聚合酶链反应对单—抗HBc阳性的飞行员血清HBV—DNA的检测

用聚合酶链反应对单－抗ＨＢｃ阳性的飞行员血清ＨＢＶ携带情况进行了调查，首先用ＥＬＩＳＡ法对１８９份血清检测了ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ和抗ＨＢｃ。ＨＢｓＡｇ阳性率为４．７６％（９／１８９），抗ＨＢｓ１７．９９％（３４／１８９），抗ＨＢｃ２４．８７％（４７／１８９），聚合酶链反应检测单－抗ＨＢｃ阳性血１９份，抗ＨＢｓ阳性／抗ＨＢｃ阳性血２０份。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３１．５８％（６／１９）和５％（１／     

聚合酶链反应在检测HBV—DNA中的价值

为探讨乙型肝炎的检出率,1997年1～6月,我们采用聚合酶链反应(PCR法)对乙型肝炎78例的血清HBV-DNA进行检测,并与乙肝病毒血清标志物(HB-VM)的检出情况(ELISA法)进行比较,以评价PCR法在监测乙肝病毒感染者中的临床意义。1　对象和方法1.1　对象　乙肝78例,男42例,女36例;年龄14～56岁,平均38.2岁。均无HAV、HCV、HDV、HEV重叠感染。1.2　方法1.2.1　HBV-DNA检测　乙型肝炎病毒基因扩增试剂盒由中山医科大学科技开发公司提供。取患者DNA血清40μl,加40μlDNA提取液后打匀,沸水浴5min,以10000r/min离心5min,取上清液2μl行P…     

定量聚合酶链反应检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

采用信号引物能量转换定量聚合酶链反应（PCR）检测104例不同HBV感染患者血清HBV DNA含量。结果：不同HBV感染患者HBV含量范围在10^4.49-10^9.93拷贝／ml，其中急性乙肝含量显著低于慢性乙肝、乙肝后肝硬变和原发性肝癌患者的含量（P＜0.05和P＜0.01)；HBeAg( )患者的含量显著高于HBeAg(-)／抗－HBe( )患者的含量（P＜0.001)；相关分析显示：血清HBV DNA含量与血清ALT水平无明显相关。结论：HBV感染的慢性化可能与血清HBV DNA含量高有关，肝损伤与血清HBV DNA含量无明显关系；e系统血清传换后，HBV并未停止复制，只是复制水平降低，应用定量PCR检测血清HBV DNA含量有助于HBV感染患者预后的判断和重新评价HBV感染的自然史及HBVM的临床意义。     

应用PCR检测4种消毒剂对HBV—DNA的灭活效果

我们应用聚合酶键反应（PCR）技术，检测碘伏、高锰酸钾、来苏尔和84消毒液对HBV－DNA的灭活效果。报告如下。材料与方法一、材料碘伏，南京大学消毒剂厂生产（批号19931204）。高锰酸钾，广东梅县锰化厂生产（批号19920201）。来苏尔，南昌医药比工厂生产（批号19921024）。84消毒液，南昌健宝防疫用品厂生产（批号19930720）。HBV－DNAPCR试剂盒，由南通宏达生物技术有限公司提供（批号19930509HBV－DNA强阳性血清，采集于住我院的慢性乙型肝炎患者。中和剂：碘伏用2．5％硫代硫酸钠，高锰酸钾用0．2％硫酸亚铁该，来苏尔用2％…     

聚合酶链反应检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是本世纪分子生物学重大进展之一，在体外可将特异ＤＮＡ序列呈百万倍扩增，具有高灵敏度和高特异性。随着该技术的不断改进和完善，其在ＨＢＶ感染研究中的应用也越来越多，大大丰富和更新了人们对ＨＢＶ感染的认识［１］。本文应用ＰＣＲ技术检测不同ＨＢＶ感染患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，旨在探讨急、慢性乙型肝炎及与ＨＢＶ感染相关的肝硬变和肝癌患者血清ＨＢＶＤＮＡ的存在情况及其与乙型肝炎病毒血清标志物（ＨＢＶＭ）在反映体内病毒复制方面存在的差异，…     

应用PCR技术检测HBsAg携带者血清中HBV DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例HBsAg携带者和58例正常人血清中的HBV DNA特异性片段,通过与HBsAg滴度及HBV血清标志物进行对比分析,发现HBVDNA阳性率与HBsAg滴度呈正相关(r=0.981,P<0.005)与HBeAg减低、抗-HBe产生以及其后的e系统消失过程呈相应递减趋势.并且在单项抗-HBs阳性的血清中,HBV DNA检出率可达10%.     

