大鼠肺巨噬细胞内毒素耐受性与TLR4 mRNA表达的变化

Ｇ- 菌感染致急性肺损伤 ,主要是由于内毒素 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)活化炎性细胞释放大量炎症因子。不同个体感染Ｇ- 菌后临床表现轻重不一 ,说明个体对ＬＰＳ的反应性有相差 ,即对ＬＰＳ耐受性 (Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ)存在差异。研究表明ＬＰＳ耐受性与其靶细胞信号转导的跨膜受体ＴＬＲ4(Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ 4)的结构与功能及表达量有关[1 ,2 ] ,但尚存争议[3] 。我们通过观察大鼠肺巨噬细胞ＬＰＳ耐受性及ＴＬＲ4ｍＲＮＡ表达的变化 ,以说明ＬＰＳ耐受性与ＴＬＲ4表达量相关的可能性。1　材料与…     

急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞白细胞介素18mRNA的表达及其意义

目的：动态观察急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞白细胞介索-18(IL-18)mRNA表达的变化,初步探讨IL-18mRNA的变化与ALI发生、发展的关系。方法：采取创伤性休克手段建立ALI大鼠动物模型,采用RT-PCR方法,检测肺泡巨噬细胞IL-18mRNA的表达。结果：正常大鼠肺泡巨噬细胞表达一定水平的IL-18mRNA,而遭受创伤性休克打击后,肺泡巨噬细胞IL-18mRNA表达迅速升高,4h达高峰,8h后即恢复到正常水平。结论：正常大鼠肺泡巨噬细胞可表达一定水平的IL-18mRNA,在ALI早期,IL-18mRNA表达异常增高,可能引起过度炎症反应,从而促进ALI的发生。     

地塞米松对肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响

目的:探讨地塞米松(DEX)对失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠45只,复制失血性休克诱导的急性肺损伤模型前经鼻分别滴入PBS、PBS+20ug DEX,阴性空白对照组经鼻滴入PBS后仅与予心脏穿刺,分别于0h、1h、2h、4h和6h时取出小鼠的肺组织.通过HE染色法检测肺组织病理,免疫荧光双染检测肺巨噬细胞TLR4表达.结果:失血性休克后6h内肺巨噬细胞TLR4的表达呈上升趋势并于6h时达到峰值,DEX干预组可见显著抑制肺巨噬细胞TLR4表达.结论:地塞米松能显著抑制失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达,改善肺部病理改变.     

山莨菪碱对LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺组织TNFα,IL—8表？…

目的 探讨山莨菪碱（６５４－２）对内毒素致伤急性损伤（ＡＬＩ）大鼠的防治作用和可能机制。方法 观察６５４－２对ＡＬＩ大鼠血气分析和肺组织损伤的影响。并采用原位杂交法检测肺组织ＴＮＦα、ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达和ＥＬＩＳＡ检测肺组织匀浆ＴＮＦα、ＩＬ－８含量的改变。结果 ６５４－２干预后可减轻ＡＬＩ大鼠肺组织损伤程度，减少肺组织ＴＮＦα、ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达及其肺组织匀浆含量。结论 ６５４－２可能通过抑     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的：探讨脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)信号转导分子，TLR4(Toil-like receptor 4,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法：小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织，HE染色观察病理改变，RT-PCR法检测肝组织，TLR4 mRNA的表达。结果：腹腔注射LPS后24h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死，肝组织TLR4 mRNA的表达在注射LPS后6，12h明显抑制，24h则基本恢复。结论：LPS致肝损伤呈时间依从性；LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用。。     

