益心康胶囊体外自由基清除作用及对线粒体质子跨膜转运的影响

目的和方法：利用体外FeSO4/H2O2羟自由基和AP／TEMED氧自由基两种自由基生成体系，观察益心康（H303）体外自由基清除作用。利用羟自由基损伤大鼠心肌线粒体，经荧光探针ACMA测定由NADH及琥珀酸钠引起的线粒体质子跨膜转运的变化。评价中药复方益心康胶囊和复方丹参片的保护作用。结果：H303在体外有明显的清除自由基的作用，并呈一定的量效关系。H303可使琥珀酸钠所致的最大荧光淬灭值的降低有明显增加。结论：H303为良好的自由基清除剂，对自由基所致的心肌线粒体的损伤也具有一定的保护作用。     

三七皂苷中R1、Rg1在正常和脑缺血再灌注大鼠的动力学变化

目的研究三七皂苷中R1、Rg1在正常和脑缺血再灌状态下大鼠体内的药代动力学变化.方法正常组大鼠股静脉注射三七皂苷(50mg/kg),缺血再灌组大鼠阻断双侧颈总动脉造成不完全脑缺血30min、复灌同时股静脉注射等量药物.采用反相HPLC法测定iv后不同时间点大鼠血浆中R1、Rg1浓度,计算其动力学参数.结果在正常和脑缺血再灌状态下,R1、Rg1动力学呈一室开放模型.正常状态下,R1和Rg1的t1/2、AUC0～∞、CL(s)、Vd分别为21.6±7.9和20.8±3.7min、418.7±85.9和1.20±0.18mg/kg;脑缺血再灌状态下,R1和Rg1的t1/2、AUC0～∞、CL(s)、Vd分别为19.2±5.0和20.0±5.2min、416.7±58.9和1368.0±186.3μg/ml·min、0.1390±0.0413和0.0380±0.0060mg/kg·min、3.31±0.54和1.04±0.15mg/kg.结论在正常和脑缺血再灌状态下,R1、Rg1各自的动力学参数没有明显差异.R1、Rg1的动力学过程相似.     

HPLC测定三七粉及三七片中人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量

三七,又名田七、参七,属五加科人参属植物[1],被历代医学家誉为“止血之神药,补血之妙品”,是名贵的中药材。有散瘀止血,消肿定痛的功能。主要用于治疗冠心病、心绞痛等心脑血管系统疾病[2]。三七含有皂苷、黄酮、多糖等多种有效成分,其中皂苷含量最高。经药理证明,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1为其活性成分。作为一种天然产物,受其产地、采收季节、炮制方法和实验条件等方面的差异的影响,再加上其本身成分复杂,提取制备方法和实验条件的不同,三七产品质量往往不稳定。而质量稳定是用药安全有效的关键。所以找出一种有效测定三七及其制剂中有效…     

RP-HPLC测定血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量

目的应用反相高效液相色谱法测定血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量.方法色谱柱Shim-Pack VP-ODS(5μm,250mm×4.6mmI.D),柱温27℃,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(2179),检测波长203nm,流速1.0mL/min.结果人参皂苷Rg1和三七皂苷R1分别在0.167～9.994 μg(r=0.9999)和0.485～9.704 μg(r=0.9999)范围内线性关系良好.平均回收率分别为98.68%和98.68%.RSD分别为0.58%和0.79%.结论本法操作简便、结果准确,重现性好,可用于血塞通片中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量测定.     

