PPAR激动剂罗格列酮对人子宫肌瘤细胞的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROT)对人子宫肌瘤的增值抑制作用及分子机制。方法给予原代培养的子宫肌瘤不同浓度的罗格列酮处理,以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定细胞生长抑制率;以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PPARγm RNA以及凋亡基因Bax、Bcl-2在子宫肌瘤细胞中的表达及罗格列酮对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响。结果罗格列酮可抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。RT-PCR提示罗格列酮可促进PPARγm RNA、Bax表达,抑制Bcl-2表达。结论过氧化物酶增殖物激活受体激动剂罗格列酮抑制子宫肌瘤的增值可能是通过上调PPARγ、Bax的表达及下调Bcl-2的表达来发挥作用的。     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞VCAM-1表达的影响

目的:探讨糖基化终产物 (AGEs))对人单核细胞源树突状细胞(DCs)血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响?方法:用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L和重组人白细胞介素-4(rhIL-4) 20 μg/L的RPMI1640培养,使其分化为DCs,加入糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA) 200 μg/ml,采用RT-PCR和Western blot法,观察AGE-HSA对DCs VCAM-1 mRNA和蛋白表达的影响,同时检测培养液上清中IL-12和IL-18的浓度?结果:与空白对照相比,AGE-HSA可上调DCs VCAM-1 mRNA和蛋白的表达(P < 0.05),并且明显促进了DCs IL-12和IL-18的分泌(P < 0.05)?AGE-HSA干预组与空白对照组相比差异无统计学意义(P > 0.05)?结论:AGEs能够上调DCs VCAM-1的表达,并且促进DCs IL-12和IL-18的分泌,这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一?     

罗格列酮经PPARγ受体介导HL-60细胞成熟分化

目的：研究人过氧化物酶体增殖物激活受体1（PPARγ）在白血病HL-60细胞分化中的作用．方法：采用Li—pofectamine2000脂质体进行HL-60细胞质粒转染．实验分单纯HL-60细胞培养组,空载体pIRES2-EGFP转染组,10μmol／L罗格列酮干预组和10μmol／L罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组．荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达．流式细胞仪检测转染效率,并对转染细胞成熟粒．单细胞特异性标志CD11b和CD14的表达进行分析．结果：转染的HL-60细胞可见绿色荧光表达,phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染效率为55％．流式细胞仪检测结果表明,罗格列酮干预组和罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组的CD11b＋和CD14＋细胞检出率均显著高于未转染细胞组与空载体转染组（P〈0．05）,且罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染具有协同效应;而未转染细胞组与空载体转染组2种表型细胞百分率差异均无统计学意义（P〉0．05）．结论：罗格列酮可通过激活PPARγ促进HL-60细胞向粒-单细胞成熟分化,有望成为治疗白血病的候选药物．     

罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响.方法 在SKOV3细胞培养液中加入不同浓度RSG(0.1、1.0、10和100 μmol/L),采用MTT法测定RSG对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法 检测干预前后细胞中PPARγ、c-myc的mRNA和蛋白水平变化.结果 MTT法结果 显示,RSG可抑制SKOV3细胞生长,并呈明显的浓度和时间依赖方式.流式细胞术结果 显示,RSG能明显诱导SKOV3细胞凋亡,在10、100 μmol/L RSG作用于SKOV3细胞24 h后,凋亡率分别为45.75%和51.97%,均明显高于对照组(6.82%,P<0.05);并使细胞周期阻止于G1期,呈浓度依赖方式.Hoechst33258荧光染色显示RSG处理后的SKOV3细胞中出现凋亡小体.免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果 显示,人卵巢癌SKOV3细胞表达PPARγ,RSG作用于SKOV3细胞24 h后PPARγ的mRNA和蛋白表达水平上调,而c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调.结论 RSG具有抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长和诱导凋亡作用,使细胞周期阻滞于G1期;并通过活化PPARγ,下调c-myc的mRNA和蛋白表达水平.     

