用SYBR-GreenⅠ实时荧光PER结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应（real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1，SYBR-PCR），检测左缺（-α^4.2）、右缺（-α^3.7）等位基因，同时进行融解曲线（dissociation calve，DC）和Tm（melting temperature）值分析。PCR产物重组到pCR2．1，重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度，确定两种等位基因型（-α^4.2，-α^3.7）的检测下限，并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α^4.2和-α^3.7的PCR产物长度分别为1．65kb、1．9kb，Tm分别为（81．5±0．5）℃、（82．5±0．5）℃，检测下限分别为9×10^2个拷贝、4．3×10^2个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Greenl实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α^4.2、-α^3.7、αα（包括α^Tα）及--^SEA4种等位基因，从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高，不需荧光标记探针，成本低，易质控，防污染，高通量等优点，适于临床推广应用。     

东莞地区新生儿α-地中海贫血的PCR筛查

目的 了解东莞地区新生儿α-地中海贫血发病率。方法 利用PCR法对1378例新生儿脐血。进行α-地中海贫血的筛查。结果 1378例脐血筛查中，有36例为右侧缺失杂合子(-αα^3.7／αα)，9例为左侧缺失杂合子(-αα^4.2／αα)，发病率分别为2．61％和0．65％。结论 该法快速、准确，可作为常规方法用于临床样品的分子筛查。     

PCR技术快速检测常见缺失型α-地中海贫血-2基因

目的 建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型α-地中海贫血-2的PCR技术,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法 α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌噙胞嘧啶核苷酸含量,使引物的选择和PCR扩增受到限制,对于左缺失型-α^4,2基因,在疾病基因序列测定的基础上,设计了一套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^3,7基因,则设计了四引物多套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^4.2基因和-α^3,7基因的分子诊断,正常人只有1条内对照扩增条带,而α-地中海贫血-2杂合子可见对应的2条扩增条带。结论 该体系可检测-α^3,7和-α^4,2缺失型α-地中海贫血-2基因,有望用于临床样本分子诊断稿发人群基因筛查。     

胚胎植入前诊断α-地中海贫血一例

目的对1例α-地中海贫血患者进行植入前胚胎遗传学诊断。方法应用单细胞跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）检测技术对1例夫妇双方均为α-地贫杂合子进行了胚胎植入前诊断（PGD）。结果9个胚胎进行PGD,经PCR分析,共获得2个正常胚胎,其中一个胚胎体外发育停滞;2个杂合子胚胎,2个重型地贫胚胎,2个胚胎未检出;移植了3个胚胎,获得临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用PGD技术可对α-地贫进行胚胎植入前遗传筛查,达到优生的目的。     

α—地中海贫血的基因检测与诊断

α－地中海贫血（α－地贫）是严重危害人类健康的遗传病，其基因背景正不断被揭示，具有遗传异质性。目前检测患及其携带的水平正确正不断提高。随着ＤＮＡ分析技术的不断发展，α－地贫的基因诊断日臻完善，本就α－地贫的基因检测检测的ｇａｐ－ＰＣＲ，Ｍ－ＰＣＲ，ＰＣＲ－ＡＳＯ，ＡＲＭＳ，ＡＣＲＳ，ＤＧＧＥ，ＲＤＢ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等方法进展作一综述。     

荧光定量PCR技术在α地中海贫血基因筛查与诊断中的研究

目的 了解本地区孕妇α地中海贫血基因携带情况及其血液学特点,为预防地中海贫血出生缺陷提供科学数据.方法 采用荧光定量PCR技术,对1000例孕妇进行α地中海贫血基因筛查与诊断,阳性标本用传统地中海贫血基因诊断方法进行验证;并同时用血红蛋白电泳技术对该1000例孕妇样本进行α地中海贫血筛查.结果 1000例孕妇中α地中海贫血基因携带16例,携带率为1.6％,基因型分别是：缺失型16例,突变型0例;传统α地中海贫血基因诊断方法验证：基因型分别是：缺失型16例,突变型0例,结果全部吻合;血红蛋白毛细管电泳筛查提示有α地中海贫血者5例.结论 本地区α地中海贫血基因携带率为1.6％,采用合理的方法进行育龄孕妇普遍筛查对预防出生缺陷的发生有积极意义.     