聚合酶链反应对单-抗HBc阳性的飞行员血清HBV-DNA的检测

用聚合酶链反应对单-抗HBc阳性的飞行员血清HBV携带情况进行了调查，首先用ELISA法对189份血清检测了HBSAg、抗HBs和抗HBc。HBsAg阳性率为4．76％（9／189），抗HBs17．99％（34／189），抗HBc24．87％（47／189），聚合酶链反应检测单-抗HBc阳性血19份，抗HBs阳性／抗HBc阳性血20份。HBV－DNA阳性率分别为31．58％（6／19）和5％（1／20），结果提示单-抗HBC阳性飞行员中存在低水平的HBV携带者；在招飞体检仅检测血清HBSAg，不能除外低水平的HBV感染者。     

应用核糖体DNA聚合酶链反应方法鉴别蚊虫

为了建立一种能鉴别蚊类近缘种的ＰＣＲ 方法,用ＰＣＲ 方法扩增按蚊、库蚊和伊蚊等蚊虫的γＤＮＡ—ＩＴＳ２ 区片段。７ 种蚊虫基因组ＤＮＡ 扩增出γＤＮＡ—ＩＴＳ２ 区片段在３４５ —５８５ ｂｐ 之间。表明该技术是一种简便可靠的蚊种近缘种鉴别方法。     

应用分子杂交和免疫组化技术检测肝外组织中的HBV—DNA和HBV抗原

在9名肝炎死亡病例尸检时,采集了多种组织,以斑点分子杂交技术及Southern吸印法检测了HBV-DNA,以免疫组织化学技术检测了各种组织细胞内的HBsAg、HBcAg和HBeAg。检测结果显示除肝脏外,HBV-DNA和/或HBV抗原常见于一些重要的肝外脏器和组织,说明了HBV的泛嗜性,并且提示可能与有些病症有关。睾丸和前列腺中检测到HBV抗原和HBV—DNA值得重视,为通过性生活可以传播及通过父亲也可以垂直传播给新生儿提供了依据。HBeAg在肝外组织中的检测尚未见报道,本组资料显示在多种肝外组织细胞内都可检出,说明在肝外组织中,HBV的复制也可以是活跃的。HBeAg大多存在于细胞核内,其意义尚待进一步探讨。     

原位聚合酶链反应技术及其在消化道肿瘤相关病毒基因检测中的应用

为克服核酸原位杂交技术(ISH)和聚合酶链反应(PCR)的不足,我们应用分子病理学原理建立了原位PCR(PCRIS)、反转录原位PCR(RT—PCRIS)技术,对27例原发性肝癌(HCC)组织中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)、54例胃癌(GC)组织中EPstein—Barr病毒脱氧核糖核酸(EBV DNA)及20例食道癌(EC)组织中人乳头状瘤病毒DNA(HPV DNA)进行原位分析。结果显示HCV RNA、EBVDNA及HPV DNA阳性率分别为78％、29％及25％,明显高于ISH检测结果(P<0.05)。提示本研究建立的PCRIS、RT—PCRIS技术特异、灵敏、定性、定位;HCV、EBV、HPV感染分别与HCC、GC及EC发生、发展密切相关。     

聚合酶链反应检测胃液及胃粘膜中幽门螺杆菌的对比研究

本文用PCR法对比检测了胃窦粘膜与胃液中的幽门螺杆菌(HP),试图找到一种能够替代钳取胃粘膜并取材方便,且检验效果与检测胃粘膜效果一致的材料。结果显示,①PCR法对慢性胃十二指肠疾病患者胃窦粘膜HP检出率为77.5％,显著高于快速尿素酶法(54.9％)(P<0.01)。②胃液与胃窦粘膜HP的PCR检出率(分别为74.6％和77.5％)无显著差异(P>0.05),两者呈一致性。结论:PCR检测HP比较敏感,可以检出存在于胃液中的少量HP,因此可以反映胃粘膜HP的感染情况。临床上可用一次性胃液采集器收集胃液标本后用PCR法检测其中的HP。     

聚合酶链反应检测鼻咽非上皮性肿瘤EB病毒

为探讨鼻咽腔非上皮性肿瘤与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）之间的关系，应用ＰＣＲ检测鼻咽和头颈部非上皮性肿瘤５８例，并配合免疫级表型分析，结果显示（１）ＥＢＶ与鼻咽及头颈部的横纹肌肉瘤（ＲＭＳ），纤维肉瘤，幼年性纤维血管瘤，嗅神经母细胞瘤，恶性黑色素瘤无明显关系，（２）ＥＢＶ与鼻咽腔中线恶网（ＭＭＲ），鼻咽癌（ＮＰＣ）存在密切关系，很可能在其发病中起重要作用，（３）ＥＢＶ在ＭＭＲ（Ｔ淋巴瘤）听检出率明显高于身体     