罗格列酮、辛伐他汀对动脉粥样硬化兔内皮功能的影响

目的探讨罗格列酮辛伐他汀对动脉粥样硬化兔内皮功能的影响。方法40只日本大耳白兔随机分为五组,正常对照组、高脂模型组、罗格列酮组、辛伐他汀组、联合用药组,每组8只。A组(正常对照组):普通颗粒饲料喂饲150g,日二次,10周。B组(高脂模型组):高脂饲料(1%胆固醇+8%猪油+普通颗粒饲料)150g,日二次,10周。C组(罗格列酮组):高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服罗格列酮0.5mg/kg/日。D组(辛伐他汀组):高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服辛伐他汀2.0mg/kg/日。E组(联合用药组):高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服罗格列酮0.5mg/kg/日+辛伐他汀2.0mg/kg/日。实验结束后获取血浆和主动脉全长标本进行生化和病理分析。结果高脂模型组、各用药组与正常对照组相比血清血脂、内皮素(ET-1)水平增高,一氧化氮(NO)浓度降低,主动脉内膜不同程度脂质斑块形成,模型组最明显。罗格列酮组、辛伐他汀组、联合用药组三组ET-1浓度明显低于高脂模型组,NO水平高于高脂模型组,P<0.01,联合用药组效果最显著;四组主动脉可见不同程度的脂质斑块形成,其斑块/内膜面积比高脂模型组>罗格列酮组>辛伐他汀组>联合用药组,P<0.01。结论罗格列酮、辛伐他汀通过改善内皮功能、调脂等各自不同途径防治动脉硬化的发生发展,并具有协同作用。     

罗格列酮、辛伐他汀对动脉粥样硬化兔内皮功能的影响

目的 探讨罗格列酮辛伐他汀对动脉粥样硬化兔内皮功能的影响.方法 40只日本大耳白兔随机分为五组,正常对照组、高脂模型组、罗格列酮组、辛伐他汀组、联合用药组,每组8只.A组(正常对照组)普通颗粒饲料喂饲150g,日二次,10周.B组(高脂模型组)高脂饲料(1%胆固醇+8%猪油+普通颗粒饲料)150g,日二次,10周.C组(罗格列酮组)高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服罗格列酮0.5mg/kg/日.D组(辛伐他汀组)高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服辛伐他汀2.0mg/kg/日.E组(联合用药组)高脂饲料喂饲10周,从喂饲高脂饲料起,给予口服罗格列酮0.5mg/kg/日+辛伐他汀2.0mg/kg/日.实验结束后获取血浆和主动脉全长标本进行生化和病理分析.结果 高脂模型组、各用药组与正常对照组相比血清血脂、内皮素(ET-1)水平增高,一氧化氮(NO)浓度降低,主动脉内膜不同程度脂质斑块形成,模型组最明显.罗格列酮组、辛伐他汀组、联合用药组三组ET-1浓度明显低于高脂模型组,NO水平高于高脂模型组,P＜0.01,联合用药组效果最显著;四组主动脉可见不同程度的脂质斑块形成,其斑块/内膜面积比高脂模型组＞罗格列酮组＞辛伐他汀组＞联合用药组,P＜0.01.结论 罗格列酮、辛伐他汀通过改善内皮功能、调脂等各自不同途径防治动脉硬化的发生发展,并具有协同作用.     

罗格列酮对兔动脉粥样硬化的预防作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体（PPARs）激动剂罗格列酮对兔动脉粥样硬化的发生有无抑制作用。方法 24只新西兰大白兔随机分为3组。正常饮食组、高脂饮食组、高脂饮食＋罗格列酮治疗组。在0、8周时测定血清中血脂、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）浓度。免疫组化染色测定斑块处巨噬细胞数量。图像分析观察主动脉斑块／内膜面积比。结果 与高脂饮食组相比,罗格列酮对血脂无明显影响,但可使TNF-α、IL-6浓度下降、斑块处巨噬细胞数量减少和主动脉斑块／内膜面积比率显著降低（P〈0．001）。结论 罗格列酮对兔动脉粥样硬化有预防作用。     

