镍铬合金的细胞毒性及对L929细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的 研究镍铬合金金属离子与L929细胞凋亡的关系,探讨在分子水平上评价材料生物相容性的方法. 方法 应用镍铬合金的浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,以含10％胎牛血清的RPMI1640培养液做为阴性对照,采用MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)评价镍铬合金的细胞毒性,采用免疫组化法检测其对L929细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响. 结果 镍铬合金的细胞毒性为0级;镍铬合金组Bax表达增高(t=2.841,P＜0.05);镍铬合金组Bax/Bcl-2表达的比值高于阴性对照组(t =5.365,P＜0.05). 结论 镍铬合金浸提液可引起小鼠成纤维细胞L929凋亡相关蛋白Bax表达增高,可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡.     

两种牙科金属材料细胞毒性及对L929细胞Bax和Bcl-2表达的比较

目的 :通过检测牙科常用金合金及镍铬合金的细胞毒性及两种金属材料浸提液对小鼠成纤维细胞L929凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响,来研究金属离子与L929细胞凋亡的关系,探讨在分子水平上评价材料生物相容性的方法。方法:应用金合金(A组)及镍铬合金(B组)的浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基做为阴性对照(C组),采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)评价2种金属材料的细胞毒性,采用免疫组化法及ELISA法(酶联免疫吸附实验)检测2种金属材料对L929细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:2种材料的细胞毒性均为0级;镍铬合金组Bax/Bcl-2表达的比值高于阴性对照组及金合金组,差异有统计学意义。结论:镍铬合金浸提液可引起小鼠成纤维细胞L929凋亡相关蛋白Bax表达及Bax/Bcl-2比值增高,这一结果可能为将来在分子水平上建立评价生物材料生物相容性的方法提供新的思路。     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.     

四种牙科陶瓷材料细胞毒性研究

目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性.方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛.结果:各组A490nm值均与阴性对照无显著性差异(P＞0.05),材料毒性级别除培养48 h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级.结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性.     

口腔正畸用磁块镀氮化钛膜后细胞毒性研究

目的：评价正畸用磁块表面镀氮化钛膜后的细胞毒性。方法：选用L-929小鼠成纤维细胞，采用MTT比色法，以镀镍膜、未镀膜磁块的浸提液作为对照，对镀TiN膜磁块的浸提液进行体外细胞毒性研究。结果：在镀TiN膜磁块的浸提液中，L-929小鼠成纤维细胞的增殖率高于90％，所测试材料的浸体液无细胞毒性。结论：磁块表面镀TiN膜后，有良好的细胞相容性。     

纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖复合材料作为注射性软组织填充剂的细胞毒性研究

目的 探讨纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合材料的细胞相容性,评价其作为软组织填充剂的可行性.方法 设计制成复合材料(纳米羟基磷灰石与羧甲基壳聚糖的比例为6∶4),小鼠成纤维细胞L929行体外细胞传代培养.制备材料浸提液,MTT法进行细胞毒性评价,细胞接种于复合材料,通过倒置相差显微镜,应用形态观察法、细胞增值率,定性定量观察复合材料对细胞生长、附着、增值的影响.结果 纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合生物材料的细胞毒性不大于1级.成纤维细胞在复合材料的环境中生长良好并促进细胞生长.结论 纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合材料具有良好的生物相容性,作为一种新型的注射性软组织填充材料有望应用于整形美容领域.     

牙科用Ti-6Al-7Nb合金的体外细胞毒性研究

目的:通过MTT试验评价Ti-6Al-7Nb合金的细胞毒性并与现阶段常用的Ti-6Al-4V合金对比.方法:依照国家医疗器械标准(GB/T16886),选择L929细胞系做为细胞毒性的实验对象,观察L929细胞在Ti-6Al-7Nb合金离子析出培养液中的生长情况,并通过MTT试验得出细胞在培养第1,3,5,7日的 A 值.通过计算对Ti-6Al-7Nb合金做出细胞毒性分级评价.结果:Ti-6Al-7Nb合金在各时间点的 A 值均高于Ti-6Al-4V合金,实验组与空白组间无统计学差异( P＞0.05).实验细胞在Ti-6Al-7Nb合金浸提液中生长旺盛,细胞形态正常.细胞毒性分组为0级.结论:Ti-6Al-7Nb合金没有明显的细胞毒性,是一种理想的生物医用钛合金.     

