升清降糖合剂对氧化损伤胰岛β细胞Bcl-2、Bax、Akt表达的影响

目的:研究升清降糖合剂(SQ)对氧化损伤胰岛β细胞凋亡的保护作用,探讨其对凋亡蛋白Bcl-2和Bax、Akt蛋白表达的影响。方法:H2O2诱导胰岛细胞氧化损伤模型,流式细胞术测定胰岛细胞凋亡率,以荧光免疫法检测细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达,免疫印迹测定细胞Akt磷酸化表达。结果:模型组细胞凋亡率增高,达(35.18±2.41)%,与正常组比较有差异(P<0.01),与SQ保护组比较有差异(P<0.01)。模型组细胞内Bax荧光表达较正常组增加(P<0.05);SQ保护组Bcl-2荧光表达上升,Bax荧光表达下降,与模型组比较,均有统计学差异(P<0.05)。对于胰岛细胞瘤株RINm5F,模型组磷酸化Akt蛋白表达减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.01);对于原代胰岛,模型组磷酸化Akt蛋白减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:升清降糖合剂可降低氧化损伤胰岛β细胞凋亡率,上调Bcl-2,抑制Bax蛋白表达,促进Akt磷酸化。升降糖合剂抗氧化和抗凋亡机制与调节凋亡蛋白Bcl-2和Bax及PI3K-Akt通路有关。     

天然脑活素对Aβ1-40诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用研究

目的：探讨天然脑活素对Aβ1-40诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法：采用Aβ1-40处理PC12细胞复制AD细胞模型,不同剂量的天然脑活素孵育细胞,镜下观察细胞形态学变化,免疫细胞化学染色法观察细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax,Caspase-3）的表达水平。结果：天然脑活素处理组细胞突起生长明显,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达较模型组显著上调,同时细胞凋亡促进蛋白Bax及介导细胞凋亡的蛋白Caspase-3的表达明显下调（P〈0.05或P〈0.01）。结论：天然脑活素可通过调节细胞凋亡相关蛋白的表达水平,对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显拮抗作用。     

升清降糖合剂对STZ诱导RINm5F细胞损伤的保护作用

目的:探讨升清降糖合剂对RINm5F细胞的保护作用,为临床治疗糖尿病提供实验依据。方法:以STZ(链脲佐菌素)诱导建立胰岛细胞损伤模型;采用半仿生提取法提取升清降糖合剂有效成分(简称SQ);以不同浓度(100、200、400μg.mL-1按生药折算)的SQ作用于正常组和模型组细胞,以CCK-8法检测细胞生存活性并结合硝酸酶还原法测定细胞上清中NO含量。研究结果:经CCK-8法检测确定建立模型条件为0.8mmol/LSTZ干预RINm5F细胞24h;400μg/mL药物组能明显提高细胞活性(P<0.01),并减少细胞培养液中NO含量(P<0.01)。研究结论:升清降糖合剂对STZ导致胰岛细胞损伤有保护作用。     

胡桃楸提取物对白色念珠菌细胞增殖的影响

目的：探讨胡桃楸提取物对白色念珠菌细胞增殖的影响。方法：收集经胡桃楸提取物作用相应时间的白色念珠菌,制备菌悬液,碘化丙啶（PI）染色后流式细胞术（FCM）检测其细胞周期。结果：与空白对照比较,10、20、40μg/ml胡桃楸提取物浓度组白色念珠菌G0/G1期细胞比例显著升高（P〈0.01）,增殖指数明显降低（P〈0.01）;不同胡桃楸提取物浓度组之间比较,白色念珠菌G0/G1期细胞比例和增殖指数差异显著（P〈0.01）。结论：胡桃楸提取物可抑制白色念珠菌细胞增殖。     