应用单管多重PCR诊断缺失型α-地中海贫血

目的探讨应用单管多重PER对缺失型α地中海贫血进行诊断,并了解-SEA、-α3.7、-α4.2三种缺失型在广西南宁农村地区人群中的分布情况。方法对466例用血液学参数分析初筛为仪地中海贫血患者进行基因诊断。结果初筛为OL地中海贫血466例临床标本,基因检测证实326例为0【地中海贫血。在326例o【地中海贫血患者中,-SEA／αα197例、-α3.7／αα64例、-α4.2／αα50例,占60．43％、19．63％和15．34％。与PCR检测相比,MCV、MCH和HbA2检测的灵敏度分别为86．20％、79．45％、77．61％;检测特异度分别89．29％、66．43％、71．14％。结论与血液学检测方法相比,单管多重PCR检测具有快速、准确的优点,可用于大面积人群和,临床样品的缺失型仪一地中海贫血的分子流行病学调查及产前诊断。     

α地中海贫血的基因芯片快速诊断技术研究

目的建立快速,准确,便于推广应用的诊断我国常见的3种缺失型（--^SEA,-α^4.2,-α^3.7）,2种非缺失型（HbCS,HbQS）α地中海贫血（α地贫）的基因芯片诊断技术。方法自行设计6对聚合酶链式反应（PCR）引物,优化PCR反应条件,运用PCR,基因芯片杂交,荧光扫描技术,根据芯片上荧光信号的有无,位置及强弱检测3种缺失型,2种非缺失型α地贫。结果成功地检测中国人常见的3种缺失型及2种非缺失型α地贫杂合子,纯合子以及双重杂合子,其检测结果与Southern blotting分析或直接测序结果一致。完成了65例α地贫样本的基因诊断。结论本研究所建立的检测α地贫基因芯片技术准确,可靠,重复性好,无需接触放射性同位素,便于胎儿α地贫基因产前诊断及人群中α地贫基因的筛查。     

ELISA法检测ら珠蛋白链在广西东南亚缺失型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的 评价并比较酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ら珠蛋白链与聚合酶链反应(PCR).方法 在诊断广西东南亚缺失型α-地中海贫血中的临床应用价值.方法 收集广西壮族自治区人民医院门诊部和产科住院病例210份血样标本(其中82例各型α-地中海贫血,13例各型α-地中海贫血,115例为正常对照;地中海贫血组均有MCV＜80fl、MCH＜27pg,Hb在25～128g/L之间,采用ELISA法和聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,最后对ELISA法筛查--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值与聚合酶链反应(PCR)方法进行分析并比较其诊断--SEA携带者的临床应用价值.结果 ELISA法诊断--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值分别是96.2％、98.3％、97.6％、98.3％和96.2％,而聚合酶链反应(PCR)法检测的相应指标均为100.0％(P＞0.05),两者无显著性差异.尽管ELISA法对--SEA携带者有很高的检出率,但其检测α-地中海贫血时有明显的漏检率,尚不属于成熟检测方法,需要进一步研究变流.结论 ELISA法能很有效地检出--SEA携带者,加之该法简便快速、技术要求不高且经济实用,适用于常规实验室筛查.但从本次评价的结论看,该方法漏检率较高,还不适宜推广作为大规模筛查方法.     

ELISA法检测ζ珠蛋白链在广西东南亚缺失型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的评价并比较酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测ζ珠蛋白链与聚合酶链反应（PCR）。方法在诊断广西东南亚缺失型α-地中海贫血中的临床应用价值。方法收集广西壮族自治区人民医院门诊部和产科住院病例210份血样标本（其中82例各型α-地中海贫血,13例各型β-地中海贫血,115例为正常对照;地中海贫血组均有MCV〈80fl、MCH〈27pg,Hb在25～128g/L之间,采用ELISA法和聚合酶链反应（PCR）方法进行检测,最后对ELISA法筛查--^SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值与聚合酶链反应（PCR）方法进行分析并比较其诊断--^SEA携带者的临床应用价值。结果 ELISA法诊断--^SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值分别是96.2%、98.3%、97.6%、98.3%和96.2%,而聚合酶链反应（PCR）法检测的相应指标均为100.0%（P〉0.05）,两者无显著性差异。尽管ELISA法对--^SEA携带者有很高的检出率,但其检测α-地中海贫血时有明显的漏检率,尚不属于成熟检测方法 ,需要进一步研究交流。结论 ELISA法能很有效地检出--^SEA携带者,加之该法简便快速、技术要求不高且经济实用,适用于常规实验室筛查。但从本次评价的结论看,该方法漏检率较高,还不适宜推广作为大规模筛查方法 。     

