熊果苷对A375与HACAT共培养模型中黑素细胞酪氨酸酶活性的影响

目的体外构建黑素瘤细胞(A375)与人永生角质形成细胞(HACAT)直接接触共培养模型,观察熊果苷对该模型酪氨酸酶活性的影响同时观察熊果苷对该模型黑素合成及细胞的增殖的影响。方法分别培养A375与HACAT,体外构建黑素瘤细胞与人永生角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞增殖的。结果 A375与HACAT能共同存活;分别用1mg/ml,0.5mg/ml和0.2mg/ml的熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论熊果苷对A375与HACAT共培养模型中细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均呈浓度依赖性抑制作用。     

8-甲氧补骨脂素脂质体对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的研究

目的探讨 8 -甲氧补骨脂素脂质体 (LMOP)对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,以等浓度的 8-甲氧补骨脂素 (MOP)为对照 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果与等浓度MOP相比 ,LMOP低浓度 (10～ 5 0 μmol/L)时显著提高酪氨酸酶活性和黑素含量 (P <0 .0 5 ) ,高浓度 (10 0～ 2 0 0 μmol/L)时对细胞的抑制作用更显著 (P <0 .0 5 )。 结论用脂质体作为MOP的载体可以显著提高MOP对靶细胞的作用 ,为LMOP制剂治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

H2O2对体外正常人黑素细胞和角质形成细胞共培养模型中黑素合成功能的影响

 目的 探讨不同浓度H2O2对黑素细胞(melanocyte,MC)和角质形成细胞(keratinocyte,KC)共培养体系的细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)表达的影响。方法 培养原代人表皮MC和KC,建立共培养模型。采用MTT法测定细胞增殖,NaOH法测定细胞黑素含量,实时PCR方法观察TYR基因的表达。结果 KC和MC以3∶1浓度混合时,可形成稳定共培养模型。高浓度H2O2作用下,共培养细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),TYR基因表达显著降低(P<0.05);低浓度H2O2(<0.1 mmol/L)作用下,细胞增殖受到轻度抑制,TYR基因表达增高(P<0.05)。结论 H2O2对MC与KC共培养体系的作用复杂,对黑素合成功能可呈现双向作用。     

黄芩苷联合NB-UVB对黑素细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的：观察体外培养的人正常黑素细胞经黄芩苷和窄波紫外线（NB-UVB）理后细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的变化,为白癜风的新疗法研究提供理论依据。方法：人正常黑素细胞分为空白对照组、不同浓度黄芩苷组、不同剂量NB-UVB组及黄芩苷和NB-UVB联合组。应用MTT法检测各组黑素细胞增殖率,应用NaOH裂解法测定黑素水平,应用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果：与空白对照组比较,1×10－4 mol/L黄芩苷及30 mJ/cmNB-UVB组黑素细胞增殖率差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较,黄芩苷组、NB-UVB组及联合组黑素水平及酪氨酸酶活性均增加（P<0.05或P<0.01）;与黄芩苷组和NB-UVB组比较,联合组黑素水平和酪氨酸酶活性均增加（P<0.01）。结论：黄芩苷与NB-UVB联合应用较2种方法单独应用具有更好的促黑素合成效果。
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制备方法对甲氧沙林脂质体体外性质的影响研究

目的考察不同制备方法对甲氧沙林脂质体（LMOP）体外质量的影响,从而优选较好的制备方法。方法分别以薄膜分散法、逆相蒸发法、高压乳匀法、冻融法制备LMOP,用透射电镜观察其形态,用凝胶柱层析法结合HPLC测定其包封率,粒度分析仪测其粒径。结果不同方法制备的脂质体形态均较圆整,分布较均匀;包封率顺序为冻融法〉薄膜分散法〉高压乳匀法〉逆相蒸发法：粒径大小顺序为冻融法〉薄膜分散法〉逆相蒸发法〉高压乳匀法。结论该脂质体体外质量与制备方法密切相关。     

白芨水提物对黑素瘤与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：利用人表皮黑素瘤细胞（A375细胞）与人永生化角质形成细胞（HaCat细胞）共培养模型,观察白芨水提物对该模型中黑素合成的影响.方法：构建A375细胞与HaCat细胞共培养模型,采用氢氧化钠裂解法、MTT法和多巴氧化法分别检测白芨水提物对黑素含量、细胞增殖和酪氨酸酶（TYR）活性的影响.结果：与阴性对照组比较,2 g/L、1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L白芨水提物对黑素合成有显著抑制作用（P＜0.01）,2g/L、1 g/L组对黑素合成的抑制作用与阳性对照药物熊果苷组相当;白芨水提物对TYR活性有显著抑制作用（P＜0.01）,其中0.5 g/L、0.25 g/L和0.125 g/L组与阳性对照药物熊果苷组的作用相当.结论：白芨水提取物可以通过抑制TYR活性抑制A375细胞与Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用白芨治疗黄褐斑提供了实验依据.     