没食子酸丙酯对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其作用机制

目的 探讨没食子酸丙酯（propyl gallate,PG,赤芍801）对H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）氧化损伤的影响及其作用机制。方法 将SH-SY5Y细胞均分为对照组、H2O2模型组、PG1组、PG2组和PG3组,对照组常规加入DMEM/F12培养液培养;H2O2模型组加入H2O2 200 μmol·L-1;PG1组加入PG 20 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG2组加入PG 40 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG3组加入PG 80 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1。比较5组SH-SY5Y细胞的增殖活性,细胞培养物上清中8-OHdG,细胞内ROS、LDH释放量,Hoechst 33258染色结果、细胞周期变化情况及Caspase-3酶活性。结果 H2O2模型组细胞存活率显著低于对照组,细胞培养物上清中8-OHdG水平显著高于对照组,ROS水平显著高于对照组,LDH释放量显著高于对照组,具有非常显著性差异（P＜0.01）;PG1组、PG2组和PG3组细胞存活率均显著高于H2O2模型组,细胞培养物上清中8-OHdG水平均显著低于H2O2模型组,ROS水平均显著低于H2O2模型组,LDH释放量均显著低于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG可显著改善SH-SY5Y细胞凋亡情况,且具有剂量依赖关系;H2O2模型组G0/G1期百分率显著高于对照组,S期、G2/M期和PI均显著低于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG2组、PG3组G0/G1期百分率显著低于H2O2模型组,S期、G2/M期和PI均显著高于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;H2O2模型组Caspase-3酶活性显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;PG2组和PG3组Caspase-3酶活性显著低于H2O2模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PG在一定剂量范围内对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究

目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMs）增殖和TGF-β表达水平的影响,探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,MTT法确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTT法进行细胞计数,流式细胞仪进行细胞周期测定,ELISA法进行细胞培养夜TGF-β含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞;台盼蓝染色倒置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;细胞TGF-β含量明显降低,与空白对照组比较有统计学意义（P〈0.05）;低剂量组与空白对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,延缓细胞周期进程,调节细胞分泌TGF-β水平。     

三七总皂苷对H2O2诱导BMSCs 凋亡的保护作用及机制研究

目的：体外观察三七总皂苷（tPNS） 对过氧化氢（H2O2） 诱导的骨髓间充质干细胞（BMSCs） 凋亡的影响,并通过ERK1/2 通路初步探讨tPNS 的作用分子机制。方法：全骨髓贴壁法体外分离、培养SD 大鼠BMSCs。不同浓度tPNS （25、50、100 和200 μg/mL） 处理BMSCs 24 h 后,用500 μmol/L H2O2 孵育细胞24 h 诱导凋亡,后行MTT 实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期。100 μg/mL tPNS 预处理24 h 后,加ERK1/2 抑制剂PD98059（25 μmol/L） 1 h,后用500 μmol/L H2O2 孵育细胞24 h 诱导凋亡,用Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western Blot 检测细胞ERK1/2 及其蛋白磷酸化的表达。结果：与对照组比较,其他各组存活率均显著降低（P＜0.01）;与H2O2 组比较,100 μg/mL 和200 μg/mL tPNS 组均能显著提高BMSCs 的存活率（P＜0.01,P＜0.05）,其中100 μg/mL 效果更佳,所以采用最佳浓度组100 μg/mL tPNS 组进行后期研究。BMSCs 经tPNS干预24 h 后,100 μg/mL 和200 μg/mL tPNS 组细胞周期中G2+S 期细胞数的比例较H2O2组明显增加（P＜0.05）,其中100 μg/mLtPNS 组较200 μg/mL tPNS 组更多;其他浓度tPNS 组与H2O2 组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,其他各组凋亡率均升高（P＜0.01）;与H2O2 组比较,tPNS 组能显著降低BMSCs 的凋亡率（P＜0.01）;与tPNS 组比较,tPNS+PD98059 组能显著升高BMSCs 的凋亡率（P＜0.05）。与对照组比较,H2O2 组、tPNS+PD98059 组能显著下调ERK1/2 蛋白的磷酸化表达（P＜0.01）;与H2O2 组比较,tPNS 组、tPNS+PD98059 组能显著上调ERK1/2 蛋白的磷酸化表达（P＜0.01）;tPNS 组与tPNS+PD98059 组之间并没有显著差异。结论：tPNS 对H2O2 诱导的BMSCs 凋亡有保护作用,其机制可能与促进ERK1/2 蛋白的磷酸化表达有关。     

养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响。方法：制备实验用含药血清：空白组、中药组、激素组、中药加激素组;采用钴60射线照射肺成纤维细胞后,用不同含药血清培养细胞,分别于24、48、72 h后用流式细胞技术检测各组的细胞周期及细胞凋亡。结果：24 h,各药物组的细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,中药组的作用最突出。各药物组的细胞周期主要阻滞在G2/M期;空白组与各药物组的S期有显著差异（P〈0.05）。48 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,而各药物组之间没有差异（P〉0.05）。72 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）;各药物组之间亦有差异（P〈0.05）。48、72h各组出现了以G0/G1期比例增高为主的G0/G1期和G2/M期同时阻滞的现象。结论：养阴清肺方能够影响细胞生长周期,减少细胞合成期,诱导G2/M期阻滞,促进肺成纤维细胞的凋亡。     

参夏合剂影响Ang11诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞凋亡和Caspase-3表达的研究

目的：观察参夏合剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡和Caspase-3表达的影响,探讨参夏合剂防治动脉粥样硬化的作用机制。方法：培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,经Angl／诱导后,随机分为模型组、参夏合剂低剂量组、高剂量组、DMSO对照组,分别给予相应药物干预后,采用原位末端标记技术检测凋亡细胞（TUNEL）,用免疫组化法检测Caspase-3的表达。结果：①血管平滑肌细胞凋亡率：空白对照组的VSMC未出现细胞凋亡,模型组细胞凋亡较空白对照组显著增高（P〈0．05）。参夏高、低剂量组亦出现细胞凋亡,但明显低于模型组（P〈0．01或P〈0．05）。②Caspase-3表达情况：模型组的Caspase-3表达与空白对照组无显著差异;参夏合剂高、低剂量组的Caspase-3蛋白表达均明显低于模型组（P〈0．05）;且随着参夏舍剂浓度的增加,Caspase-3蛋白表达呈下降趋势。结论：AngII通过促进细胞凋亡作用而诱发动脉粥样硬化过程,参夏合剂可通过调节细胞凋亡和Caspase-3表达发挥抗动脉粥样硬化作用。     

三七透明质酸钠凝胶对家兔硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究三七透明质酸钠凝胶（以下简称“三七凝胶”）对硬膜外瘢痕组织中成纤维细胞凋亡的影响。方法：选取大耳白品系家兔作为实验动物,制作家兔椎板切除模型,在硬膜囊周围分别滴加三七凝胶、三七浓缩液、透明质酸钠、生理盐水,于术后第2、4、8周取材。通过末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）介导的原位缺口末端标记法（Tunel）和原位杂交法观察各组局部硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达情况。结果：对硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡的Tunel染色显示,三七凝胶组在第2、4、8周的细胞凋亡指数显著高于生理盐水组和透明质酸钠组（P〈0.01）,且于第2周与三七浓缩液组无明显差异;透明质酸钠组在第2、4、8周与生理盐水组均无明显差异（P〉0.05）。原位杂交检测Caspase-3表达的结果显示,实验第2周时三七凝胶组的Caspase-3表达量最高,较其他各组均具有显著性差异（P〈0.05）,三七浓缩液组较生理盐水组高,有统计学意义（P〈0.05）;第4周时各组间均无统计学差异;第8周时三七凝胶组的Caspase-3表达量均显著高于生理盐水、三七浓缩液及透明质酸钠组（分别P〈0.01,0.01,0.05）。结论：三七凝胶可明显诱导成纤维细胞凋亡,促进凋亡执行因子Caspase-3的表达;透明质酸钠对瘢痕中成纤维细胞凋亡的影响不大;三七凝胶诱导瘢痕中成纤维细胞凋亡的机制可能与促进Caspase-3的表达有关。     

当归补血汤超滤物抗H2O2致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。     

Inhibition of Corydalis decumbens Alkaloids on Hydrogen Peroxide- induced Apoptosis of PC12 Cells through Down-regulating Caspase-3 Expression

Objective To extract alkaloids from Corydalis decumbens(AsCD) by supercritical CO2 fluid extraction(SFE) and to evaluate protective effects of AsCD against hydrogen peroxide(H2O2)-induced apoptosis in rat PC12 cells. Methods AsCD were extracted by SFE and oxidative damage PC12 cells model was induced by H2O2.The survival rate of the cells was determined by MTT assay;Lactate dehydrogenase release was determined by ultraviolet spectrophotometry;Flow cytometry was used to detect apoptosis;Caspase-3 mRNA and protein were determined by real-time PCR and Western blotting assay,respectively.Results AsCD remarkably reduced the cytotoxicity, prevented membrane damage,and inhibited cell apoptosis.AsCD inhibited Caspase-3 mRNA and protein expression induced by H2O2 in PC12 cells.Conclusion AsCD possess protective effects against H2O2-induced apoptosis in PC12 cells,and the mechanism of AsCD responsible to the inhibition of apoptosis is possibly attributed to the down-regulating Caspase-3 expression.AsCD might be useful in the treatment of oxidative stress-related neurodegenerative diseases.     

沙棘总黄酮对血管内皮细胞保护作用及机制研究

目的 观察沙棘总黄酮对血管内皮细胞的保护作用。     

告达庭诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用

目的：观察Caudatin体外对人肝癌细胞SMMC7721的作用。方法：采用MTT法测定不同浓度的Caudatin作用于SMMC7721细胞24，48和72h对其生长的抑制作用。用流式细胞仪以PI单染检测细胞周期、以Annexin V／PI双染检测细胞凋亡，比色法测定Caspase-3酶活力。结果：Caudatin体外能抑制人肝癌细胞SMMC7721的增殖并呈明显的时间和剂量依赖性。Caudatin体外能诱导SMMC7721细胞凋亡，并使细胞周期阻滞于G0／G1期。Caspase-3的酶活力随着Caudatin体外作用时间的延长先升高并于8h达到最大，再随时间的变化而降低。结论：Caudatin体外能显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长，其抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期于G0／G1期，并通过激活Caspase-3诱导肿癌细胞凋亡有关。     

银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及发生机制。方法采用500μmol/L浓度的过氧化氢(H2O2)作用于对数生长期的肾小管上皮细胞(NRK52E),建立细胞氧化损伤模型。银杏提取物EGB761分为高中低3个浓度组进行干预,应用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞术检测肾小管上皮细胞的凋亡率,RT-PCR检测Caspase-3基因的表达差异。结果与过氧化氢组比较,高、中浓度组银杏提取物EGB761的凋亡阳性率均明显降低,而低浓度组虽有减少趋势但无显著性差异;高、中浓度组银杏提取物EGB761的Caspase-3表达阳性率较过氧化氢组明显降低,且随着浓度的增加而表达逐渐减少(P0.05)。结论银杏提取物EGB761可以拮抗过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的效应,其机制估计与下调Caspase-3的表达有关。     