α-地中海贫血的基因检测与诊断

α-地中海贫血(α-地贫)是严重危害人类健康的遗传病,其基因背景正不断被揭示,具有遗传异质性.目前检测患者及其携带者的水平正不断提高.随着DNA分析技术的不断发展,α-地贫的基因诊断方法日臻完善.本文就α-地贫的基因检测诊断的gap-PCR,M-PCR,PCR-ASO,ARMS,ACRS,DGGE,RDB,PCR-SSCP等方法进展作一综述.     

α地中海贫血的基因诊断技术研究

目的建立一套设有内对照的、简便可靠的、诊断广东省常见的3种缺失型α地中海贫血的基因芯片技术,用于α地中海贫血的分子诊断。方法自行设计5组引物,优化PCR反应条件,运用PCR,芯片杂交,根据荧光信号的有无及位置检测中国人常见的3种缺失型（--SEA,-α3.7,-α4.2）α地中海贫血。结果成功地检测中国人常见的3种缺失型α地中海贫血,检测结果与Southern blotting分析及直接测序的结果一致。结论本研究所建立的方法准确、重复性好,便于临床样本分析及人群中α地中海贫血基因的筛查。     

用SYBR—Q—PCR结合融解曲线分析及mPCR检测江西籍三种常见的缺失型α—Thai基因

目的用自动化、高通量、准确快速技术检测江西省缺失型α—Thal基因。方法用实时荧光定量聚合酶链反应（SYBR—Q—PCR）结合融解曲线（D．C）分析及用单管多重聚合酶链反应（mPCR）技术检测-^SEA、-α^3.7和-α^4．2缺失型α-Thal基因。结果SYBR—Q—PCR结合融解曲线分析较mPCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上，用SYBR—Q—PCR结合D．C、mPCR技术检测出^--SEA、-α^3.7和-α^4.2。19例江西籍α—Thal检出^-SEA／-α^4．2-^SEA／-α^3.7-α^3.7／-α^3.7-α^4.2／-α^4.2-α^3.7／-α^4.2。结论SYBR—Q—PCR和mPCR能简单、省时、经济、准确的检测3种常见α-Thal缺失基因的方法。SYBR—Q—PCR结合融解曲线分析技术是一种高敏感、快速、自动化程度高、高通量，并不需要荧光标记探针。     

40例α地中海贫血的实验诊断及基因型

在2992例贫血原因待查者中,采用血红蛋白生化分析,诊断α地中海贫血40例,其中,HbH 14例,HbH-Bart′s 9例,α地中海贫血1 12例,α地中海贫血2 5例.继采用限制性内切酶图谱分析结合聚合酶链反应技术,检出基因型:--SEA/-α3.7 23例,--SEA/αα12例,αα/-α3.7 5例.     

用SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析及mPCR检测江西籍三种常见的缺失型α-Thal基因

目的 用自动化、高通量、准确快速技术检测江西省缺失型α-Thal基因.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应(SYBR-Q-PCR)结合融解曲线(D.C)分析及用单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术检测-SEA、-α3.7和-α4.2缺失型α-Thal基因.结果 SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析较mPCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上,用SYBR-Q-PCR结合D.C、mPCR技术检测出--SEA、-α3.7和-α4.2.19例江西籍α-Thal检出-SEA/-α4.2 -SEA/-α3.7 -α3.7/-α3.7 -α4.2/-α4.2 -α3.7/-α4.2.结论 SYBR-Q-PCR和mPCR能简单、省时、经济、准确的检测3种常见α-Thal缺失基因的方法.SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析技术是一种高敏感、快速、自动化程度高、高通量,并不需要荧光标记探针.     