三七片中人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的含量测定

三七片是三七制成的片剂 ,具散瘀止血 ,消肿定痛之功 ,用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛、原发性血小板减小性紫癜 ,临床疗效好。该品种收载于部颁标准中药成方制剂第八册 ,原标准只有鉴别项及醇浸出物检查项 ,为了更好地控制三七片的质量 ,笔者对三七片中人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的含量测定方法进行了研究。1　仪器与试药岛津薄层扫描仪 ;三七片 (广东环球制药有限公司研究发展部提供 ) ;阴性样品 (广东环球制药有限公司研究发展部提供 ) ;人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;氯仿、…     

三七皂苷类成分防治肝纤维化的研究进展

肝纤维化是多种肝脏疾病发生发展的关键病理过程,若不及早进行干预治疗,最终会发展为肝硬化甚至肝癌,严重威胁人们的身体健康。近年来,多项研究结果显示三七皂苷类成分能通过抑制脂质过氧化、减少肝星状细胞活化与增殖、调节胶原代谢等方式有效改善肝纤维化的发生。为进一步推进三七皂苷类成分在防治肝纤维化方面的研究,本文对肝纤维化发生发展的机制进行阐述,对近年来三七中皂苷类成分防治肝纤维化的细胞、分子机制研究进行总结,并探讨今后治疗肝纤维化的药物研发方向。     

HPLC法测定三七及复方丹参片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量

目的测定三七及复方丹参片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量,为更好地控制两者的质量提供依据.方法采用高效液相色谱法,色谱条件:Zirchrom C18柱(4.6×200 mm,5 μm);流速:1 mL·min-1;检测波长:203 nm;柱温:20℃;流动相:水-乙腈(梯度洗脱).结果三七皂苷R1线性范围为0.25～10.05 μg(r=1.000),平均回收率为99.25%,RSD=2.57%(n=5);人参皂苷Rg1线性范围为0.60～23.89μg(r=0.999),平均回收率为100.19%,RSD=2.98%(n=5).结论该方法准确可靠,重现性好,可用于三七及复方丹参片的质控标准.     

三七超微粉与细粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量比较研究

目的测定三七超微粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量,为三七超微粉质量评价提供依据。方法采用高效液相法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱;流速:1 mL.min-1;检测波长:203 nm;柱温:25℃。结果三七超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均含量均高于三七细粉,两者间的含量有显著性差异。结论超微粉质量优于细粉。本实验的含量测定方法简便、准确,可为三七超微粉的质量控制提供一定的参考依据。     

高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1,Rb1的含量

目的测定三七药材中三七皂苷的含量.方法采用高效液相色谱法C18色谱柱,乙腈∶水(15∶85-12 min30∶70-45 min15∶85 v/v)梯度洗脱,检测波长203 nm.结果三七R1在72.8～109 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 1),人参Rg1在68.8～860 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 2),Rb1在62.8～785 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 8),线性关系良好.平均回收率大于98%,方法的变异系数小于3.0%.结论方法简便,快速,准确,重现性好,可用于三七药材中三七皂苷的含量测定.     

人参皂苷Rg1与氧化苦参碱协同保肝作用及其机制研究

目的：观察人参皂苷Rg1与氧化苦参碱联合用药的肝保护作用并探讨其作用机制。方法雄性 SD 大鼠120只按体质量随机分为对照组、模型组、人参皂苷 Rg1（Rg1）组、氧化苦参碱（OMT）组和联合用药组,每组各10只。分别复制高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪肝和CCl4致大鼠肝纤维化2种模型,观察Rg1,OMT及联合用药的肝保护作用。结果 Rg1和OMT均可降低非酒精性脂肪肝大鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平[Rg1组分别为（2.76±0.22）mmol/L、（1.24±0.17）mmol/L、（112.39±12.91）U/L、（195.16±12.99）U/L;OMT组分别为（2.35±0.19）mmol/L、（1.09±0.09）mmol/L、（90.57±10.25）U/L、（186.45±13.14）U/L,P＜0.05或0.01],升高肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）α mRNA和PPARγ mRNA[Rg1组分别为（0.64±0.05）、（0.77±0.07）;OMT组分别为（0.67±0.07）、（0.73±0.06）,P＜0.05或0.0）],减轻脂肪肝程度,且联合用药组[分别为（1.87±0.21）mmol/L、（0.77±0.10）mmol/L、（58.78±8.87）U/L、（149.78±11.27）U/L、（0.81±0.09）、（0.89±0.05）]效果优于Rg1组和OMT组（P＜0.05或0.01）;Rg1和OMT均可降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST[Rg1组分别为（146.75±5.11）U/L、（147.53±7.31）U/L;OMT组分别为（148.24±4.32）U/L、（93.90±14.22）U/L,P＜0.01]水平和肝组织中丙二醛（MDA）[Rg1组为（5.54±1.06）nmol/g,OMT 组为5.85±0.91）nmol/g,P＜0.01],提高肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性[Rg1组为（91.61±9.26）U/mg prot;OMT组为（86.19±8.51）U/mg prot,P＜0.01],降低SQS评分[Rg1组为（2.7±0.4）;OMT组为（2.9±0.5）,P＜0.05];联合用药组ALT、AST、MDA、SOD[分别为（92.21±4.36）U/L、（52.08±7.56）U/L、（3.68±0.54）nmol/g、（99.67±13.13）U/mg prot]效果优于Rg1组、OMT组。结论 Rg1与OMT有协同护肝作用,对肝脏PPARα、PPAR     

