槲皮素对长波紫外线引起表皮癌细胞DNA损伤的预防作用

目的观察长波紫外线引起人表皮癌细胞DNA链断裂损伤的情况,以及槲皮素对这种损伤的预防作用。方法用长波紫外线照射细胞,用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤。结果长波紫外线剂量依赖性地诱发表皮癌细胞的DNA链断裂损伤,损伤的高峰出现在照射1 h。表现为慧星细胞百分比的降低和彗星尾巴长度的缩短,并有量效关系。结论槲皮素可以预防长波紫外线照射引起的皮肤癌细胞DNA链断裂损伤。     

单细胞凝胶电泳在电离辐射DNA损伤中的应用研究

单细胞凝胶电泳检测 (singlecellgelelectrophoresis,SCGE) ,又称彗星试验 (cometassay ,CA) ,于 1984年由OSTLING等人首创 ,1988年后经SINGN等人[1] 改进与完善。我国于 2 0世纪 90年代中期开始应用该方法进行检测与研究。目前SCGE在检测由理、化及环境生物等因素所致的DNA损伤方面与以往常用的检测DNA损伤方法 (如染色体分析、微核分析、双核微核分析及姐妹染色单体互换等 )相比 ,具有方法简便、快捷、灵敏等优点[2 ,3 ] ,能反映单个有核细胞的DNA损伤情况 ,近几年来已被广泛用于放射生物学领域DNA损伤与修复等方面的检测。…     

硫辛酸对内毒素诱导的SIRS大鼠心肌损伤的保护作用

目的 以内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导法建立全身炎症反应综合征(SIRS)大鼠心肌损伤模型,探讨不同浓度硫辛酸(lipoic acid,LA)对大鼠心肌损伤的保护作用。方法 选择健康SD大鼠75只,其中60只腹腔注射内毒素25mg/kg,构建SIRS大鼠心肌损伤模型,再分为阴性对照组、LA大剂量组、LA中剂量组、LA小剂量组,每组15只;其余15只大鼠为正常组。分别于24、48、72h后采用real-time PCR检测各组每只大鼠心肌组织中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)水平,ELISA法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)的水平。同时观察心肌组织变化。结果 LPS诱导后,LA阴性对照组大鼠心肌中NF-κB、IL-1、TNF-α在72 h时最高。与阴性对照组比较,处理24、48、72h后,LA大剂量组、中剂量组中NF-κB、IL-1、TNF-α表达水平下降(P<0.05);随硫辛酸剂量加大,心肌组织炎症反应相应减轻。结论 硫辛酸对SIRS大鼠心肌损伤有一定保护作用,其机制可能与抑制NF-κB激活以及下调心肌组织中IL-1、TNF-α的表达有关。     

α-硫辛酸对小鼠视网膜光损伤的保护作用

目的观察α-硫辛酸对光损伤后小鼠视网膜的保护作用。方法将42只成年健康BALB/C小鼠随机分为正常组、光损伤组和药物干预Ⅰ组和药物干预Ⅱ组,药物干预Ⅰ组造模前后均给药,药物干预Ⅱ组造模后给药。药物干预组腹腔注射α-硫辛酸注射液100mg/kg,1次/日,直至处死。用光损伤装置建立小鼠视网膜光损伤模型,光照时间为12h,之后暗室饲养12h,共3个循环,总光照时间为36h。各组动物分别于7天及14天处死并摘取眼球,常规方法制备眼球石蜡切片,在光学显微镜下观察视网膜组织病理学变化,同时测量视网膜外核层厚度,计数外核层细胞凋亡数及凋亡指数。结果药物干预组视网膜结构与光损伤组相比较,其层次更加分明,细胞排列较整齐,感光细胞层呈毛刷状,可见内外节交界。视网膜外核层厚度在正常组为41.62±0.77μm,在光损伤组7天时为30.51±0.73μm,14天时为20.04±0.52μm,药物干预Ⅰ组在7天时为40.52±0.80μm,14天时为41.23±0.72μm,药物干预Ⅱ组在7天时为31.70±0.70μm,14天时为38.92±1.43μm,经统计学分析,药物干预组视网膜外核层厚度值显著高于光损伤组,但尚不及正常组,组间具有显著性差异(P<0.001)。TUNEL试剂盒检测4组视网膜细胞凋亡结果显示:药物干预Ⅰ组和Ⅱ组小鼠的视网膜外核层凋亡细胞数及凋亡指数AI明显低于光损伤组,但不及正常组,组间具有统计学差异。结论本实验结果显示,α-硫辛酸对小鼠视网膜光损伤具有保护作用。     