罗格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外抗肿瘤作用

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长影响,以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力. 方法:噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDA-MB-231细胞体外生长抑制作用;应用PPARγ拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖影响与PPARγ受体关系;流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC和TUNEL法检测细胞凋亡. 结果:罗格列酮干预下MDA-MB-231细胞G0/G1期比例上升,而S期比例下降,呈量-效关系抑制其生长,IC50=5.2 μmol/L. PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用(P＜0.05);100 μmol/L罗格列酮还可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与Annexin V-FITC法检测的结果一致[(16.6±2.7)%](P＞0.05). 结论:罗格列酮通过PPARγ介导,使MDA-MB-231细胞G1期阻滞而抑制其增殖,高浓度时还可诱导其发生凋亡,罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

罗格列酮对抵抗素转染的HepG2细胞PPARγ mRNA表达和活性氧的影响

目的探讨罗格列酮对抵抗素基因转染的HepG2细胞转录因子PPARγ mRNA表达和活性氧的影响。方法用微量化的葡萄糖氧化酶法对抵抗素基因转染诱导的胰岛素抵抗细胞进行鉴定,加用罗格列酮干预,并和正常HepG2细胞进行对照,用流式细胞仪检测细胞活性氧和RT-PCR法检测PPARγ mRNA表达。结果抵抗素基因转染诱导了肝性胰岛素抵抗的细胞模型,罗格列酮对抵抗素转染的HepG2细胞PPARγ mRNA表达有显著的抑制作用,对活性氧含量改变影响不明显。结论糖尿患者长期服用罗格列酮可能对肝脏PPARγ mRNA的表达有抑制作用。     

Peroxisome proliferator-activated receptor α agonist attenuates oxidized-low density lipoprotein induced immune maturation of human monocyte-derived dendritic cells

Accumulating evidence suggests that the Thl immune .response induced by various antigens such as oxidized low density lipoprotein （ox-LDL） and heat shock proteins （HSPs） play a key role in the process of atherosclerosis.1Dendritic cells （DCs） are the most potent antigen-presenting cells （APCs） in the body with the unique ability to initiate a primary immune response to certain antigens by the activation of ＂naive＂ T cells.2 The maturation of DC with the upregulation of costimulatory molecules such as CD83, CD40, CD86, and major histocompatibility complex （MHC） class molecules such as human leukocyte antigen （HLA）-DR, is required for DC to activate T cells. Pathologic studies have shown that immature DCs are present in normal arterial while abundant mature DCs clustered with T cells could be visualized in atherogenic vessels suggesting that DC 3 maturation is linked to the progression of atherosclerosls. Peroxisome proliferator-activated receptors （PPARs） a, one member of the family of PPARs, was found to have favorable effects on slowing the progression of atherosclerosis and reducing the risk of coronary heart disease in high-risk patients independent from their metabolism effects.4＇5 Furthermore, PPAR-α is also expressed on monocytes and monocyte-derived DCs.6 The effects of PPAR-α on DCs maturation and immune function remain unknown now, we therefore observed the effects of fenofibrate, a PPAR-α agonist, on the maturation and immune function of oxidized LDL-treated DCs in this study.     

罗格列酮与阿尔茨海默病

随着人类步入老龄化社会,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病率不断增加,但其发病机制仍不明确,缺乏有效的治疗手段。近年来研究发现AD的患病风险与2型糖尿病具有一定相关性。有证据表明,治疗2型糖尿病的噻唑烷二酮类氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂罗格列酮可以改善AD患者和AD动物模型中与此疾病相关的病理变化和学习记忆功能。本文对以上内容和罗格列酮对AD的作用机制进行综述。     

