver and spleen. Furthermore, provirus DNA was extracted from 4 cloned free-range layers, and 2 paternal parents (HR native cocks), and the gp85 gene of ALV-J was amplified by PCR to analyse the genetic variation. The results of the autogenous variation analysis showed that the 6 strains were 98.5–99.7% homologous. This study indicated that there was persistent infection with ALV-J by dynamic inspection, which seriously reduced the production performance of the flock. In addition, the genetic variation analysis showed that ALV-J in the flock was more likely to have originated from the paternal parent, the HR native cock.     

蛋鸡J亚群禽白血病病毒gp85基因遗传进化分析

为了解福建省蛋鸡J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的遗传进化关系,对来自福建省蛋鸡场发病蛋鸡中分离鉴定的3株ALV-J的gp85基因进行克隆与测序,并与国内外18株ALV-J参考株的基因序列进行分析。结果表明:3株蛋鸡分离株的gp85基因与亚群2的国内蛋鸡分离株(CL09DP02、GL09DP01和HuB09JY03)以及原型株HPRS-103的亲缘关系较近,达97.8%~99.6%,表明福建省蛋鸡ALV-J株很可能与国内部分蛋鸡ALV-J分离株有着共同的来源。