百合主要有效成分对小鼠B-16细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察百合多糖与百合皂苷对小鼠B-16细胞中细胞活力、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。方法 选用同一传代小鼠B-16细胞并随机分为空白细胞组、空白对照组、熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组,共5组。空白细胞组加入180μL RPMI1640培养液;空白对照组加入180μL RPMI1640培养液和20μL高密度聚乙烯;熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组分别加入不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL）的熊果苷、百合多糖、百合皂苷,作用3 d后,用CCK-8法检测B-16细胞活力,用酪氨酸酶-多巴速率氧化法检测B-16细胞中酪氨酸酶的活性,以MTT法检测小鼠B-16细胞的黑色素含量。结果 与空白细胞组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高（P<0.01）,0.4、0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低（P<0.05,P<0.01）;各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低（P<0.01）,0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较,0.8...     

α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响。方法：从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞，用α-MSH处理纯培养的人表皮黑素细胞，用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移，激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca^2 ]i。结果：α-MSH可诱导黑素细胞迁移，并使[Ca^2 ]i浓度升高。结论：α-MSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca^2 浓度升高，从而促进黑素细胞的迁移。     

甲氧滴滴涕对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素-1表达的影响

目的：探讨甲氧滴滴涕（MXC）对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素。1表达的影响。方法：成年雌性小鼠经口染毒MXC,随机分为50,100,200mg／（kg·d）3个染毒组和溶剂芝麻油组（对照组）。采用免疫组织化学及电子计算机图像分析技术,检测染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的表达情况。结果：MXC染毒组与正常内膜相比,ANGPT-1呈高表达状态,差异有显著性（P〈0.01）。MXC50,100,200mg／（kg·d）组内膜与正常内膜均随月经周期呈周期性改变,MXC100,200mg／（kg·d）组内膜ANGPT-1在增殖期的表达强度高于分泌期,与正常内膜相比,差异有显著性（P〈0.01）;而MXC50mg／（kg·d）组内膜与正常内膜相比,ANGPT-1在增殖期的表达强度无差异（P〉0.05）。结论：MXC染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的高表达可能在子宫内膜疾病的发生、发展中起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞黏附和迁移的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和α-黑索细胞刺激素（α-MSH）对黑素细胞黏附、迁移的影响。方法：从正常人包皮分离、纯培养黑素细胞，分别用bFGF和α-MSH处理培养黑素细胞；采用纤维连接素包裹的培养板观测黑素细胞黏附，用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移。结果：bFGF和α-MSH均可促进黑素细胞黏附于培养板，bFGF可诱导黑素细胞迁移并呈剂量依赖性（P〈0．05），α-MSH对黑素细胞迁移无明显影响（P〉0．05）。结论：bFGF和α-MSH可以诱导黑素细胞的黏附和／或迁移，参与白癜风的恢复。     

肿瘤坏死因子-α对人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度肿瘤坏死因子α对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定不同浓度肿瘤坏死因子-α对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果肿瘤坏死因子α对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论肿瘤坏死因子-α对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用肿瘤坏死因子α治疗色素性疾病提供了实验依据。     

新型α-黑素细胞刺激素类似物对内毒素休克小鼠的保护作用

内毒索休克是临床上常见的危重病症，死亡率高达30％～60％。常并发于感染、创伤、烧伤、放射损伤、失血性休克以及大手术。当革兰阴性菌胞壁的脂多糖（LPS）入血后。引起一系列的炎症级联反应。抗生素和糖皮质激素的应用有助于控制内毒素休克的发生，但抗生素对于众多炎症介质的作用无能为力，而糖皮质激素的副作用已是显而易见的。近年来相继研制的一些针对内毒素或某一种炎症介质的制剂或措施，如抗内毒素核心糖脂的抗体、抗CD14／脂多糖结合蛋白（LBP）的抗体、抗肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的抗体、白介素-1（IL-1）受体拮抗剂、一氧化氮（NO）合酶抑制剂等。     

甲氧滴滴涕对小鼠骨质疏松的影响

目的：探讨甲氧滴滴涕（MXC）对小鼠骨质疏松的影响.方法：将40只昆明小鼠随机分为50,100,200mg/（kg.d）组及溶剂芝麻油组（对照组）,连续14d给予灌胃染毒MXC,末次给予MXC24h内处死小鼠,取肝、脾、胸腺称质量,取左侧股骨进行骨组织形态学观察,并取右侧股骨进行骨干质量、骨钙及骨羟脯氨酸（B-HOP）的测定和比较.结果：不同剂量MXC分别致小鼠骨干质量减少,骨横短径减少,骨钙及骨羟脯氨酸含量减少和胸腺萎缩.结论：MXC可引起小鼠以骨量丢失为主的骨质疏松.     