硫辛酸对重要脏器缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

硫辛酸（α-lipoic acid,α-LA）是一种在酵母、菠菜及肉类中发现的生物因子,其主要生物活性是抗氧化,是目前已知的唯一具备脂、水兼容性的抗氧化剂。近年来,硫辛酸在抗氧化及治疗糖代谢、糖尿病并发症和其他多种疾病方面的作用已受到关注,其医用价值正在得到认可。现就硫辛酸在重要脏器缺血再灌注损伤保护作用的研究进行综述。     

α-硫辛酸对豚鼠缺血-再灌注耳蜗损伤的防治作用

目的:探讨椎基底动脉缺血再灌注耳蜗组织损伤机制,观察α- 硫辛酸(LA)对损伤组织的保护作用。方 法:豚鼠随机分组:正常组,假手术组,缺血组,缺血再灌注24h、10d组,LA组(缺血前腹腔注射LA100mg/(kg· d),连用7d),生理盐水组(同LA组,但腹腔注射生理盐水)。于缺血再灌注术前及处死动物前行ABR测试。ABR 测试后活杀动物取耳蜗,基底膜铺片观察耳蜗组织形态学变化,硫代巴比妥酸显色法测耳蜗组织过氧化氢酶 (CAT)、丙二醛(MDA)含量。结果:缺血组及再灌注各组ABR各波潜伏期及Ⅰ～Ⅲ波间期较正常组明显延长,阈 值升高;外毛细胞出现变形、崩解破坏、排列紊乱、缺失、核溶解等改变,基底周较其余各周明显;CAT活性降低, MDA含量升高;再灌注24h组损伤最重。LA组动物各观察指标与缺血再灌注10d组相比有明显改善。结论:氧 自由基引发的膜脂质过氧化反应参与了缺血 再灌注耳蜗组织损伤;LA可有效保护缺血 再灌豚鼠耳蜗组织。     

西红花酸对自由基发生系统诱导DNA损伤的保护作用

目的研究西红花酸对不同自由基发生系统诱导的DNA损伤的保护作用.方法通过葡聚糖凝胶、TBA反应、紫外碱基吸收来检测西红花酸对DNA的保护作用.结果 DNA被OH*进攻损伤后,碱基在260 nm处紫外吸收下降,DNA脱氧核糖氧化破坏,其氧化产物与TBA反应在532 nm处出现特征吸收,DNA的链结构破坏,痕量的金属离子可以加速DNA的损伤.西红花酸可以显著抑制DNA的上述损伤.结论西红花酸具有很强的抗自由基作用,对DNA具有保护作用.     

番茄汁对DNA损伤的保护作用研究

目的 探讨番茄汁对人正常细胞和肿瘤细胞增殖的影响及DNA损伤的保护作用.方法 采用MTT法检测不同剂量的番茄汁对细胞增殖的影响,彗星实验检测不同剂量番茄汁对细胞DNA的影响及对DNA损伤的保护作用.结果 当番茄汁体积在培养液中所占比例低于15%时,对正常细胞和肿瘤细胞的增殖没有任何影响;当番茄汁在培养液中所占比例达到或超过20%时,此时的培养液不是细胞生长的最适条件,表现为细胞生长抑制.番茄汁在培养液中体积分数为50～500 μL/mL时没有引起细胞DNA损伤,而低浓度(20～100 μL/mL)番茄汁对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用,该作用随着番茄汁剂量的增加而增强,表现为拖尾细胞减少,尾长减短,番茄汁剂量与拖尾细胞尾长具有明显的剂量-反应关系,呈负相关(r=-0.917,P=0.00369).肿瘤细胞和正常细胞实验结果一致.结论 番茄汁不但不会引起细胞DNA损伤,而且对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用;此外,在研究番茄汁对细胞增殖影响时应该注意番茄汁在培养液中所占的体积,本实验显示番茄汁不能超过20%,否则会得到错误的结论.     