HSP65-MUC1／HSP65抗体免疫复合物对人树突状细胞的活化作用

目的：探讨免疫复合物能否诱导树突状细胞的活化与成熟。 方法：用免疫复合物刺激来自人外周血经细胞因子IL-4和GM-CSF诱导的未成熟的树突状细胞, 观察免疫复合物对未成熟树突状细胞的活化与成熟的影响。 结果：HSP65-MUC1/HSP65免疫复合物与HSP65-MUC1抗原或HSP65抗体相比较,能够显著地活化树突状细胞,使其表面的协同刺激分子CD86的表达显著上调,为激活细胞毒性T淋巴细胞提供第二信号,这一结果说明免疫复合物具有交叉递呈的作用;同时,加入免疫复合物的树突状细胞培养上清中IL-6和TNFα分泌量明显增加。结论： 免疫复合物能够诱导树突状细胞的活化与成熟,免疫复合物具有交叉递呈的作用。     

Anti-P-selectin lectin-EGF domain monoclonal antibody inhibits the maturation of human immature dendritic cells

Anti-P-selectin lectin-EGF domain monoclonal antibody inhibits the maturation of human immature dendritic cells     

吡格列酮对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体((peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂吡格列酮防治痛风性关节炎的可行性及机制.方法:于大鼠单侧踝关节腔内注射1 mg (20 mg/ml×50 μl)尿酸钠晶体(monosodium urate,MSU)建立急性痛风性关节炎模型.以RT-PCR法检测PPARγ在关节炎滑膜0、4、8、24和48 h表达的动态变化.通过比较2、4、6、8、10、12、24和48 h关节炎症、肿胀、功能障碍指数和病理变化观察口服不同剂量(4 mg·kg-1·d-1、20 mg·kg-1·d-1)吡格列酮对关节炎的影响.结果:关节滑膜PPARγ表达呈时间依赖方式增加,在关节炎48 h后尤为明显.在诱发模型24 h内,吡格列酮对关节炎未见明显作用;而在48 h大剂量吡格列酮可显著减低关节炎的炎症、肿胀、功能障碍指数和滑膜炎性细胞浸润,但小剂量疗效不明显.结论:大剂量吡格列酮可显著减轻大鼠急性痛风性关节炎.关节炎后期PPARγ表达增加有利于药物起效和痛风的自发缓解.     

过氧化物酶增殖物激活受体γ抑制大鼠肝星状细胞中转化生长因子-β1诱导的结缔组织生长因子表达

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对大鼠肝星状细胞(HSC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的结缔组织生长因子(CTGF)表达的抑制作用.方法 常规培养大鼠HSC,预先给予或不给予PPARγ特异性拮抗剂GW9662处理,再经系列浓度的PPARγ天然配体(15-d-PGJ2)或合成配体(GW7845)及TGF-β1序贯作用后,通过半定量RT-PCR及Western-blotting分析CTGF表达状况,透射电镜观察HSC形态学变化.结果 15-d-PGJ2和GW7845可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达(同时在转录和转录后水平),且PPARγ配体对CTGF表达的抑制作用可被GW9662部分或完全逆转,说明此种抑制效应确由PPARγ所介导;电镜观察亦显示HSC由活化态向静息态的形态学转变.结论 PPARγ活化可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达,提示PPARγ可作为逆转肝纤维化治疗的新的有效靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ)activation on transforming growth factor betal(TGF-β1)-induced connective tissue growth factor(CTGF)expression in rat hepatic stellate cells(HSCs).Methods Cultured HSCs with or without PPARγ-specific antagonist GW9662 treatment prior to the addition of an increasing amount of PPARγ natural ligand(15-d-PGJ2)or synthetic ligand(GW7845)were stimulated with TGF-β1.The mRNA and protein levels of CTGF expression were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blotting,respectively.The morphological changes of the HSC were obgerved by electron microscope.Results 15-d-PGJ2 and GW7845 significantly inhibited TGF-β1-induced CTGF expression at both mRNA and protein levels in HSCs, and the inhibitory effect was dramatically,if not completely,abolished by pretreatment with GW9662,suggesting that the inhibition was mediated by PPARγ. Morphological observation revealed that PPARγactivation caused obvious changes of HSCs from activated to quiescent phenotypes.Conclusion PPARγ ligand shows potent inhibitory effect on TGF-β1-induced CTGF expression in rat HSCs,suggesting its potential as a candidate agent for treatment and prevention of hepatic fibrosis.     