宣白承气汤对急性肺损伤大鼠肺组织脂多糖结合蛋白和Toll样受体4 mRNA表达的影响

目的 探讨宣白承气汤对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺组织脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP）和Toll样受体4（toll-like receptor 4, TLR4）mRNA表达的影响。方法 健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、宣白承气汤组共4组,每组8只。模型组与各治疗组大鼠采用尾静脉注射LPS（6 mg/kg）复制ALI模型。正常组和模型组给等容积生理盐水ig,地塞米松组给药为5 mg/kg ip,宣白承气汤组给药为7 560 mg/kg ig。采用实时荧光定量PCR法测定肺组织LBP、TLR4 mRNA表达。免疫组化ABC法测定肺组织TLR4蛋白表达。观察肺组织病理变化。结果 与正常组比较,模型组的支气管LBP mRNA、TLR4mRNA和蛋白染色阳性细胞面积率表达均升高（P<0.05）。与模型组比较,宣白承气汤组TLR4 mRNA和蛋白染色阳性细胞面积率表达均降低（P<0.05）。病理学观察,模型组大鼠肺泡腔内充满炎性渗出物和出血,宣白承气汤组大鼠肺组织病理改变轻于模型组,肺细支气管轻度间质性炎症。结论 宣白承气汤能减轻内毒素致ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其降低肺组织TLR4 mRNA和蛋白表达有关。     

IL-6和IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞CD14清道夫受体mRNA表达的影响

目的：探讨感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的分子机制。方法：通过体外培养肺泡巨噬细胞，施加IL-6和IL-10刺激，应用RT-PCR方法观察肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体（SR）mRNA的表达变化。结果：在基因转录水平，IL-6对CD14表达呈时间-剂量依赖性上调，对SR的表达呈进行性下调；IL-10对SR表达呈时间-剂量依赖性上调，下调CD14表达。结论：促炎因子IL-6对肺泡巨噬细胞SR表达下调及CD14表达上调可能是感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御转化为致炎效应细胞的机制之一，抗炎因子IL-10可能对这一转化过程起到一定的抑制作用。     

A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究

目的通过分析A族链球菌(GAS)感染巨噬细胞后TLR2及TLR4的活化情况,以此来研究GAS感染后产生炎症反应的信号通路,为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。方法 GAS及热灭活GAS以感染复数(MOI)为100∶1感染小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞后1,2,4,6 h,提取总RNA采用real-time PCR技术检测TLR2/4的表达情况;同时GAS及热灭活的GAS注射C57小鼠腹腔,24 h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白,利用Western blot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进行分析。结果巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后1 h活化不明显,但作用2 h后TLR2及TLR4表达明显升高(P<0.05),4 h时达到高峰,6 h后开始降低。热灭活GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与GAS感染比较未见到统计学差异(P>0.05),但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异(P<0.05)。结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2及TLR4受体,其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活,TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。     

内毒素对大鼠肺组织CXCR4及白介素-18表达影响的研究

目的:研究内毒素致大鼠肺损伤,观察肺组织CXCR4及白介素-18(IL-18)表达的变化及可能作用。方法:用内毒素诱发大鼠急性肺损伤(ALI),免疫组织化学法检测肺组织中CXCR4及IL-18蛋白水平的表达情况。结果:正常大鼠肺组织中CXCR4及IL-18蛋白呈阴性或弱阳性表达,LPS作用后,CXCR4及IL-18蛋白的表达随着损伤严重程度的增加而增强。结论:CXCR4可能在大鼠急性肺损伤的发病中发挥一定的作用。     

失血性休克复苏后不同时间注射内毒素对大鼠肺损伤的影响

目的:观察失血性休克大鼠复苏后不同时期静脉注射内毒素对肺组织炎性介质的影响,探讨如延迟休克复苏后感染的发生时间能否降低急性肺损伤(ALI)的程度。方法:36只SD大鼠随机分为生理盐水组和内毒素组,2组均复制重症失血性休克模型,于休克90min后液体复苏,内毒素组、生理盐水组分别于复苏后2、8、16h静脉注入内毒素(250μg/kg体重)或等体积生理盐水,注射2h后取材制备肺组织匀浆,检测并比较2组大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,同时测定肺湿重/干重比值(W/D)。结果:内毒素组复苏后各时间点肺组织匀浆中TNF-α、IL-6含量及肺湿重/干重比值(W/D)均较生理盐水组相应时间点显著升高(P<0.05~0.01);内毒素组内于2h各项指标明显高于8、16h,在16h水平最低(P<0.01)。结论:失血性休克复苏后注射内毒素可加重大鼠ALI的程度,延迟休克复苏后感染的发生时间,可以降低大鼠ALI的发生。     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠血清细胞因子IL-18,IL-10的影响