甲氨蝶呤对小鼠4种组织器官细胞DNA损伤作用

目的了解甲氨蝶呤(MTX)的作用机制,探测其作用的遗传毒性靶器官。方法用单细胞凝胶电泳技术检测了MTX染毒后脾、骨髓、胸腺和外周血淋巴细胞的DNA损伤情况及其与MTX剂量间的关系。结果腹腔注射1.25～5mg/kgMTX可诱发小鼠4种细胞的DNA单链断裂,核DNA损伤程度与用药剂量呈正相关关系。结论不同脏器细胞对MTX的易感性不同,脾、骨髓、胸腺、外周血淋巴细胞可能是MTX的遗传毒性靶细胞。外周血淋巴细胞在SCGE分析中的拖尾现象可作为用药后组织器官对药物敏感性反映的生物标志。     

西维因致男性工人精子DNA损伤的机制初探

目的:探讨西维因农药暴露与男性工人精子DNA损伤的关系,并探讨其可能的机制?方法:选择某农药厂西维因生产男工31名为暴露组;该厂行政区男性员工36名为内对照组;同地区男性行政人员22名为外对照组?检测3组人群精子DNA损伤?精浆超氧化物歧化酶(SOD)活性及精子活性氧(ROS)含量?选用培养的小鼠精母细胞(GC2-spd细胞)进行体外功能学验证,在不同浓度西维因染毒条件下,分析细胞存活率?凋亡及SOD活性,ROS含量的变化?结果:与内?外对照组相比,暴露组男性精子DNA断裂损伤显著增加(P < 0.05)?精浆SOD活性降低及精子ROS增加(P < 0.05)?相关性分析的结果显示,精子DNA损伤与精浆SOD的活性负相关(r=-0.53,P < 0.001),与精子ROS水平呈正相关(r=0.32,P=0.002)?小鼠精母细胞随西维因染毒剂量增加细胞存活率显著下降,凋亡增多并且细胞SOD减少及ROS增加(P < 0.05)?结论:西维因可影响男性精液质量,其可能的机制是通过氧化应激导致精子DNA的损伤?     

DNA条形码技术在福建省大田县山地生境中鼠种调查的初步应用

目的 探讨和应用基于COI的DNA条形码技术对福建省大田县野外生境进行鼠种调查。方法 采用笼夜法在大田县境内捕鼠,对捕获鼠进行形态学鉴定后,经肝脏组织核酸提取、目标条带COI基因片段的扩增及测序获取序列信息,通过同源性比对、遗传距离分析和系统进化树构建对所捕获的野栖鼠进行准确鉴定。结果 本次调查共捕获24只野栖鼠,经形态学鉴定青毛鼠14只、板齿鼠6只、白腹巨鼠3只、黄毛鼠1只。经DNA条形码技术鉴定,其中青毛鼠13只、板齿鼠6只、白腹巨鼠4只、大足鼠1只。各鼠种种内遗传距离为0.00%~0.21%,种间遗传距离为13.24%~18.03%,种间遗传距离显著高于种内遗传距离。DNA条形码技术鉴定结果与形态学鉴定结果存在2份标本的差异,经再次鉴定,更正了形态学鉴定结果。结论 DNA条形码技术可作为形态学鉴定方法的补充,应用于鼠种调查和分析中。探讨和应用基于COI的DNA条形码技术对大田县山地生境进行鼠种调查。     