α-黑素细胞刺激素处理的树突状细胞对小鼠心脏移植物存活时间的影响

目的:观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)处理的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)预防同种异基因小鼠心脏移植排斥反应的效果.方法:在供者BALB/c小鼠DC培养的过程中加入α-MSH,用流式细胞仪分析DC的表型变化,用ELISA方法检测培养上清中IL-12的分泌水平.在同种异基因心脏移植前,分别将α-MSH处理后7 d的 DC(α-MSH-DC)和正常培养7 d的 DC(Day7-DC)输至受者C57BL/6小鼠体内,并另设输入PBS的小鼠为对照组,通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化.结果:α-MSH-DC表面分子的表达明显低于Day7-DC.α-MSH-DC培养上清中分泌IL-12 [(95.2±6.3) pg/ml]的水平也明显低于Day7-DC[(197.1±10.2) pg/ml].与PBS组[(7.17±0.26) d]相比,Day7-DC组[(6.25±0.61) d]的心脏移植物存活时间缩短;而α-MSH-DC组[(15.08±1.32) d]的心脏移植物存活时间明显延长.与Day7-DC和PBS组相比,α-MSH-DC组移植后血清IL-2和IFN-γ细胞因子水平明显降低.结论:α-MSH可以抑制体外培养的DC表面分子的表达和IL-12的分泌;α-MSH处理的DC在体内能延长同种异基因心脏移植物的存活时间.     

6种中药组方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖和黑素生成的影响

目的研究6种中药组方水提物、醇提物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响。方法以MTT法测定各组方对B16细胞的增殖活性;NaOH裂解法测定各组方对B16细胞的黑素生成量。结果组方1、2、3水提物和组方2、4、6醇提物具有明显促细胞增殖作用（P〉0．05）;水提物中细胞增殖率最高的为组方2（0．625mg／ml）,增殖率为22．60％;醇提物中细胞增殖率最高的为组方4（0．078mg／ml）,增殖率为11．60％。组方1、2、4、5、6水提物和6种组方醇提物均具有促进黑色素生成的作用（P〈0．05）。水提物中黑素增率最高的为组方1（0.313mg／ml）,增率为75．38％;醇提物中黑素生成增率最高的为组方1（1．25mg／ml）,增率为88．01％。结论各组方对鼠黑素瘤B16细胞增殖及黑素生成均有一定的促进作用,但其作用强度与组方的组成密切相关。     

中药对黑素生物合成影响研究I.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２ 味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影 响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性 抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体 化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。进－步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用 价值是必要的。     

α-促黑素细胞激素对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的：研究α-促黑素细胞激素(α-MSH)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF—β1)的影响，为研究瘢痕疙瘩的病因提供新的依据。方法：取人的瘢痕疙瘩组织，利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，加入10^-6mmol／L浓度的α-MSH，应用ELISA方法检测其水平，分析α-MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌TGF-β1的影响。结果：10^-6mmol／L浓度的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌。结论：一定剂量的α-MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌具有促进作用。     

透皮吸收促进剂对甲氧沙林脂质体凝胶体外透皮作用的影响

目的考察透皮吸收促进剂对甲氧沙林脂质体(LMOP)凝胶体外透皮作用的影响。方法分别制备无透皮促进剂的LMOP凝胶及以1%(ω)氮酮和1%(ω)丙二醇为透皮吸收促进剂的LMOP凝胶。采用Franz扩散池,以离体小鼠皮肤为透皮屏障,用高效液相色谱法测定体外接受液中甲氧沙林(8-MOP)的含量,计算其累积透皮释药量(Q),并将数据进行释放动力学模型拟合。结果样品凝胶体外释药符合H iguchi方程,不含透皮吸收促进剂的LMOP凝胶:Q=79.65t1/2 27.99;含透皮吸收促进剂的LMOP凝胶:Q=117.39t1/2 34.37,显示后者的渗透作用更好。结论以1%(ω)氮酮和1%(ω)丙二醇为透皮吸收促进剂的脂质体凝胶的透皮渗透效果更佳。     

甲氧滴滴涕对小鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法测定卵巢颗粒细胞在MXC作用后的细胞活力(A值);流式细胞技术检测细胞凋亡变化;电镜观察细胞的形态学改变等;综合评价MXC对卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果:1MTT法测得MXC在(2.5~10.0)μg/ml浓度范围内能明显抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并具有浓度依赖性,10.0μg/mlMXC作用36h的卵巢颗粒细胞A值最低;2流式细胞仪检测结果显示5.0,10.0μg/mlMXC处理组卵巢颗粒细胞的凋亡率分别为27.8%和41.7%,明显高于对照组的9.9%(P<0.05);3电镜下可见卵巢颗粒细胞呈典型凋亡样改变。结论:MXC能明显抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖,并具有显著促进颗粒细胞凋亡的作用。