动物微生态制剂研究应用进展

动物微生态制剂是在动物微生态理论指导下,采用已知有益的微生物所制成的生物制品或活菌制剂。综述了动物微生态制剂的产生起源、益生菌和微生态制剂的概念、微生态制剂所用菌株、作用机制、国内外应用现状及发展前景。     

奶牛源乳酸菌的分离、鉴定及其微生态制剂的研究

为筛选出能用于防治奶牛子宫内膜炎的益生性乳酸菌菌株并以其为原材料制作微生态制剂,采集产后30～50 d健康奶牛的子宫颈口处分泌物,利用MRS选择性培养基厌氧培养方式进行乳酸菌初步筛选。纯化得到的单株菌株进行染色和镜检,将典型的乳酸菌进行生化鉴定。提取其DNA,扩增16S rDNA全序列并测序,将所得序列与NCBI核酸数据库进行同源性比对,明确各分离菌株种属归属。将鉴定得到的单株乳酸菌过滤以及离心获取上清,得到的上清进行抑菌实验。采用琼脂扩散法检测对大肠埃希菌的抑菌活性。以得到的良好抑菌能力的菌株为原材料进行混合抑菌,进行微生态制剂最优比例的探究,并研究这些菌株的生长曲线和产酸能力。结果显示,经染色镜检、生化鉴定和16S rDNA测序分析和单株抑菌实验得到6株较好的抑菌能力的乳酸菌,其中鼠李糖乳杆菌、魏斯式细菌和粪肠球菌的混合上清抑菌效果最好,具有较强的生长和产酸能力。研究得到了可用于防治奶牛子宫内膜炎益生菌株,可进一步用于临床试验探究。     

神农架川金丝猴源肠道粪肠球菌的分离与鉴定

通过培养特征、形态观察、抑菌性实验,从神农架健康野生金丝猴肠道分离到8株抑菌效果明显的菌株;生理生化鉴定和16S rRNA基因序列同源性分析,该8株菌为粪肠球菌。毒力因子检测和动物急性毒性实验筛选出2株安全性良好的菌株,研究两菌株对胃肠道环境（低pH值、高胆盐）的耐受特性和生长情况。结果表明,粪肠球菌dlt7a和dlt7b株繁殖能力很强,无迟缓期,具有较强的耐受胃酸及肠道高胆盐环境的能力,且安全性好,具有较好的益生特性,可作为金丝猴微生态制剂的候选菌株。     

国外微生态制剂的研究与市场概况

对国外微生态制剂的研究和市场概况作了介绍。包括：（1）关于肠道菌群研究的新手段;（2）国外使用的益生菌和益生菌剂市场;（3）益生菌的作用;（4）益生菌安全性的问题;（5）关于活菌和死菌问题;（6）关于益生元;（7）免疫增强因子。     

微生态学及微生态制剂

微生态学(Microecology)是一门新兴的边缘学科。1977年联邦德国VOLKER RUSCH首先明确提出这门学科的定义,并在德国建立起第一个微生态学研究所。该所的主要工作是关于活菌制剂(生理性细菌治疗),如大肠埃希菌、双歧杆菌、乳酸菌等,总的来说是研究生态疗法和生态调整。1985年VOLKER RUSCH提出一个新的定义:“微生态学是细胞水平或分子水平的生态学,是研究人类、动物、植物正常微生物群与其宿主相互关系的生命科学分支”,也可以认为是研究微生物结构和功能,及其和宿主相互依赖、相互制约的科学技术。有研究估计,人体携带正常微生物群…     

微生态制剂与反刍动物甲烷减排

反刍动物瘤胃中产甲烷菌可以利用氢气、甲醇和甲胺等物质生成甲烷,不仅造成饲料能量的浪费,同时甲烷作为一种主要的温室气体也对环境构成了严重的威胁。因此,众多学者都在寻找降低反刍动物甲烷排放的方法,其中有学者提出在饲粮中添加适量可直接饲喂的微生物(Direct-fed microbes,DFM)是一种很有潜力的方法,但目前还处于初步探索阶段。本文综述了几种重要的DFM,并介绍了其作用机制及应用效果。     