SSRP1基因的克隆及其参与DNA损伤应答的初步研究

目的:研究组蛋白伴侣分子SSRP1对DNA损伤的应答情况。方法:从HeLa细胞扩增SSRP1 cDNA,并克隆到EGFP载体上。EGFP-SSRP1在细胞内表达,用405 nm激光刺激诱导DNA损伤,随后观察EGFP-SSRP1的聚集情况。结果:经酶切和测序鉴定,我们成功构建了EGFP-SSRP1表达载体。EGFP-SSRP1在405 nm激光刺激后迅速聚集到激光照射位点。结论:我们的结果直接证实了SSRP1快速参与DNA损伤应答。     

久效磷对小鼠DNA损伤的研究

目的探讨久效磷对小鼠的遗传毒性。方法50只小鼠,随机分成5组,设4个久效磷染毒组(0.25 mg.kg-1、0.50 mg.kg-1、1.00 mg.kg-1和2.00 mg.kg-1)和对照组。4个染毒组分别给予0.25 mg.kg-1、0.50 mg.kg-1、1.00 mg.kg-1和2.00 mg.kg-1的久效磷灌胃,对照组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d。采用微核试验和单细胞凝胶电泳实验检测久效磷的遗传毒性。结果久效磷染毒小鼠14 d后,与对照组相比,随着染毒浓度的升高,小鼠骨髓细胞微核率显著升高(P<0.05,P<0.01)),小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度显著增加(P<0.05,P<0.01),并具有良好的剂量-效应关系。结论久效磷对小鼠具有遗传毒性。     

DNA损伤检验点ATM-chk2通路影响衰老的作用机制分析

目的分析DNA损伤检验点ATM—chk2通路对影响衰老的作用机制。方法选择SD大鼠4个月龄、12个月龄、20个月龄和28个月龄各10只．分别取4个月龄、12个月龄、20个月龄和28个月龄大鼠的骨髓组织进行ATM—chk2通路的观察,并对结果进行分析。结果4个月龄、12个月龄、20个月龄和28个月龄SD大鼠的ATM基因表达随着月龄增加，呈逐渐下降趋势，不同月龄大鼠间比较，差异具有显著性（P〈0．05）；ATM—chk2通路基因蛋白表达呈逐渐上升趋势，组间比较差异具有显著性（P〈0．05）。结论ATM基因表达及ATM—chk2通路基因蛋白表达水平和大鼠月龄直接相关，年龄越大ATM基因表达日渐降低，ATM—chk2通路基因蛋白表达呈逐渐上升趋势。     

轮叶党参中的齐墩果酸对紫外线照射所诱发DNA损伤的保护作用

[目的]探讨轮叶党参中分离到的齐墩果酸(OA)对紫外线照射所诱发DNA损伤的保护作用.[方法]取大鼠采用给脾细胞行紫外线照射的方法制作DNA损伤模型,分别给予10,20,40,80mg/L的OA;给DNA损伤大鼠脾细胞加入40mg/L齐墩果酸,培养30,60,90,120min,用荧光分光光度法检测DNA裂解率.[结果]给大鼠脾细胞行紫外线照射后,DNA裂解率明显增高(P<0.01),当OA终质量浓度分别为10,20,40,80mg/L时,紫外线照射之前用OA预处理2h可降低紫外线照射所致的DNA裂解率,DNA裂解率随OA加入量的增加而逐渐降低,当OA剂量超过20mg/L后DNA裂解率下降缓慢.单纯紫外线照射组和加入OA组的DNA裂解率均随着培养时间的延长而逐渐下降,当培养时间达到60min后,两组DNA裂解率间差异有统计学意义,加入OA组的DNA裂解率明显低于单纯紫外线照射组.[结论]齐墩果酸可保护紫外线照射所诱发的DNA损伤,且促进断裂DNA的修复过程.     