目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对急性肺损伤小鼠血清IL-18,IL-10的影响.方法 90只健康昆明小鼠,随机分为5组:①急性肺损伤组:腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS);②预防组:腹腔注射DATS 7 d后注射LPS;③治疗组:腹腔注射LPS后30 min注射DATS;④DATS组:腹腔注射DATS 7 d;⑤对照组:腹腔注射等量生理盐水.光镜观察12h点肺组织形态学改变.测定血清中IL-18及IL-10在2h和6h含量.结果 DATS预防组肺泡间渗出及炎性细胞浸润较ALI组明显减轻.其血清中IL-18含量均明显低于ALI组(P<0.01),IL-10含量均明显高于ALI组(P<0.01).结论 预防性应用DATS可减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应.并能抑制LPS诱导的小鼠血清中炎性细胞因子IL-18的生成,而促进抗炎性细胞因子IL-10的生成.     

霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾组织 TLR4、IL-18表达的影响

目的：探讨霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾脏Toll样受体-4（ TLR4）及白细胞介素-18（ IL-18）表达的影响。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组（n＝12）、模型组（n＝11）、治疗组（n＝11）,后2组制作糖尿病肾病模型。治疗组每天给予霉酚酸酯15 mg／kg灌胃,余2组给予溶媒灌胃。于12周末采用HE染色、PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组化、Western blot检测肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠肾小球体积增大,基底膜增厚,炎症细胞浸润明显,而治疗组较模型组有所改善。3组大鼠肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达差异有统计学意义,其中模型组大鼠肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达均高于对照组（P＜0．05）,治疗组上述2指标较模型组下降（ P＜0．05）。结论：霉酚酸酯可能通过下调肾脏TLR4、IL-18蛋白的表达对糖尿病肾病大鼠的肾脏起保护作用。     

地塞米松和TLR4在淡水淹溺型大鼠急性肺损伤中的作用

目的:探讨地塞米松和TLR4在大鼠淡水淹溺型肺损伤中的作用?方法:72只大鼠随机分为对照组?淹溺组和地塞米松组,通过淡水气道内吸入方法建立大鼠淡水淹溺型急性肺损伤模型,观察各时间点血气分析,检测0.5?2.0?4.0和8.0 h血清TNF-α?IL-6的含量以及肺组织湿/干重比值(W/D值)?MPO和TLR4 mRNA相对含量?结果:大鼠淡水淹溺型急性肺损伤模型建立成功;与对照组比较,淹溺组PaO2灌入淡水后急剧下降,随后逐渐回升,但仍维持较低水平?血清炎症因子TNF-α ?IL-6 分别在0.5?2.0 h开始表达,肺组织W/D值?MPO和TLR4 mRNA 含量分别在淹溺后0.5?2.0和8.0 h升高?地塞米松可抑制炎症因子和TLR4 mRNA表达,减轻肺损伤?结论:TLR4参与淡水淹溺型大鼠肺损伤,地塞米松通过抑制其表达可减轻肺损伤?     

油酸-内毒素序贯致新生大鼠急性肺损伤IL-18水平的变化

目的:探讨油酸-内毒素序贯致伤新生大鼠的IL-18水平,在急性肺损伤中的作用。方法:采用油酸加内毒素脂多糖腹腔注射新生大鼠致肺损伤模型,在油酸致伤后4h实施内毒素第2次致伤,收集血浆检测IL-18水平,同时设立单剂量内毒素致伤组和生理盐水为对照组,每组12只。结果:油酸-内毒素致伤新生大鼠血浆IL-18水平均显著高于单剂量内毒素致伤组和生理盐水对照组(P<0.01)。结论:油酸-内毒素组IL-18水平显著高于单剂量内毒素致伤组和生理盐水对照组,提示致炎因子IL-18可能在急性肺损伤的发生和发展中起重要的作用。     

LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响

目的探讨脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein, LBP)多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响,为LBP多抗治疗急性肺损伤提供实验依据.方法 Wistar 雄性大鼠40只,随机分段等分为5组,A组为正常对照组; B组为LPS处理组;C组为LPS注射前30 min加LBP多抗预处理组;D组为LPS和LBP多抗同时处理组;E组为LPS注射后30 min加LBP多抗处理组.分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,用RT-PCR方法测定其IL-10、IL-18 mRNA表达.结果 LPS显著增加IL-10、IL-18 mRNA表达(B组);LBP多抗能显著降低二者的表达,尤以预处理组(C)更明显.结论 LBP多抗能显著降低内毒素急性肺损伤炎症因子的IL-10、IL-18表达.     