罗格列酮改善脂多糖诱导慢性低度炎症大鼠的卵巢功能异常

目的 观察慢性低度炎症大鼠卵巢组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）的表达,并初步探究PPAR-γ激动剂罗格列酮对慢性低度炎症诱导的卵巢功能异常的影响。方法 以腹腔注射脂多糖（LPS）诱导的慢性低度炎症大鼠为动物模型。将200只大鼠随机分为对照组（NS组）和慢性低度炎症组（LPS组）,每组100只,分别予腹腔注射生理盐水和LPS干预。在发情周期不同阶段（发情前期、发情期、发情后期和发情间期）,通过检测2组大鼠血清中雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和抗苗勒管激素（AMH）评估卵巢功能,利用蛋白质印迹法检测卵巢组织中PPAR-α、PPAR-δ和PPAR-γ的表达情况。将2组各80只大鼠分别随机分为2个亚组,每个亚组40只大鼠,分别予生理盐水和罗格列酮灌胃干预。灌胃14 d后,观察各亚组大鼠在发情周期不同阶段卵巢组织中促炎细胞因子[白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α（TNF-α）]水平和卵巢功能。结果 与NS组相比,在发情周期不同阶段,LPS组大鼠血清中E2和AMH水平均下降（P均<0.05）,FSH和LH水平均升高（P均<0.05）;卵巢组织中PPAR-γ表达均降低（P均<0.05）,而PPAR-α和PPAR-δ表达无明显变化（P均>0.05）。在发情周期不同阶段,LPS诱导的慢性低度炎症大鼠在口服罗格列酮后卵巢组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低（P均<0.05）,并且LPS诱导血清中降低的E2、AMH和升高的FSH、LH均得以改善（P均<0.05）。结论 PPAR-γ激动剂罗格列酮可减轻LPS诱导的大鼠慢性低度炎症反应,并改善卵巢功能。     

Rapamycin Modulates the Maturation of Rat Bone Marrow-derived Dendritic Cells

The purpose of the study was to observe the effect of rapamycin （RAPA） on the differentiation and maturation of rat bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） in vitro. BMDCs from Wistar rats were cultured with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 in the presence or absence of RAPA （20 ng/mL）, and stimulated with lipopolysaccharide （LPS） for 24 h before cells and supernatants were collected. Surface phenotype of BMDCs was flow-cytometrically detected to determine the expression of maturation markers, MHC class Ⅱ and CD86. Supernatants were analyzed for the production of IL-12 and IFN-γ cytokines by using ELISA. BMDCs were co-cultured with T cells from Lewis rats and mixed lymphocyte reaction was assessed by MTT method. The morphology of BMDCs stimulated with LPS remained immature after RAPA pretreatment. RAPA significantly decreased the CD86 expression, impaired the IL-12 and IFN-γ production of BMDCs stimulated with LPS, and inhibited the proliferation of allogeneic T cells. In conclusion, RAPA can inhibit the maturation of BMDCs stimulated with LPS in terms of the morphology, surface phenotype, cytokine production, and ability of BMDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells in vitro.     

自体树突状细胞疫苗诱导胃癌患者术后肿瘤特异性免疫反应的作用

目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化.方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次.在治疗前后相应各时相点检测针对自体肿瘤抗原的迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应(mixedlymphocyte reacion,MLR)及细胞上清IFN-γ及IL-4的水平.结果疫苗治疗后可以明提高外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应的强度.治疗前及治疗后第2、4、8周患者外周血单核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)分泌IFN-γ的水平分别为(184±20)、(467±55)、(700±88)、(257±38)pg/ml,各组差异显著;而分泌IL-4的水平分别为(66±8)、(69±9)、(66±7)、(61±7)pg/ml.各组之间无明显变化.有16例疫苗注射后患者DTH反应呈阳性.结论树突状细胞疫苗可改善胃癌术后患者免疫功能状态,并诱导出了肿瘤特异性的免疫反应.