Decoupling of DNA damage response signaling from DNA damages underlies temozolomide resistance in glioblastoma cells

Glioblastoma multiforme （GBM） is the most aggressive primary brain tumor in adults.Current therapy includes surgery,radiation and chemotherapy with temozolomide （TMZ）.Major determinants of clinical response to TMZ include methylation status of the O6-methylguanine-DNA methyltransferase （MGMT） promoter and mismatch repair （MMR） status.Though the MGMT promoter is methylated in 45% of cases,for the first nine months of follow-up,TMZ does not change survival outcome.Furthermore,MMR deficiency makes little contribution to clinical resistance,suggesting that there exist unrecognized mechanisms of resistance.We generated paired GBM cell lines whose resistance was attributed to neither MGMT nor MMR.We show that,responding to TMZ,these cells exhibit a decoupling of DNA damage response （DDR） from ongoing DNA damages.They display methylation-resistant synthesis in which ongoing DNA synthesis is not inhibited.They are also defective in the activation of the S and G2 phase checkpoint.DDR proteins ATM,Chk2,MDC1,NBS1 and gammaH2AX also fail to form discrete foci.These results demonstrate that failure of DDR may play an active role in chemoresistance to TMZ.DNA damages by TMZ are repaired by MMR proteins in a futile,reiterative process,which activates DDR signaling network that ultimately leads to the onset of cell death.GBM cells may survive genetic insults in the absence of DDR.We anticipate that our findings will lead to more studies that seek to further define the role of DDR in ultimately determining the fate of a tumor cell in response to TMZ and other DNA methylators.     

吉西他滨对放射相关DNA损伤修复的影响

目的研究吉西他滨（GEM）在体外对胰腺癌细胞的放疗增敏作用及机制。方法体外培养胰腺癌Pancl细胞株,将其分为空白对照组、单纯照射组、吉西他滨组及吉西他滨联合放疗组（联合放疗组）。采用源皮距（SSD）为100cm,剂量2、4和6Gy的4MV—X线进行细胞照射;运用MTT实验方法选出细胞生长抑制率≤10％的药物浓度（IC10）,即GEM的最佳实验浓度;克隆形成实验观察空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组胰腺癌细胞Pancl体外增殖情况。流式细胞仪分析上述各组细胞的细胞周期和凋亡改变。免疫印迹法分别检测空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组DNA损伤以及损伤修复指标ν-H2AX、Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达。结果GEM在体外具有放射增敏作用。MTT结果显示,GEM在0．04～0．06μmol／L之间为最佳实验浓度。射线照射后,GEM能显著降低胰腺癌细胞的克隆形成能力,即增殖能力。凋亡结果显示,与GEM组及单独放疗组比较,联合放疗组Pancl细胞的凋亡数明显增加,其凋亡率差异有统计学意义（P＜0．05）;细胞周期检测结果表明,GEM作用于胰腺癌细胞后,S期细胞水平明显升高。胰腺癌细胞DNA损伤指标ν-H2AX蛋白表达水平在GEM组,单纯放疗组及联合放疗组均增加,联合放疗组较GEM组有进一步升高。与空白对照组、单纯照射组、GEM组比较,联合放疗纽胰腺癌细胞中DNA损伤修复指标Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达均降低。结论GEM对胰腺癌放射治疗有增敏作用。其机制涉及诱导细胞凋亡,改变Pancl细胞生长周期,并通过抑制射线照射后胰腺癌细胞DNA损伤修复,间接对胰腺癌的放疗起增敏作用。     

精子DNA损伤因素研究进展

人类精子DNA损伤是男性生育力减退的重要原因之一,其可由多种因素诱发精子DNA链断裂或使其双链变性为单链等而形成。具有DNA损伤的精子可在一定程度上逃避体内精子的优化选择机制而将遗传缺陷传递给后代,精子DNA损伤可导致胚胎发育异常、早期流产和先天畸形等相关疾病。文章通过分析评价年龄、禁欲时间、环境、精子冷冻、氧化应激、微量元素以及染色质包装异常等因素对精子DNA损伤,阐述精子DNA损伤的研究现状,为进一步阐明精子DNA损伤的发生机制以及男性不育的预防、治疗和辅助生殖技术选用高质量精子提供基础材料。