Icaritin induces cell death in activated hepatic stellate cells through mitochondrial activated apoptosis and ameliorates the development of liver fibrosis in rats

Aim of the study

Icaritin is an active ingredient extracted from the plant Herba Epimedium Sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim. The purpose of this study is to investigate the effects and mechanisms of icaritin-induced cell death in activated hepatic stellate cells (HSCs) and ameliorating the development of liver fibrosis in rats.

Materials and methods

: In vitro, icaritin-induced cell death rates in HSC-T6 (rat) and LX-2 (human) HSC lines as well as normal hepatocyte cell lines HL-7702 (L02) and WRL-68 were assayed by MTT method, and the apoptotic ratios were detected by both flow cytometry and the Annexin-V-FITC Apoptosis Detection Kit. A Whole Rat Genome Microarray Kit was used to identify expression of interest genes through fold-change screening. In vivo study, experimental liver fibrosis models were built by carbon tetrachloride (CCl₄) or common bile duct ligation (CBDL) in Wistar rats. Icaritin (1 mg/kg/day, three days a week) was administered by gastric gavage for four weeks (n = 6 per group). At the end of the study, serum levels of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) as well as the contents of hydroxyproline and collagen I in liver tissues were measured. Histopathological changes and the distribution of activated HSCs were observed in the liver tissues using hematoxyline-eosin (HE) staining and immunohistochemical staining for α-smooth muscle actin (α-SMA).

Results

Icaritin induced apoptosis in HSC-T6 and LX-2 in a concentration- and time-dependent manner with little toxicity to normal hepatocyte cell lines. The IC₅₀ of icaritin in HSC-T6 was 12.83 μM at 48 h. Apoptotic ratio of HSC-T6 treated with 24 μM icaritin was 20.19%, and the G2 phase of the cell cycle did not occur (P < 0.05). Gene analysis showed that icaritin up-regulated Bak-1, Bmf and Bax expression while significantly down-regulated Bcl-2 expression (vs. control group, P < 0.01). These results suggested that mitochondrial pathway played an important role in icaritin-induced apoptosis in activated HSCs. In vivo results showed that icaritin reduced the number of activated HSCs, and brought the elevated levels of AST, ALT, hydroxyproline and collagen I to normal or near normal values (vs. model group, P < 0.05).

Conclusions

Icaritin can induce cell death in activated HSCs through mitochondria-mediated apoptosis, ameliorate the progression of hepatic fibrosis in rats, and could be a promising drug for treating liver fibrosis.     

