多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法对2008年分离的46株肺炎克雷伯菌〔(30株分离自零售食品(凉拌菜),16株分离自医务人员鼻腔拭子)〕采用K-B法进行药敏试验,检测多药耐药菌是否产ESBLs,PCR法扩增多药耐药菌环丙沙星耐药相关基因gyrA,ESBLs基因bla-TEM、blaSHV和blaCTX-M,3类整合酶基因(intⅠ1,intⅠ2,intⅠ3)及第1类整合子可变序列;对PCR产物进行测序分析,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对多药耐药菌进行分子分型。结果 9株菌为多药耐药菌,3株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Ile,1株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Thr,8株菌产ESBLs,6株菌携带SHV型ESBL,其中3株菌同时携带TEM型ESBL;2株菌携带OKP型ESBLs;未检测到CTX-M型ESBLs,1株菌intⅠ1基因阳性,携带有第1类整合子和耐药基因盒aacA7,PFGE将9株菌分为8个PFGE型,2株菌为同一个PFGE型。结论耐药基因的获得如gyrA基因突变和携带ESBLs基因是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的主要机制。     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

整合子介导儿童产ESBLs沙门菌耐药性的初步研究

目的研究儿童沙门菌整合子分布及其与产β-内酰胺酶细菌耐药性的关系。方法采用MIC法或纸片扩散法进行沙门菌药敏培养及表型鉴定;PCR方法检测沙门菌整合子和ESBLs耐药基因。结果 80株沙门菌检测出ESBLs耐药表型阳性率为21.3%(17/80)。ESBLs耐药基因阳性率为17.5%(14/80),其中CTX-M、TEM、CTX-M/TEM耐药基因阳性株分别为6株、6株和2株,未检测到SHV耐药基因。80株沙门菌检测出整合子阳性率为11.3%(9/80),其中8株为Ⅰ类整合子,1株为Ⅱ类整合子,未检出Ⅲ类整合子。1株Ⅰ类整合子阳性株表现对全部β-内酰胺类抗生素敏感,其余为对氨苄西林和/或氨苄西林/舒巴坦和/或头孢噻肟耐药。结论杭州地区腹泻患儿沙门菌对β-内酰胺抗生素耐药主要是CTX-M型ESBLs耐药基因;整合子在腹泻患儿产ESBLs沙门菌中的分布明显低于非产ESBLs菌株,与ESBLs耐药表型及ESBLs耐药基因之间无明显关系,且与β-内酰胺抗生素耐药性无明显关系。     

整合子及其相关基因盒在临床产ESBLs肺炎克雷伯菌的分布

目的检测Ⅰ~Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用K-B纸片扩散法对108株产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)分析108株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的Ⅰ~Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果108株菌中有58株(53.70%)含有Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类整合子及Ⅲ类整合子阳性菌;在Ⅰ类整合子阳性菌中,有52株携带Ⅰ类整合子相关基因盒,占89.66%;分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

大肠埃希菌耐药性及耐药基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）与非产ESBLs大肠埃希菌（ECO）的耐药性及耐药基因携带情况,并阐明产ESBLs ECO基因型分布。方法K-B法检测54株ECO对22种抗菌药物的敏感性,PCR方法扩增ESBLs基因、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药基因。结果54株ECO对阿米卡星、奈替米星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、氨曲南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南敏感性达70.0%～100.0%;对喹诺酮类、庆大霉素、哌拉西林敏感性〈27.8%;27株产ESBLs ECO中,CTX-M-1型9株、SHV型5株、TEM型16株、OXA-1型8株、6株未检测出ESBLs基因型、10株有≥2种ESBLs基因型;54株ECO中耐氨基糖苷类抗菌药物44株,aac（3）-Ⅰ4株、aac（3）-Ⅱ38株、aac（6′）-Ⅰ17株、aac（6′）-Ⅱ11株、ant（2″）-Ⅰ8株及ant（3″）-Ⅰ12株;54株ECO中耐喹诺酮类抗菌药物41株,qnr基因检出率为7.3%。结论碳青酶烯类为治疗ESBLs阳性ECO的首选药物;除氨基糖苷类抗菌药物和呋喃妥因外,产ESBLs组耐药性明显高于非产ESBLs组;产ESBLsECO中TEM型为最常见的ESBLs型别;氨基糖苷类抗菌药物耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6）-Ⅰ为主;ECO对喹诺酮耐药率较高,且检测到qnr基因。     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

老年患者感染大肠埃希菌分离株整合子、转座子遗传标记研究

目的 了解老年患者感染大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记,转座子遗传标记(merA、tnpA基因)携带情况.方法 采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测int Ⅰ 1基因,转座子merA基因和tnpA基因,扩增产物纯化后基因测序.结果 大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,int Ⅰ 1基因的阳性16株(80%),merA基因2株(10%),tnpA基因均阴性.结论 大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子和转座子系统密切相关,携带Tn21/Tn501转座子的大肠埃希菌为国内首次报道.     