α-地中海贫血基因诊断和血液学指标分析

目的分析四川泸州地区α-地中海贫血基因突变类型和血液学指标的关系,探讨血液学指标在α-地贫筛查中的运用价值。方法采用PCR方法结合DNA芯片杂交技术,对135例可疑α-地贫患者进行基因检测分析,根据临床表现和实验室检查分为中间型组（10例）、标准型组（23例）和静止型组（12例）。同时采集同期门诊儿保健康儿童25例作为正常对照组,采用全自动血细胞分析仪分别检测四组小儿血常规红细胞数（RBC）、血红蛋白量（Hb）、平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白含量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度（RDW）和网织红细胞比率（RET％）等血液学指标,并进行统计学分析。结果135例可疑患者中,45例检出α-地贫基因,检出率为33．3％。共检出7种突变基因型,其中--α^SEA/αα缺失型占35．57％,-α^3.7／αα缺失型占24．44％。血液学指标结果显示,中间型组、标准型组和静止型组α-地贫患儿RBC、Hb、MCV和MCH均较正常对照组明显降低,RDW明显升高,差异有统计学意义;而MCHC和RET与正常对照组比较差异无统计学意义。结论四川泸州地区α-地中海贫血基因突变以--^SEA／αα缺失型为主;MCV、MCH和RDW等血液学指标可作为α-地中海贫血的联合筛查指标。     

应用单管四重PCR技术检测三种缺失型α-地中海贫血

目的应用单管四重PCR技术检测3种缺失型α-地中海贫血.方法应用单管四重PCR技术进行302例标本的α-地中海贫血基因诊断.结果302例受检者中,发现--sea/αα69例(77.5%)、-α3.7/αα6例(6.7%)、-α3.7/--sea5例(5.6%)、-α4.2/--sea4例(4.4%)、-α4.2/αα 3例(3.4%)、-α3.7/-α3.7α1例(1.1%)、--sea/--sea 1例(1.1%).结论单管四重PCR技术是检测3种缺失型α-地中海贫血的简便、有效方法,适宜在临床上推广应用.     

应用脐带血电泳筛查新生儿α-地中海贫血

目的应用脐带血血红蛋白(Hb)电泳筛查新生儿α-地中海贫血(简称α-地贫),为玉林市α-地贫的防治提供依据。方法采用全自动电泳仪对2684名新生儿脐带血进行血红蛋白(Hb)电泳,电泳后对Hb区带进行扫描定量分析,根据巴特血红蛋白(HbBart's)含量判定α-地贫类型,并将筛查阳性的病例进行基因诊断。结果 2684份脐带血中,HbBart's含量≥1%者265例,筛查阳性率为9.87%,其中HbBart's含量在1%～3%者为61例,在3～20%者197例,在20%～40%者5例,80%者2例。根据巴特血红蛋白(HbBart's)含量推算出静止型α-地贫,标准型α-地贫,HbH病,巴氏胎儿水肿综合征的携带率分别为2.27%、7.34%、0.19%、和0.07%。除2例巴氏胎儿水肿综合征外,经基因分析诊断为α地贫的有249例。结论应用脐带血血红蛋白电泳筛查新生儿α-地中海贫血方便、快捷、有效,对指导优生优育,提高出生人口质素质有重要意义,可作为新生儿α-地贫的常规筛查方法 。     

11446对新婚夫妇α-地中海贫血筛查结果分析

目的报告11446对新婚夫妇α-地中海贫血（α-地贫）检测结果,了解其基因携带率及分布特征。方法组织受检夫妇抽取静脉血,以平均红细胞体积（MCV）〈79fl为地贫表型阳性指标。对其中2891例表型阳性和1820例表型阴性样品进行α-地贫基因分析。结果22892例筛查对象中检出表型阳性5265例,阳性检出率23％。在表型阳性组中有2891例做了α基因分析,检出3种缺失型α-地贫基因1379例。在表型阴性组中有1820例做了α基因分析,检出3种缺失型α-地贫基因49例,缺失型α-地贫基因携带率为13．05％。常见3种缺失型α-地贫等位基因频率依次是（一一^STA）4．24％、（-α^3.7）1．72％、（-α^4.2）0．87％。临床常见α-地贫的发生率依次为静止型α-地贫4．26％、标准型α-地贫8．57％、HbH病0．22％。结论本地区为地贫高发区,应将基因分析列入筛查项目,为制定地贫干预方案提供科学依据。     

反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血

目的 建立一种简便快速筛查非缺失型α—地中海贫血点突变的反向点杂交(reverse dot blot,RDB)技术。方法 将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果。结果 采用生物素标记的引物：Bio—C1和Bio—C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α—地中海贫血点突变。结论 该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α—地中海贫血点突变。