微生态制剂在肠内营养治疗的研究进展与应用

临床营养支持是以治疗或缓解疾病、增强治疗效果为目的,根据营养学原理采取的营养措施,主要可以分为肠外营养( Parenteral Nutrition,PN)和肠内营养(Enteral Nutrition,EN).今年来,随着医学研究与认识的加深,肠道的重要性越来越被人们所认识到.美国WILMORE曾提出肠道是外科应激反应的"中心脏器"学说[1].因此与肠外营养相比,肠内营养显得越发重要.人体肠道是一个巨大而复杂的微生态系统,其各种菌群之间的平衡对于人体的健康和疾病恢复有着重要的意义.微生态制剂( Microecologics)又称为微生态调节剂(Microecological).是根据微生态学基本原理,利用人体正常菌群成员或对其有促进作用的其他微生物等物质制成的生物制品.它具有调整微生态失调、恢复微生态平衡、促进宿主健康的作用.因此将微生态制剂应用于肠内营养有着明显的优势,同时也是目前临床营养支持的发展趋势.     

2株动物微生态制剂菌的分离鉴定及其生物学特性初步研究

目的从饲料中进行微生物的分离与培养,筛选动物微生态制剂候选菌株。方法利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)筛选得到的7株微生物区分为2种菌,经测序确定其为热带假丝酵母和植物乳杆菌;检测了不同pH、温度、胆盐、金属铜和需/厌氧对其生长的影响。结果当pH小于2.5或铜离子高于150 ppm时,植物乳杆菌无法生长,而热带假丝酵母数量略有下降;胆盐和金属离子对2种菌影响较小,42℃培养条件下相对于30℃培养时热带假丝酵母数量下降了6个数量级。结论筛选得到的2株菌具有应用于动物微生态制剂的潜力,为动物微生态制剂候选菌筛选和评价提供了基础数据。     

微生态制剂预防儿科ICU抗生素相关性腹泻的临床观察

目的 探讨在儿科ICU住院患儿中应用微生态制剂预防抗生素相关性腹泻的效果。方法 对符合研究的580例入住PICU的患儿,随机分为预防组和对照组,预防组在常规治疗基础上加用微生态制剂（金双歧）常规剂量口服或经鼻饲管给药直至出院,观察2组之间发生抗生素相关性腹泻的差异显著性。结果 580例分为预防组286例,对照组294例,腹泻预防组的发生率为5.24%,对照组的发生率为12.93%,预防组的发生率较对照组低（P＜0.05）。结论 儿科ICU住院患儿常规加用微生态制剂可以很好地预防抗生素相关性腹泻。其机制认为与微生态制剂具有保持肠道微生态平衡、提高局部和全身的免疫功能有关。     

畜禽中药-益生菌复合微生态制剂的研究进展

畜禽中药-益生菌复合微生态制剂是指采用现代发酵技术将益生菌与中药联合发酵,发挥两者的协同作用,以提高畜禽免疫功能、保护畜禽健康的一种新型动物微生态制剂。文中通过调研近几年关于益生菌及中药微生态制剂等方面的文献,综述了畜禽中药-益生菌复合微生态制剂的产生背景及菌种特点,并重点阐述了畜禽中药-益生菌复合微生态制剂的作用机制、在畜禽养殖中的应用及存在问题与建议,以期为畜禽中药-益生菌复合微生态制剂的深入研究提供参考和依据。     

毛竹受密竹链蚧危害导致其生理生化指标影响的研究

通过比较毛竹林受密竹链蚧不同程度危害后叶片中叶绿素、总糖、还原糖、蛋白质含量及含水量的差异,结果表明,毛竹受密竹链蚧危害后毛竹叶片生理生化指标与正常叶片存在显差异。     

西伯利亚鲟(Acipenser baerii)致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

摘要：【目的】本研究旨在寻找引起养殖西伯利亚鲟鱼(Acipenser baerii)病害的致病因子。【方法】从北京地区自然患病的西伯利亚鲟鱼体内分离到致病菌株X-1-06909,采用生理生化鉴定结合16S rRNA基因序列的系统发育学分析确定该菌株的系统发育地位。同时采用琼脂扩散法对抗菌类药物的敏感性进行测定。【结果】菌株X-1-06909与Aeromonas veronii ATCC 35624T的16S rRNA基因序列相似性达99.6％;结合形态特征与生理生化测定结果,革兰氏阴性杆菌,具极生单鞭毛     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。     