胶原/聚乙烯醇凝胶的制备及生物相容性评价

目的:制备胶原/聚乙烯醇复合凝胶支架并初步评价其细胞相容性以及生物相容性。方法:胶原和聚乙烯醇在液态下混合,冷冻干燥后制备出胶原/聚乙烯醇复合凝胶支架,将L-929细胞接种在凝胶表面,在倒置相差显微镜下计数贴壁细胞数量并在电镜下观察细胞形态。以MTT法评价凝胶的细胞毒性并将凝胶种植在SD大鼠大腿肌肉中,在术后2、8、12周取材,通过大体标本以及组织学观察,评价材料的组织相容性。结果:L-929细胞接种后可黏附在胶原/聚乙烯醇复合凝胶支架表面,随时间延长,黏附细胞数目增多,不同材料表面黏附细胞数量具有显著性差异(P<0.01)。MTT法表明细胞毒性0～Ⅰ级,在材料植入肌肉后早期有炎性浸润及纤维包膜形成,随植入时间延长,炎性反应减轻,包膜变薄。结论:胶原/聚乙烯醇复合凝胶支架具有良好的细胞相容性和组织相容性。     

聚L-乳酸/聚L-乳酸接枝的羟基磷灰石复合材料的生物相容性

目的： 研究新型生物降解可吸收材料聚L-乳酸/聚L-乳酸接枝的羟基磷灰石复合物（PLLA/PLLA-gHAP）的生物相容性,为其应用提供生物学依据。方法： 将96孔板上培养的L929细胞分为PLLA/PLLA-gHAP组、PLLA组、阴性对照组（空白培养液）及阳性对照组（含苯酚培养液）4个组，不同组材料浸提液与细胞共培养24、48和72h，以MTT法检测材料对L929细胞活性的影响；将L929细胞接种于被覆PLLA/PLLA-gHAP材料的盖玻片表面上，于1、2和3 d用倒置显微镜观察细胞形态学改变；将PLLA/PLLA-gHAP材料浸提液对小鼠进行腹腔内注射，观察小鼠的急性毒性反应，计数鼠骨髓多染红细胞微核率以检测遗传毒性作用；将PLLA/PLLA-gHAP板植入兔皮下，于2周、3个月和6个月检测兔血液学指标改变，光镜观察植入物周围组织病理学变化。结果：PLLA/PLLA-gHAP材料浸提液对L929细胞的增殖率(RGR)和细胞毒性分级（CTS）的影响与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05）,细胞在材料表面生长良好；材料浸提液对小鼠无急性毒性及遗传毒性（微核率0.24%）;材料在动物体内埋植后，早期组织内有淋巴细胞、巨噬细胞浸润，纤维膜形成，6个月时纤维膜基本消失，炎症反应明显减轻。结论：PLLA/PLLA-gHAP材料具有良好的生物相容性。     

颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

目的:利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂-1(FPSA-1)的细胞毒性进行评价.方法: 采用MTT法评价FPSA-1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L-929),在培养液中分别添加500,750 mL/L FPSA-1浸提液,于加样后2,4,7 d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA-1的细胞毒性进行评价.结果: 随着时间推移,不同浓度的FPSA-1浸提液对L-929细胞增殖均无明显作用(P>0.05),各浓度FPSA-1浸提液加样后2,4,7 d之间差异无统计学意义(P>0.05),提示L-929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA-1的细胞毒性分级为1级.结论: FPSA-1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料.     

壳聚糖-胶原支架与人牙周膜细胞复合培养的实验研究

目的 对不同比例的壳聚糖-胶原（chi—col）进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法 将体外培养的人牙周膜细胞（PDLCs）接种于不同比例的chi—col上复合培养,采用细胞计数评价PDLCs在clli—col上的附着、生长情况,并通过MTF测试法和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法研究chi—col浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果 人PDLCs在chi—col上形成良好贴附并增殖,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与对照组相比无统计学意义。结论 clli—col具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

In vitro toxicologic study of chitin short fiber reinforced polycaprolactone composite

To investigate the cytotoxicity and cytocompatibility of chitin fiber reinforced polycaprolactone composite in vitro in order to provide useful scientific basis for clinical application. Methods: Cell morphology, observation,MTF and DNA assay were used to evaluate the influence of the composite on the morphology, growth and proliferation of cultured L-929 cells. Results: The composite did not impair the morphology of cultured cells in vitro. MTF and DNA assay demonstrated that the growth and proliferation of the cultured cells were not significantly inhibited by the composite. Conclusion: The composites have fine cytocompatibility and are safe for clinical use of reconstruction of chest wall defects.     

聚乳酸材料对成骨样细胞增殖和分化的影响

目的 研究聚乳酸对成骨样细胞增殖和分化的影响。方法 电镜观察未处理和经预处理的聚乳酸膜。分别将未处理（材料组）和经预处理（处理组）的聚乳酸薄膜与成骨样细胞体外共同培养,观察细胞形态学变化、MTT测定细胞的增殖以及测定碱性磷酸酶（ALP）活性。结果 ①电镜结果显示未处理膜与处理后的膜有细微差别。②材料组细胞与对照组相比出现明显的聚集样生长,细胞形态构成以多角形、星形比例为高,材料组MTT及ALP测定结果均低于对照组（P＜0．05）。预处理组与对照组细胞形态学的差异仅在实验开始3d可以观察到;而细胞的增殖及ALP活性与对照组的差异无统计学意义。结论 预处理后的聚乳酸薄膜对成骨样细胞增殖和分化并无抑制作用．在某种程度上．经处理后反而对其有轻微的促进作用。     

组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究

目的 制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性.方法 联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性.结果 兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留.膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好.MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级.皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入.结论 本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料.     