口腔磷癌组织中入乳头瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用以高辛标记的HPV6/11和HPV16/18核酸探针分别在50例口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织上进行原位杂交,以检测OSCC组织中HPV DNA的特征。结果表明,HPV16/18 DNA阳性16例（32%）,HPV16/18 DNA阳性信号散在分布于OSCC的癌细胞核中;而检测HPV6/11 DNA均为阴性。结果提示,原位杂交方法可用来检测OSCC组织 HPV DNA的存在并能准确组织定位;进一步支持高危型HPV16/18感染与OSCC的发生有关。     

西北地区鼻咽癌患者血清EB病毒抗体与癌细胞EBV-DNA的相关性

应用核酸原位杂交技术,对西北地区鼻咽癌60例,鼻咽粘膜慢性炎症30例和40例鼻咽外恶性肿瘤组织进行了细胞EBV-DNA检测,发现鼻咽癌细胞EBV-DNA阳性率71.6％,其它肿瘤均阴性;在鼻咽粘膜慢性炎症及癌旁上皮组织中也可发现少数EBV-DNA阳性细胞。在上述60例鼻咽癌中,随机抽取12例患者,对其血清中EB病毒抗体与癌细胞中EBV-DNA相关性进行研究,发现两者具有明显的相关性。上述结果证实,在西北地区鼻咽癌发生中,EB病毒可能具有病因学意义。     

胃癌、结肠癌中端粒酶活性的检测及临床意义

目的:检测胃癌、结肠癌及其相应正常组织中端粒酶活性,探讨其在胃癌、结肠癌发生中的作川以及与临床病理特征之间的关系。方法:采用PCR-TRAP法检测92例胃癌、结肠癌和61例正常组织的端粒酶活性,并州端粒酶活性与临床病理特征关系进行分析。结果:胃癌和结肠癌中端粒酶活性阳性率为84.9％,而正常组织为9.83％,胃癌和结肠癌组织端粒酶活性显著高于正常组织,P<0.01;胃癌、结肠癌组织中端粒酶活性在不同分化程度及淋巴转移之间未发现显著差异,P>0.05。结论:端粒酶在胃癌、结肠癌的发生中起重要作用;端粒酶在胃癌、结肠癌组织中高表达,而在正常胃肠组织低表达的特性,使其有望成为一种较为理想的胃肠道肿瘤诊断的标志物。     

聚合酶链反应(PCR)检测水中钩体DNA方法的建立和初步应用

目的:为了建立一个检测水中钩体DNA的技术方法。方法:本研究采用了根据1993年C.Gravekamp设计的引物G_1G_2序列自行合成的引物G_1G_2建立了检测致病钩体DNA的PCR方法。运用此方法并结合“优筛法”对采自云南河口、蒙自等地区108份水样进行检测,并与分离培养后经中国药品生物制品检定所鉴定结果进行了比较。结果:两组方法检测所有水样呈阴性,其精确度和一致性达100％,但分离培养方法漏检率为8.3％(9/108)。结论:建立了PCR检测水中钩体DNA方法。此方法简单、快速、准确,适用于一般实验室及大规模水样钩体DNA的检测,值得推广应用。     

乙型肝炎患者肝内HBV抗原表达与肝细胞病变的关系

本文用ABC法和单克隆抗体检测139例乙肝患者肝组织内HBsAg和HBcAg。HBcAg阳性89例(64.0％),阳性率随乙肝病变严重程度依次递增,膜型HBsAg可能与疾病严重程度有关。HBcAg阳性68例(48.9％),阳性率以慢活肝最高而HBsAg携带者最低,浆膜型HBcAg可能反映了疾病的活动性。HBsAg和HBcAg的膜表达可能与乙肝肝细胞病变密切相关。     

胰腺癌患者外周血浆中K-ras基因突变和CA19-9联合检测的临床意义

采用两步法聚合酶链反应－限制性酶切片段长度多态性（PCR－RFLP）分析法检测胰腺癌患者外周血中K－ras基因突变，部分病例DNA直接测定，采用化学发光标记免疫测定法检测血浆CA19－9，联合分析其临床意义，结果显示，胰腺癌患者血浆K－ras基因突变率为60％（18／30），CA19－9为83．3％（25／30），前者敏感性不及后者（P＜0．01），但二者联合分析敏感性高达100％，提示血浆肿瘤蛋白标志物和分子标志物联合检测可提高胰腺癌诊断的敏感性，克服多种蛋白标志物受Lewis血型的限制。