锦鲤中吉氏库特菌的分离与鉴定

对从患病锦鲤(Cyprinus carpio L.)肝组织中分离的1株纯培养菌(HC050630C-1)进行了形态特征、主要理化特性、对健康鲤鱼的致病作用、药物敏感性等方面的检验;同时测定了该株菌的16S rRNA基因序列,构建了系统发育树。结果表明,被检菌为吉氏库特菌(Kurthia gibsonll),对健康鲤鱼未显示明显的致病作用;所测菌株的16S rRNA基因序列长度1459bp,在GenBank中登录号为EF611423;该菌株16SrRNA基因序列与GenBank数据库中吉氏库特菌的16S rRNA基因序列同源性在99%;药敏试验结果显示,对供试的氨苄青霉素等27种药物呈现高度敏感或敏感,对头孢吡肟等6种呈低度敏感,对苯唑青霉素等4种耐药。     

禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定

本研究从曾见典型禽骨髓性白血病(Myeloid Leukosis,ML)病例的内蒙古某肉种鸡场随机选取的淘汰肉种鸡中,分离出一株J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus Subgroup J.ALV-J)。利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,J亚群禽白血病病毒内蒙株可以被两对ALV—J特异性引物扩增(特异条带约2．2kb和545bp);且在特异性单抗的间接免疫荧光检测中呈现强阳性荧光反应。此外,对山东一例肉种鸡骨髓性白血病病例亦进行了J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定。2．2kb PCR扩增物的测序结果表明,两株分离病毒的同源性为96．9％,与已分离的SD9901和YZ9901株ALV-J同源性达94．2％～95.4％。     

DFM菌株生理特性的测试以及摇床发酵条件的优化

以研究适合工业化生产的直接饲用微生物 (DirectFeedMicrobials,DFM )为目的 ,通过对 5株细菌的生理特性的测定结果 ,显示出这几株菌具有良好的性状 ,有助于改善目前饲料添加剂领域存在的问题。实验还对菌种的摇床发酵条件进行了正交优化 ,证明了 3株菌可以利用廉价的培养基实现高密度发酵[1] 。另外菌株利用玉米秸秆和麦秸秆的实验为进一步降低发酵的成本开辟了方向。     

中华鳖致病病原菌的分离及药物试验研究

嗜水气单胞菌为该病的条件致病菌。在适宜的条件下 ,该菌可通过体表伤口进入鳖体引起疾病。此病以体表腐皮与赤斑 ,有的中华鳖背部有明显的乳白色小点和出血性败血症为主要病理学表现 ,以各器官功能衰竭为致病原因。解剖后 ,肝脏病变呈污泥色 ,腐烂液化 ,肾呈青紫色、肿大 ,肠内无食物 ,呈灰白色 ,部分肠壁有出血点 ,脾脏明显肿大。经分离鉴定 ,生理生化特性分析 ,结果为典型的嗜水气单胞菌嗜水亚种 (Aeromonashydrophilasubsp .hydrophila)。     

三带喙库蚊体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

【目的】调查猪场蚊虫是否能携带猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒。【方法】采集发生PRRS疫情的3个养猪场蚊虫样本,采用RT-PCR方法检测PRRS病毒核酸,取阳性蚊虫样本接种Marc-145细胞进行病毒的分离培养,以间接免疫荧光抗体技术和分子克隆技术进行病毒的鉴定。【结果】 养猪场内的蚊虫主要有三带喙库蚊Culex tritaeniorhychus、凶小库蚊Culex modestus、中华按蚊Anopheles sinensis和骚扰阿蚊Armigeres obturbans,其中三带喙库蚊占86.76%;以PRRS病毒N基因引物进行扩增,三带喙库蚊样本呈现阳性反应,而其他蚊种均为阴性。在蚊虫接种的Marc-145细胞中可见细胞融合和空泡形成等细胞病变效应;用抗PRRS病毒N蛋白抗体和羊抗猪IgG(H+L)-FITC进行间接免疫荧光染色,感染细胞呈现黄绿色荧光;以NSP2基因引物进行RT-PCR扩增、克隆与测序,发现库蚊源病毒与相应猪场猪源病毒中相应基因的序列具有较高同源性。【结论】 三带喙库蚊为猪舍优势蚊种,并能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒。