日本血吸虫病诊断抗原研究进展

血吸虫病免疫诊断技术的发展为血吸虫病控制做出了重要贡献。血吸虫抗原检测特异性抗体是目前血吸虫病免疫诊断的常用方法,所使用的抗原可分为粗制虫源抗原、纯化虫源抗原和重组抗原。研制高敏感性、高特异性和具有早期诊断价值的抗原是免疫诊断研究的重点。本文对近年日本血吸虫病诊断抗原研究进展进行了综述。     

日本血吸虫病重组诊断抗原研究进展

随着分子生物学和免疫学技术的发展,将重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断已成为当前血吸虫病研究领域的热点。本文将近10年用于日本血吸虫病免疫诊断的重组抗原研究进展作一综述。     

日本血吸虫病免疫诊断方法的研究进展

日本血吸虫病是一种人兽共患的寄生虫病,主要分布于亚洲的中国、菲律宾等国家。有关日本血吸虫病的免疫学诊断方法种类繁多,目前发展方向主要集中在对特异性标记物的研究和诊断方法的标准化上,以便能更好地应用于现场。该文对日本血吸虫病主要的免疫学诊断方法以及存在的一些主要问题作一简要综述。     

快速ELISA法诊断血吸虫病的应用研究

目的对快速酶联免疫吸附试验（ELISA）的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察待测血清和HRP-SPA不同混合反应时间对检测效果的影响,优化快速ELISA法的检测条件。用快速ELISA法、常规ELISA法和胶体染料试纸条法（DDIA）平行检测慢性血吸虫病人、华支睾吸虫病人及健康人血清,观察快速ELISA法的血吸虫病诊断实用价值。结果 HRP-SPA的最佳工作浓度为1∶2 000,待测血清和HRP-SPA最佳混合反应条件是37℃同步反应60 min。快速ELISA法检测慢性血吸虫病人血清抗体阳性检出率为93.8%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为4.0%,检测健康人血清的假阳性率为1.5%,与常规ELISA法和DDIA检测结果相似。结论快速ELISA法具有快速、简便等优点,是一种简便实用的血吸虫病免疫诊断方法。     

日本血吸虫病免疫诊断研究的现状和进展

日本血吸虫病是一种人兽共患寄生虫病。辅助性免疫诊断在血吸虫病防治中占有十分重要的地位，是确定人群的感染率、感染度、传播监测、考核防治效果以制定防治策略的主要工具。近年来，随着分子生物学和免疫学技术的发展和渗入，多种纯化组分抗原、重组抗原、模拟抗原以及单克隆抗体和多克隆抗体被制备，并应用于日本血吸虫血清循环抗体、循环抗原和循环免疫复合物的检测，以提高方法的敏感性和特异性。该文将分别对日本血吸虫病循环抗体、循环抗原和循环免疫复合物的主要免疫诊断方法和存在的一些主要问题作一综述。     

微波酶联免疫吸附试验诊断日本血吸虫病

目的评价微波酶联免疫吸附试验(微波ELISA)诊断日本血吸虫病的效果.方法用微波ELISA和常规ELISA平行检测日本血吸虫病各期患者血清262份,健康人血清92份,华支睾吸虫和卫氏并殖吸虫患者血清各15份.结果两种方法的日本血吸虫病患者血清抗体阳性检出率分别为89.69%(235/262)和91.98%(241/262),差异无显著性.健康人血清抗体假阳性率分别为2.17%(2/92)和1.09%(1/92),差异亦无显著性.均发现1例华支睾吸虫病患者的交叉反应.结论微波ELISA具有较高的敏感性和特异性,且具有快速获得检测结果的特点.     

重组GST—HD融合蛋白用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究

目的 探讨重组GST-HD融合蛋白用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法 用IPTG诱导表达日本血吸虫中国大陆株23kDa分子（SjC23)的大亲水片段的融合蛋白（GST-HD），再经Glu-tathione Sepharose4B凝胶进行亲和纯化，建立应用纯化的GST-HD融合蛋白检测抗SjC23抗体的ELISA血吸虫开门见山诊断方法（GST-HDELISA），用该方法和常规的SEA-ELISA平行检测血吸虫病人，肝吸虫病人及健康人血清，同时检测32份同一病人治疗前、治疗后半年的配对血清，比较两种方法诊断血吸虫病的效能和疗效考核价值。结果 GST-HDELISA和SEA-ELISA检测90份病人血清的阳性率分别为95.55%和93.33%，检测29份肝吸虫病人血清，交叉反应率分别为0和3.44%，检测40份健康人血清假阳性率分别为0和2.5%。融合蛋白中的GST分子对实验结果没有影响，检测32份治疗前、治疗后配对病人血清，治疗后6个月GST-HD抗体的阴转率达75.0%，而SEA抗体的阴转率仅为12.5%。结论 重组表达的GST-HD融合蛋白分子是一种新的血吸虫病基因工程免疫诊断抗原，具有较高的免疫诊断和病效考核价值。     

rSj26-Sj32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

目的探讨rSj 26-Sj 32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立HRP-IgG-Dot-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,观察二者的检测结果。结果 rSj 26-Sj 32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者阳性检出率均为100%,特异性分别为95.35%和93.02%;二者均与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。     

平行检测血清和尿液中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

应用McAb-Dot-ELISA平行检测了人宿主的血清和尿样(浓缩20倍)中日本血吸虫肠相关趋阴极循环抗原(CCA)。81例急性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性率分别为96.30％和66.67％。而血清和尿样组合检测的阳性检出率提高至100％。109例慢性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性检出率分别为77.06％和10.09％,组合检测的阳性检出率没有提高。100份健康人的血清和尿样的假阳性率均为0％。53例华枝睾吸虫病患者的血清和尿样的交叉反应率分别为9.43％和0％。48例钩虫病患者的血清和尿样的交叉反应率均为0％。     

快速Dot-ELISA诊断日本血吸虫病的初步研究

本研究对Dot-ELISA进行了改进,建立了快速Dot-ELISA。运用该法检测了96份血吸虫病人血清,其中88份为阳性(91.7％),另检测了20份华枝睾吸虫病人及30份正常人血清作为对照,各有1份为阳性。与Dot-ELISA比较,两者的敏感性及特异性相似,然而快速Dot-ELISA具有快速(整个反应可在0.5h内完成)、简便、试剂用量少等特点,尤其在基层具有一定的推广应用价值。     

微波辐射ELISA诊断日本血吸虫病的初步研究

目的：探索高效快速的血吸虫病诊断方法。方法：用微波辐射ＥＬＩＳＡ和快速ＥＬＩＳＡ同步检测各期日本血吸虫病患者血清１１８份,健康人血清６１份,并殖吸虫病犬血清１２份。结果：两种方法的血吸虫病患者血清抗体阳性检出率分别为８８．１％（１０４／１１８）和９１．５％（１０８／１１８）,无显著性差异。健康人血清抗体假阳性分别为２份（３．３％）和１份（１．６％）,亦无显著性差异;交叉反应均无假阳性。结论：微波辐射ＥＬＩＳＡ具有与快速ＥＬＩＳＡ类似的敏感性和特异性,但前者具有快速获得检测结果的优点。     

日本血吸虫可溶性尾蚴抗原早期诊断价值的研究

目的　确定日本血吸虫可溶性尾蚴抗原作为血吸虫病早期诊断检测用抗原的应用价值。方法　从感染日本血吸虫的钉螺收集尾蚴 ,制备可溶性尾蚴抗原 (SCA) ,建立应用 SCA为抗原检测家兔血清抗体的 ELISA法 ,并以此法检测 2 8只低度感染日本血吸虫家兔的感染前和感染后不同时期的血清 ,并与常规 SEA-ELISA法比较。结果　用 SCA检测时 ,感染后 15 d有 2 /2 8只家兔血清开始出现抗 SCA抗体阳性 ,2 0 d已有 2 0只阳性 ,阳性率为 71.4% ,3 0 d 2 8只全部阳性 ,阳性率为10 0 % ,而抗 SEA抗体在感染后 2 0 d开始出现 ,3 4d有 2 1只阳性 ,阳性率为 75 .0 % ,3 7d阳性率为10 0 %。平均出现抗体的时间 SCA-ELISA和 SEA-ELISA分别为 (2 1.2 5± 4.0 7) d和 (3 1.5 0±5 .12 ) d,前者比后者早 10 d。结论　用日本血吸虫可溶性尾蚴抗原检测血吸虫病具有早期诊断的价值     

平行检测血清和尿液中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

应用ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ平行检测血吸虫病人的血清和尿样（浓缩２０倍）中日本血吸虫肠相关趋阴极循环抗原（ＣＣＡ）。８１例急性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性率分别为９６．３０％和６６．６７％,而血清和尿样组合检测的阳性检出率提高至１００％。１０９例慢性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性检出率分别为７７．０６％和１０．０９％,组合检测的阳性检出率没有提高。１００份健康人的血清和尿样的假阳性率均为０％。５４例华支睾吸虫病患者的血清和尿样的交叉反应率分别为９．４３％和０％。４８例钩虫病患者的血清和尿样的交叉反应率均为０％。     

快速免疫色谱测试法诊断恶性疟的初步观察

目的：评价快速免疫色谱测试法（ＩＣＴ）在我国疟区门诊疟疾的适用性。方法：以镜检结果为对照，用ＩＣＴ方法检测门诊“四热”病人中的恶性疟。结果：ＩＣＴ检测恶性疟的敏感性和特异性分别为９４．７％和９０．３％，与间日疟无交叉，检测不同性别和民族人群阳性率间的差别无显著意义。结论：ＩＣＴ较镜检诊断恶性疟更为快速且简便，更适于在疟区门诊应用。     

用多聚酶链反应诊断弓形虫病

根据本实验室筛选出的弓形虫(ZS_2株)特异DNA克隆片段的部分顺序分析的数据,设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立多聚酶链反应诊断弓形虫病的方法。不同来源的弓形虫株和7例畸形胎儿DNA经体外基因扩增,扩增产物经电泳检测,均出现特异的扩增条带。对42例肝炎综合症的婴儿和33例不良生育史的孕妇的外周血白细胞DNA检测,分别为6例和4例阳性。50例正常人外周血白细胞DNA检测均为阴性。对扩增产物进行Southern印迹分析,以~(32)P标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针,能与阳性病例特异的扩增条带杂交,而不与阴性样品的扩增产物杂交。本法并与其它检测方法的结果相比较,具高度特异、敏感且快速的优点。     

用McAb-AST对犬内脏利什曼病早期诊断的初步研究

本文报道实验感染杜氏利什曼原虫小犬10只,在感染前及咸感后5、12、20、40d,分别收集血清,用McAb-AST检测血清内循环抗原。试验结果可见小犬感染后5d即出现阳性反应,表明已可检测出其血清内循环抗原,并随着时间的加长,阳性反应程度有所增加。初步建立了犬利什曼病的一种新的早期诊断方法,简便易行,易于推广应用。     

日本血吸虫病肝纤维化血清学诊断与超声诊断的比较研究

目的为探寻能早期、敏感、全面反映日本血吸虫病肝纤维化的非创伤性诊断指标，对血清肝纤维化诊断及超声诊断进行比较。方法采用放射免疫法对83例粪检阳性的日本血吸虫病患者和83例正常人群进行血清肝纤维化指标（HA、PCⅢ和LN）的检测和腹部超声检查。结果血清肝纤维化诊断在患者组的总阳性率为79．5％，正常人中仅为6％，两者具显著差异；超声诊断在两组中的检出率则分别为83．1％和10．8％，卡方检验亦具显著差异（P＜0．01）。比较两种诊断方法在患者组中的阳性率无显著差异（P＞0．05），其结果的符合率为74．7％，区两种诊断方法的主要参数指标与肝实质分级呈正相关。结论两种方法在日本血吸虫病肝纤维化的诊断具较高敏感性及相关性，结果与肝纤维化程度密切相关，联合运用能进一步提高检测的敏感性，全面了解肝纤维化的程度及活动情况，对早期诊断和防治具重要意义。     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR技术检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR技术检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp～320bp的特定Pf60.1基因片段;而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片段的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。