云南安宁地区大肠埃希氏菌的耐药特征及流行趋势

目的了解云南安宁地区大肠埃希菌的耐药特征及流行趋势,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法收集云南昆钢医院2018年6月至2019年6月临床分离大肠埃希菌376株,采用双纸片法筛选产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,采用K-B法检测菌株对抗菌药物敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测ESBLs菌株基因型以及整合子3’、5’保守区的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。结果大肠埃希菌产ESBLs菌株检出率为53.19%(200/376);产ESBLs大肠埃希菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率低,敏感性较高,对阿米卡星、哌拉西林的耐药率分别为7.50%、12.50%,有较好抗菌活性,对其余抗菌药物的耐药率较高;产ESBLs大肠埃希菌中携带CTX-M基因占74.00%(148/200),携带TEM基因占34.50%(69/200),携带SHV基因占1.00%(2/200)株,同时携带CTX-M与TEM基因占9.00%(18/200),同时携带CTX-M与SHV基因占0.50%(1/200);整合子检出率占37.00%(74/200),均为Ⅰ类整合子。结论云南安宁地区产ESBLs大肠埃希菌流行率较高,产ESBLs大肠埃希菌呈多重耐药趋势,基因型以CTX-M型为主,携带整合子为Ⅰ类。     

ICU血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶基因分型及与整合子之间的关系

目的对医院ICU住院患者血液中分离的大肠埃希菌进行检测及药敏分析,同时测定ESBLs型别及整合子,为指导和治疗大肠埃希菌引起的败血症感染提供依据。方法收集医院2007年5月-2010年5月ICU患者血液中分离的142株大肠埃希菌,采用VITEK-2Compact全自动微生物鉴定仪对菌株进行鉴定及药敏试验,采用WHONET 5.4软件进行药敏结果分析,PCR法检测ESBLs基因型别及其整合子携带率,比较分析各种基因型比率特征和差异。结果 142株大肠埃希菌中ESBLs阳性菌占58.45%,ESBLs阳性菌株中CTX-M基因检出比例最大,检出率为50.6%,其中CTX-M-1基因22株阳性,CTX-M-8基因15株阳性,CTX-M-9基因10株阳性;TEM基因和SHV基因检出率其次,分别占22.7%与16.9%;有8株产≥2种ESBLs,有10株未能确定ES-BLs基因型;83株大肠埃希菌中检出49株携带有intl1基因,携带率达59.03%,未检测到intⅠ2和intⅠ3基因。结论 ICU患者血液中分离的大肠埃希菌产ESBLs率比例高,基因型以CTX-M型为主,携带多种ESBLs基因的菌株也逐渐增多,多伴随携带intⅠ1基因。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌检测及其药敏结果分析

目的了解某院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的检出及耐药情况。方法采用微生物生化、药敏试验卡,超广谱β-内酰胺酶试验卡及纸片扩散法对32例大肠埃希菌标本进行ESBLs检测,并对其药敏试验结果进行分析。结果从32株大肠埃希菌中经过确认试验,共检出产ESBLs大肠埃希菌8株,检出率为25.0%。药敏试验耐药率高,敏感性较高的只有美洛培南、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物。结论产ESBLs的大肠埃希菌检出率较高,对大多数抗菌药物呈现多重耐药,需引起临床的高度重视。     

产ESBLs大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的 调查临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的检出率及耐药性.方法 药敏试验采用纸片扩散法;酶抑制剂增强试验检测大肠埃希菌中的超广谱β-内酰胺酶.结果 产超广谱β-内酰胺酶菌株对临床常用抗菌药物的耐药率远高于非产酶菌株;产ESBLs菌株对哌拉西林、头孢呋辛和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均＞88.0％;而非产ESBLs菌株对哌拉西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和头孢呋辛的耐药率分别为68.0％、70.0％、22.0％;对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦和头孢西丁有较高的敏感率(＞73.1％),而非产ESBLs菌株对上述3种抗菌药物的敏感率均＞84.0％;大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶菌株的检出率为34.2％;产酶菌株对大多数临床常用的抗菌药物表现为耐药,包括β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物.结论 产超广谱β-内酰胺酶菌株在临床分离的大肠埃希菌中已较为普遍,且产酶菌株多为多药耐药菌株,临床应重视此类菌株的出现,加强对产超广谱β-内酰胺酶菌株的检测.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用美国德灵Microscan WalkAway40 S1自动微生物分析仪(W/A40)及专用NC21鉴定药敏复合板检测产超广谱β-内酰胺酶和药敏试验。结果 341株菌中共检测出ESBLs细菌150株,检出率43.99%,其中大肠埃希菌118株,检出率49.79%,肺炎克雷伯菌32株,检出率30.77%,产ESBLs菌株对大部分抗菌药物耐药,对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢西丁耐药性较低。结论及时监测产ESBLs菌的发生率及其耐药趋势,指导临床合理用药,亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢西丁是目前治疗产ESBLs菌感染的有效抗菌药物。     