黄芪-壳聚糖/聚乳酸多孔支架对犬骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的:观察黄芪-壳聚糖/聚乳酸、壳聚糖/聚乳酸多孔支架复合材料对犬骨髓基质细胞(BMSCs)的黏附、生长及分化的影响,寻找较合适的牙周骨组织工程复合物支架材料。方法:将诱导分化的犬BMSCs分别与黄芪-壳聚糖/聚乳酸、壳聚糖/聚乳酸支架体外培养。第5天取材,测定2种材料的吸附率,用扫描电镜观察超微结构,以免疫组织化学检测I型胶原,放射免疫法检测骨钙素的分泌情况。结果:BMSCs与2组材料均能形成良好贴附,黄芪-壳聚糖/聚乳酸复合材料上贴附的细胞吸附率、Ⅰ型胶原及骨钙素的分泌量高于壳聚糖/聚乳酸组。结论:黄芪-壳聚糖/聚乳酸能促进BMSCs生长、分化及基质分泌,是一应用前景良好的组织工程骨构建复合材料。     

MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性

目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖（nHA/CS）,对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。     

兔膀胱移行上皮细胞与丝素蛋白膜相容性研究

目的 探讨用于膀胱组织工程研究的移行上皮种子细胞的培养方法,检测丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞的细胞相容性,探讨构建泌尿系腔道组织工程器官的可能性.方法 (1)取兔膀胱移行上皮细胞体外培养,观察细胞形态变化及生长、增殖过程,并进行免疫荧光鉴定;(2)分别设立空白组(无细胞)、阴性对照组(培养基)和实验组(丝素蛋白膜浸提液).取对数生长期的膀胱移行上皮细胞,lx104/ml接种于96孔板中,每组各5孔,于接种后24、72和120h,通过MTT法显色.并于酶标仪490nm波长下检测吸光度值,计算相对增殖率,对丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞的相容性进行评估.结果 细胞在第9～10天融合形成单层,细胞形态呈多角形的铺路石子状,经免疫荧光鉴定证实为移行上皮细胞;24、72和120 h实验组吸光度值分别为0.424±0.020、0.996±0.118和1.285±0.048.阴性对照吸光度值分别为0.419±0.030、1.105±0.098和1.228±0.052,两组比较无明显差异(P＞0.05).结论 丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞相容性良好,具有作为泌尿系腔道组织工程支架的潜在运用价值.     

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的 探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异.方法 组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异.结果 不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用.HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附.     

生物可降解材料聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸三嵌段共聚物与人脐静脉内皮细胞的细胞相容性

目的：探讨聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸三嵌段共聚物（PEG-PLA-PGL/RGD）与人脐静脉内皮细胞的细胞相容性，为构建支架表面理想可降解载体材料奠定基础。方法：将分离培养的稳态生长的人脐静脉内皮细胞接种于PEG-PLA-PGL/RGD膜片上培养作为实验组，对照组为未放PEG-PLA-PGL/RGD膜片培养的人脐静脉内皮细胞，相差显微镜下观察细胞生长情况及细胞 计数， 采用MTT法检测细胞增殖指数及免疫组织化学S-P法检测人脐静脉内皮细胞FⅧ 。结果：人脐静脉内皮细胞在PEG-PLA-PGL / RGD膜片上生长良好，相差显微镜下观察种植在PEG-PLA-PGL/ RGD膜片上的第3代人脐静脉内皮细胞4～6 h后即开始贴壁、伸展；3 d后细胞开始呈集落样生长，生长较快；5 d后细胞集落开始融合，呈现特征性的鹅卵石样形态；经多次传代（超过7代）后，细胞呈长梭形或多角形,形态改变，与对照组比较差异无显著性。1周内台盼蓝法对细胞计数显示，实验组细胞较对照组无明显降低，细胞增长速度无明显降低（P> 0.05）；MTT法对种植后1、3、5及7 d的细胞增殖指数检测，两组比较差异均无显著性（P>0.05）。结论：人脐静脉内皮细在PEG-PLA-PGL/RGD上生长良好，PEG-PLA -PGL/RGD与人脐静脉内皮细胞具有良好的细胞相容性，是支架表面理想的可降解载体材料。     

多孔碳酸钙陶瓷细胞相容性评价

目的:探讨多孔碳酸钙陶瓷CCC的细胞相容性,为临床应用提供实验依据。方法:采用浸提法制备CCC生理盐水和培养液浸提液,浸提液体外培养L929小鼠成纤维细胞,进行细胞形态学观察,采用MTT法测定细胞增殖率并进行细胞毒性分级;采用分光光度法进行溶血试验。结果:培养期细胞大量增殖,形态良好,(CCC)的细胞毒性分级为Ⅰ级,对健康人血的溶血率<5%,存在轻微细胞毒性和溶血作用。结论:CCC细胞相容性好,符合植入人体生物材料的相关要求。