含葡聚糖肺表面活性物质对脂多糖诱发的急性肺损伤大鼠肺功能的影响

目的验证葡聚糖在机体内能否增强肺表面活性物质(PS)对急性肺损伤的疗效。方法大鼠20只,经气管注入脂多糖(LPS)制成肺损伤模型后,随机分为二组:肺表面活性物质组(PS组),气管内注入PS(6mg/mL)2mL/kg;含葡聚糖肺表面活性物质组(DPS组),经气管注入含1%葡聚糖的PS(6mg/mL)2mL/kg。观察期间行定压式人工通气。结果治疗前PS组和DPS组PaO2无明显差异[(86.4±10.9)mmHg比(75.1±14.7)mmHg,P>0.05]。行替代疗法后两组大鼠的PaO2均显著增加,其中DPS组的PaO2增加值大于PS组(P<0.05)。治疗前两组大鼠PaCO2无明显差异[(39.4±8.4)mmHg比(48.1±11.0)mmHg,P>0.05],行替代疗法后两组大鼠的PaCO2均有所下降,但PS组的下降幅度较小,并且在60min时有回升。DPS组的PaCO2下降幅度大于PS组(P<0.01)。替代疗法后两组大鼠的胸肺顺应性有所改善,但组间差异无统计学意义。结论葡聚糖可增强PS替代疗法对急性肺损伤大鼠的疗效。     

戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响

【摘要】 目的 探讨盐酸戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组（NS组）,内毒素性脑损伤模型组（LPS组）,低剂量戊乙奎醚干预组（PL组）,高剂量戊乙奎醚干预组（PH组）4组,每组各10只,实验大鼠注射内毒素4h后处死,留取脑组织标本。光镜下观察脑组织病理变化,RT PCR法检测CD 14和TLR4 mRNA表达,ELISA法测定TNF a的含量。结果 光镜下LPS组脑细胞损伤严重,PL组、PH组与LPS组对比脑损伤减轻。与NS组相比较,LPS组、PL组及PL组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TLR4和CD14 mRNA表达水平降低（P＜005）。与NS组相比较,TNF α含量升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TNF α含量降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TNF α降低（P＜005）。结论 盐酸戊乙奎醚预处理可减轻大鼠内毒素的脑损伤,机制可能与降低CD14及TLR4mRNA的表达,阻断炎症信号传导通路,减轻炎症介质的释放有关。     

中介素1-53对急性肺损伤大鼠SP-A及IL-18的影响

目的探讨脂多糖致急性肺损伤大鼠肺泡灌洗液（BALF）中表面蛋A（pulmonary surfactant associated protein A,SP-A）浓度及肺组织单核巨噬细胞中白介素18（interleukin 18,IL-18）的表达水平及中介素1-53（intermedin 1-53．IMD1-53）的影响。方法 将36只雄性Vistar大鼠随机分为正常组（A组）、急性肺损伤组（B组）、中介素1-53干预组（C组）,于2h,4h分别测定血气分析,后处死大鼠,测定肺组织湿／干比（W／D）、ELISA法检测BALF中SP-A的浓度、免疫组化法检测肺单核巨噬细胞内IL-18表达及各时间点肺组织病理变化。结果 与A组比较,B组动脉血PO2和BALF中SP-A浓度降低显著（P〈0．05）,湿干比及单核巨噬细胞中IL-18表达增加（P〈0．05）,肺组织充血水肿明显。与C组相比,上述改变得以逆转,肺损伤程度明显减轻（P〈0．05）。结论中介素1-53可通过抑制SP-A的减少和IL-18的生成在急性肺损伤早期起到一定的保护作用。