护肝解纤汤治疗大鼠肝纤维化的作用观察

目的 观察护肝解纤汤治疗大鼠肝纤维化的效果及其与抗过氧化损伤的关系.方法 以四氯化碳腹腔内注射法建立大鼠肝纤维化模型,造模成功后给予自拟的含低、中、高剂量姜黄的护肝解纤汤,以小柴胡汤治疗组和复方鳖甲软肝片治疗组为阳性对照.12周后取血并处死大鼠,用放射免疫法检测肝纤维化指标.留取肝左叶同一部位新鲜肝组织,部分行HE、Masson染色,根据SSS计分系统评估肝纤维化程度;部分制成匀浆,离心后留取上清,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量.结果 护肝解纤汤能降低肝纤维化模型大鼠升高的肝纤维化指标清Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)含量,降低病理评分,其中以低剂量姜黄组效果明显(P<0.05).护肝解纤汤可升高肝组织中SOD,降低MDA,其中以低剂量姜黄组效果明显(P<0.05).结论 护肝解纤汤能改善大鼠肝纤维化,其抗肝纤维化作用可能与保护肝细胞膜及抗过氧化损伤有关.     

化痰行瘀汤对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

目的:观察化痰行瘀汤对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、化痰行瘀汤低、中、高剂量组、复方鳖甲软肝片组6组,每组10只。采用皮下注射四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液复制肝纤维化模型,采用透射电镜和扫描电镜观察各组大鼠肝脏的超微结构改变。结果:与模型对照组比较,化痰行瘀汤中、高剂量组大鼠肝细胞、库普弗细胞(KC)、星状细胞(HSC)、内皮细胞超微结构得到明显改善。结论:化痰行瘀汤能减少肝细胞损伤,阻断胶原纤维的生成,而达到抗肝纤维化的目的。     

乙肝系列中成药对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化指标的影响

目的:采用乙肝系列中成药(乙肝清热解毒颗粒、乙肝益气解郁颗粒、乙肝养阴活血颗粒)探讨中医清热解毒法、益气解郁法、养阴活血法单独使用及联合应用对免疫性肝纤维化模型大鼠肝功能和血清肝纤维化四项指标的影响。方法:用猪血清腹腔注射诱导免疫性肝纤维化模型,成模后再用乙肝系列中成药进行干预治疗,用全自动生化分析仪测定肝功能,用放射免疫分析法测定血清肝纤维化四项指标。结果:猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、IV-C和PC-Ⅲ含量均明显升高(P<0.05,P<0.01),经乙肝系列中成药治疗后,上述指标明显降低(P<0.05,P<0.01),且合方效果优于单方,清热解毒法和益气解郁法的联合应用能更好的改善肝功能,清热解毒法和养阴活血法的联合应用能更好的改善肝纤维化四项指标。结论:中医清热解毒法、益气解郁法、养阴活血法对免疫性肝纤维化有一定的防治作用,能降低肝纤维化程度,同时可减轻肝细胞损伤,改善肝功能。     

蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及CYP2E1表达的影响

目的:观察蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达的影响。方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、蓝莓原浆预防组(蓝莓组)、复方鳖甲软肝片预防组(复方组)、蓝莓原浆加复方鳖甲软肝片预防组(蓝莓+复方组)。猪血清复制大鼠肝纤维化模型,各预防组在造模同时给予蓝莓原浆或(和)复方鳖甲软肝片灌胃。12周后处死大鼠,观察肝组织超微结构变化,RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学法检测大鼠肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质的表达。结果:与模型组比,3个用药组肝纤维化程度明显减轻(P0.05),超微结构病变明显改善,肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质表达无明显差异。结论:蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化有一定的预防作用,对肝细胞超微结构病变有一定的保护作用,对CYP2E1的表达无明显影响。     

黄芪对肝纤维化大鼠肝损伤保护作用及机制研究

目的:研究黄芪对肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用及相关机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、黄芪后处理组和阳性对照组,检测各组大鼠血清中ALT、AST活性和TBIL水平变化;逆转录-聚合酶链反应检测各组大鼠肝脏组织5种主要致纤维化因子p38MAPK、TGF-β1、α-SMA、CTGF和CollegenⅣmRNA表达水平;免疫印迹法检测p38MAPK信号通路上下游蛋白MKK3和ATF-2的表达变化。结果:与肝纤维化模型组比较,黄芪后处理组大鼠血清中ALT、AST和TBIL水平明显降低(P<0.05),肝纤维病理变化明显减轻,p38MAPK、MKK3和ATF-2蛋白表达量均降低(P<0.05)。结论:黄芪通过p38MAPK信号通路对实验性肝纤维化大鼠肝损伤具有效的保护作用。     