Typing of extended-spectrum beta-lactamase-producing Salmonella typhimurium strains isolated in a pediatric unit

Extended-spectrum b-lactamases (ESBLs) derive mainly from TEM and SHV b-lactamases. These enzymes confer resistance to all oxyimino cephalosporins and monobactams except cephamycins and carbapems. ESBLs are often encoded by large plasmids that carry resistance determinants to multiple antibiotics and spread among the members of the Enterobacteriaceae. Since the first outbreak of Klebsiella pneumoniae expressing an extended-spectrum beta-lactamase reported in 1984, nosocomial infections due to Enterobacteriaceae species which produce ESBLs have been generally recovered from patients hospitalized in intensive care units. The most frequently isolated ESBL-producing strains belong to the genus Klebsiella, Escherichia, Enterobacter and Proteus; ESBLs are rarely associated with the genus Salmonella. The first Salmonella were detected in France in 1984 (Salmonella typhimurium), in Tunisia in 1988 (Salmonella wien) and in Argentina in 1991 (Salmonella typhimurium). In 1994, 10 isolates of Salmonella typhimurium expressing an extended-spectrum beta-lactamase were isolated for the first time from 10 children hospitalized in a pediatric unit of the hospital Ibn-Rochd, Casablanca. Previous study showed that all isolates belonged the same serotype, and biotype, and showed a resistance to oxyimino beta-lactams, gentamycin, tobramycin and trimethoprim-sulfamethoxazole but remained susceptible to tetracycline, chloramphenicol and quinolones. Oxyimino beta-lactams resistance determinant of all strains of Salmonella typhimurium was transferred by conjugation to Escherichia coli; Resistance to gentamycin and trimethoprim-sulfamethoxazole was also cotransferred. In this study, we characterized the relationship between all isolates by comparing plasmid profiles and patterns of proteins because there appear to be the more effective method for evaluating epidemiologic relationship between Salmonella species, and the protein profiles method has been used for many bacterial species. These two methods have the advantages of speed and simplicity. All isolates presented the same plasmid pattern characterised by three plasmids and the same pattern of proteins composed of 36 bands. We concluded by combining results that this outbreak involved the spread of the same strain of Salmonella typhimurium between the ten children. As this type of resistance is easily transferred by these isolates to other bacterial species, the major risk would be its transfer to Salmonella typhi.     

鸡来源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌携带整合子基因的研究

目的 分析鸡肠道内共生的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌整合子携带状况以及其与多重耐药性的关系.方法 从甘肃、湖北、北京、四川地区养殖场鸡粪便标本中分离的大肠埃希菌,肉汤稀释法检测菌株的耐药性,WHONET软件进行耐药性分析;筛选出的ESBLs菌株进行整合子的PCR检测和基因测序. 结果 通过药敏试验从鸡粪中分离的224株大肠埃希菌中共检出产ESBLs的菌株54株,分离率为24.1%.产ESBLs的菌株中I类整合子的携带率为63.0%,I类整合子可变区发现的耐药基因有addA1、aadA2、aadA5、aadA22,dfrA12、dfrA17、dfrI,aar-3,分别介导氨基糖苷类、磺胺类抗生素以及利福平的耐药性.aadA22是在国内菌株中首次报道.Ⅱ类整合子携带率为5.6%,携带的耐药基因包括sat、ereA、aadA1.Ⅲ类整合子酶阳性的有3株菌,但其可变区未检出任何耐药基因. 结论 I类整合子主要介导氨基精苷类抗生素和甲氧嘧啶的耐药性,在大肠埃希菌ESBLs菌株的多重耐药性中具有重要的作用,加强养殖动物大肠埃希菌耐药性以及整合子携带状况的监测,对防止耐药菌株的广泛传播,改善临床抗生素的疗效具有重要意义.     