异常黑胆质成熟剂醇提物诱导HepG2细胞凋亡机制的研究

目的:探讨异常黑胆质成熟剂醇提物的抗癌作用机理。方法:采用四氮甲基唑蓝法(MTT)观察样品对人肝癌细胞株(HepG2)体外生长的抑制作用;采用琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术等观察样品对HepG2细胞凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链式反应技术(RT-PCR)观察样品对HepG2细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响;观察样品对HepG2细胞Caspase-3活性的影响。结果:异常黑胆质成熟剂醇提物可明显抑制癌细胞体外生长(P<0.05);明显阻滞癌细胞周期、诱导癌细胞凋亡(P<0.05);明显提高抑癌基因p53、p21基因mRNA的表达,抑制抗凋亡基因Bc l-2 mRNA的表达,对Bax基因mRNA表达不产生明显的影响;明显提高Caspase-3活性。结论:异常黑胆质成熟剂醇提物抗癌作用可能与其抑制癌细胞生长、阻滞癌细胞周期、诱导癌细胞凋亡、调节凋亡相关基因表达、激活Caspase-3活性等功能有密切联系。     

钩吻生物碱单体对肝癌细胞体外抑制作用机制的初步研究

目的:探讨植物钩吻中生物碱单体对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法:MTT法观察3种生物碱单体对HepG2细胞的体外杀伤作用,选取活性最好的单体进一步行时效、量效关系的测定和细胞形态学观察;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性检测用分光光度法进行。结果:3种单体都显示出对HepG2细胞的增殖抑制活性,其中钩吻素己效果最好,呈时间及剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖;经钩吻素己处理48 h后的HepG2细胞变小变圆,正常贴壁细胞随着药物浓度的增加而减少;各浓度组钩吻素己可阻滞细胞于S期,并诱导细胞凋亡,且Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性随着药物浓度的增高而增高。结论:3种钩吻生物碱单体中钩吻素己能显著抑制HepG2细胞体外增殖且细胞毒性较小,并通过影响细胞周期分布和激活Capspase-8、Capspase-9进而活化Capspase-3发挥抗肿瘤作用。     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

丹参注射液抑制H2 O2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。     

南瓜蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的观察南瓜蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法观察南瓜蛋白对PANC-1细胞生长抑制情况;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)小鼠体内观察南瓜蛋白对胰腺原位移植瘤的抑瘤率;电镜观察南瓜蛋白作用后PANC-1细胞超微结构的改变;流式细胞仪定量检测其细胞周期和凋亡发生率的影响;ELISA法定量检测南瓜蛋白作用后PANC-1细胞Caspase-3活性变化。结果 0.125、0.25、0.5mg/kg的南瓜蛋白对小鼠移植瘤抑瘤率(%)分别为45.2、50.0、59.7(P<0.05)。南瓜蛋白10μg/mL作用PANC-1细胞24h,部分细胞开始凋亡,表现为核内染色质浓集,出现核碎裂,作用72h,凋亡细胞增多,表现为染色质聚集,部分核膜消失,凋亡小体出现;南瓜蛋白(0、2.5、10、40μg/mL)作用PANC-1细胞72h,流式细胞周期分析显示G0/G1期的比例(%)分别为46.56±5.08、53.33±5.05、67.50±6.50和77.00±6.73(P<0.05),annexin V/PI分析显示PANC-1细胞凋亡率(%)分别为2.50±0.13、8.30±1.23、23.40±2.45和48.50±3.65(P<0.05);Caspase-3活性分别为0.009±0.002、0.011±0.003、0.035±0.009和0.065±0.009酶活力单位(P<0.05),提示南瓜蛋白以浓度依赖性诱导PANC-1细胞凋亡;40μg/mL南瓜蛋白作用PANC-1细胞24、48、72h,G0/G1期的比例(%)分别为56.60±6.65、67.83±6.76和77.00±6.73(P<0.05),annexin V/PI分析显示PANC-1细胞凋亡率(%)分别为16.51±2.97、38.51±2.38和48.50±3.65(P<0.05),提示南瓜蛋白以时间依赖性诱导PANC-1细胞凋亡。结论南瓜蛋白对PANC-1细胞具有明显的抑制作用,诱导G0/G1周期阻滞和细胞凋亡可能是其主要机制。