春和丹治疗肝纤维化大鼠的实验研究

目的探讨春和丹对肝纤维化大鼠的治疗作用。方法将SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、春和丹低剂量组(20g/kg)、春和丹高剂量组(40g/kg)及护肝片组(1.5g/kg),每组8只。除正常组外,其余各组以四氯化碳(CCl4)皮下注射制备大鼠肝纤维化模型。除正常组和模型组外,于实验第5周开始分别给予春和丹和护肝片灌胃给药,连续5周。观察各组肝纤维化指标、肝功能指标及肝组织病理的变化。结果春和丹可明显降低肝纤维化大鼠血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘蛋白(LN)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织羟脯氨酸定量(Hyp);明显升高血清白蛋白(Alb);光镜观察肝组织病理明显改善(P<0.05);春和丹低剂量组和春和丹高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论春和丹抗肝纤维化作用确切,同时够修复肝脏炎症损伤,纠正蛋白质代谢,且不同剂量春和丹与护肝片比较差异无统计学意义(P>0.05)。     

三七总苷对二甲基亚硝胺致肝纤维化大鼠胶原代谢的影响

目的:考察三七总苷对二甲基亚硝胺(DMN)致肝纤维化模型大鼠胶原代谢的影响。方法:用DMN复制中度肝纤维化模型,随机分为三七总苷组、干扰素组、三七总苷配合干扰素组、阴性对照组,分别以相应的药物连续治疗8周,检测各组大鼠血清肝功能、透明质酸及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,结合常规病理HE、苦味酸-天狼星红染色,评价肝组织炎症及纤维化程度。结果:中度肝纤维化大鼠模型经过连续8周的三七总苷治疗,Hyp含量明显少于模型对照组,差异显著(P0.05),其血清学指标、肝纤维化分级等方面均出现了不同程度的改善。结论:三七总苷能够降低大鼠胶原沉积,减少DMN所致肝纤维化大鼠胶原含量。     

针刺对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝脏中细胞外基质生成的抑制作用

目的:观察针刺治疗对四氯化碳致大鼠实验性肝纤维化的改善作用以及对纤维化肝脏中细胞外基质主要成分表达的影响。方法:将46只大鼠随机分为正常组(10只)、模型组(12只)、非穴组(12只)、穴位组(12只)。采用50%CCl4橄榄油溶液腹腔注射进行肝纤维化造模,同时针刺穴位组大鼠的"太冲"期门"肝俞"并电针"足三里"进行治疗。非穴组取穴为上述各穴左侧平移0.5cm处。造模和治疗6周后,颈总动脉取血用酶联免疫吸附法检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平;然后处死大鼠,分离肝组织进行病理切片观察;并分离各组大鼠的肝星状细胞,以Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1(Ⅰ)型胶原蛋白[α1(I)collagen]、纤连蛋白(fibronectin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的蛋白表达,以Real-time PCR法检测α-SMA、α1(I)collagen和fi-bronectin的mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠各项肝纤维化血清指标(HA、LN、PCⅢ含量)均明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,穴位组血清HA、LN水平显著下降(P<0.05),非穴组无明显降低。针刺穴位可以降低肝星状细胞中α-SMA、α1(I)collagen和fibronectin的蛋白与基因表达(P<0.01,P<0.05),并上调MMP-9的蛋白表达(P<0.05),而对TIMP-1无明显影响(P>0.05)。结论:针刺穴位能有效改善四氯化碳导致的大鼠肝纤维化损伤,减少肝星状细胞分泌细胞外基质,从而抑制肝纤维化。