某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因检测及分型

目的了解某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）基因型。方法采用表型确证试验测定并收集该院产ESBLs大肠埃希菌（40株）和肺炎克雷伯菌（20株）,提取质粒DNA。采用特异性引物扩增TEM、SHV和 CTX M系列基因,测序后进行序列分析。结果60株表型确证试验阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,聚合酶链反应（PCR）扩增均阳性,包括TEM、SHV、CTX M 3组和CTX M 9组4种基因型。大肠埃希菌中上述4种基因型阳性率分别为37.50%（15株）、2.50%（1株）、62.50%（25株）、50.00%（20株）;肺炎克雷伯菌上述4种基因型阳性率分别为40.00%（8株）、90.00%（18株）、65.00%（13株）、40.00%（8株）。100.00%的大肠埃希菌和80.00%的肺炎克雷伯菌产生blaCTX M,12.50%(5/40)的大肠埃希菌和25.00%(5/20)的肺炎克雷伯菌携带2种CTX M酶基因。23例TEM基因皆为TEM 1型;19例SHV型基因包括SHV 1型6株、SHV 11型6株、SHV 12型5株及SHV 25型2株,仅SHV 12为ESBLs基因,且均来源于肺炎克雷伯菌;66例CTX M型基因,其中CTX M 14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45.00%和35.00%,CTX M 55检出率均为35.00%,CTX M 15检出率分别为20.00%和15.00%,检出少量CTX M 3、CTX M 65、CTX M 101及CTX M 123基因型。结论该院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX M 为主,其次为SHV 12。CTX M基因型中以CTX M 14最为常见,CTX M 101及CTX M 123型ESBLs为山东省首次检出。     

大肠埃希菌的耐药特点与产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的 探讨大肠埃希菌的耐药特点和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型分布.方法 对2009年1月-2010年12月临床分离的231株大肠埃希菌进行耐药性统计和ESBLs基因分析.结果 尿液、痰液为最主要标本来源,占43.29％、22.08％;大肠埃希菌对氨苄西林(耐药率85.28％)等多数β-内酰胺类、环丙沙星(75.76％)等氟喹诺酮类、庆大霉素(52.38％)等氨基糖苷类耐药率较高,对美罗培南(4.33％)等碳青霉烯类、头孢哌酮/他唑巴坦(6.93％)等含他唑巴坦β-内酰胺类抗菌药物耐药率低;CTX-M型、TEM型、SHV型耐药基因均可见,CTX-M型多见,可见复合基因.结论 大肠埃希菌耐药率高,应根据药敏及耐药基因合理使用抗菌药物.     

158例腹腔感染患者致病菌谱及耐药性分析

目的：研究腹腔感染患者致病菌感染谱和耐药性的变化,方法：用纸睛扩散法对由腹腔感染患者分离的细菌进行药敏试验,并按NCCLS标准判断细菌耐药性。结果：1994年以来自腹腔感染患者分离致病菌184株,肠球菌的构成增高显著,并具有多重耐药物 ,产超广谱β－内酰胺酶（ESBLs),大肠埃希菌和克雷伯菌属的出现;1994年以来大部分临床分离菌对过去常用抗菌药物的耐药性上升明显。结论：细菌对常用的抗菌药物产生了程度不等的耐药性,在临床使用抗菌药物应特别注意耐药现象,并及时掌握细菌对抗菌药物耐药的最新动态,程度不等的耐药性,在临床使用抗菌物时应特别注意耐药现象,并及时掌握细菌对抗菌药物耐药的最新动态。     

大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶的危险因素研究

目的探索大肠埃希菌(E.coli)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的危险因素,为制定预防控制策略提供科学依据。方法采用抑制剂增强双纸片扩散法检测ESBLs,以桂林某医院微生物实验室首次分离产ESBLs E.coli的病例为病例组,非产ESBLs E.coli的病例为对照组,采用logistic回归分析进行研究。结果213例病例分离出E.coli ESBLs 111例,ESBLs总体阳性率为52.11%,外科阳性率为61.36%,高于内科45.60%。医院感染、住院时间≥7d、联用抗生素、三代头孢菌素、氟喹诺酮类抗菌药物和β-内酰胺酶抑制剂复合抗生素使用是E.coli产ESBLs的危险因素,其中住院时间≥7d、三代头孢菌素和联用抗生素是独立危险因素。结论住院病人E.coli的ESBLs阳性率高,产ESBLs危险因素复杂多样,应该采取综合措施来预防和控制产ESBLs菌株的流行。