一种高效的酿酒酵母和毕赤酵母电击转化法

 电击转化由于其高效率而被广泛地应用于酿酒酵母的转化过程中。但是由于菌种退化或是暴露于污染的环境,很多菌种的转化效率会显著地下降2~4个数量级。探索了一种改进的电击转化方法,它借助于单链载体DNA和转化后在YPD培养基中的复苏过程,可以使转化效率比之前曾报道过的已经最优化的用醋酸锂和二硫苏糖醇进行预处理的转化方法效率提高13倍。在毕赤酵母中使用这一改进的方法,可以使转化效率提高高达114倍,在一些已经退化的酿酒酵母菌株中,此方法也可以提高转化效率将近100倍。这一方法将为几乎所有酿酒酵母和毕赤酵母的分子操作提供极大的便利。     

感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响

通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,优化感受态制备和转化方法.结果表明,加入质粒（pBR322）DNA量为1～10ng,感受态制备过程中菌液冰浴时间在30～60min,以及感受态细胞加入质粒DNA并混匀后的冰置...     

三种大肠杆菌高效感受态的制备及转化

描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α,TG1和XL1blue,其中最有效的是XL1blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞的存储时间及其与转化效率之间的关系也进行了研究,结果显示感受态细胞可以在-20℃存储7d,在-70℃存储15d.将常见的方法做了三种改进:首先是将CaCl2溶液改为TB溶液;其次是将培养基由LB换成S.O.C;再就是在质粒对感受态细胞的转化过程中加入DMSO或PEG8000.改良的细菌转化系统比常见的方法能提高转化效率约1000倍,是一种高效的细菌转化系统.     

优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究

通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法.结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L MgCl2 + 80 mmol/L CaCl2)处理,-85℃放置12～14 h,42℃热激处理90 s,转化效率最高,可达5.5×105～6×105 cfu/μg DNA(pSilencer2.1-U6-neo),随着质粒放置时间增加,转化效率下降.     

乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达——Ⅰ.HBsAg基因在酵母中的克隆

将乙型肝炎表面抗原基因组装进穿梭质粒,经E.coli扩增、鉴定后转入酵母细胞得到了转化子。经放射免疫分析,在此转化子中HBsAg未得到表达,可能是阅读框架不一致造成的。此外,我们对酵母DNA重组技术进行了摸索,并简化和改进了一些步骤。     

乳酸乳球菌电转化条件的研究

以质粒pTRKH2为材料,对乳酸乳球菌MG1614进行电转化条件的研究.实验结果表明,在电转化过程中,电场强度、电阻大小、细胞生长状态和电击后菌株复苏时间均对转化效率有明显影响,得到了乳酸乳球菌的最适电转化条件为:对数生长中期的细胞,经1%甘氨酸处理,在10kVcm电场强度、400Ω电阻下电转化,转化后细胞在SGM17培养液中培养2h后涂布选择性培养基,转化率(转化子个数与DNA质量之比)可达1.2×103个μg,比优化前的转化效率提高近100倍.     

影响酿酒酵母电击转化率的条件

以酿酒酵母为材料,用穿梭质粒ｐＹＥＳ２进行电击转化的条件实验．实验表明电击中电压大小、细胞的生长状态、处理条件和电击后细胞的培养时间以及质粒浓度等对电击转化率均有影响．取对数生长期酵母细胞,用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）处理以疏松细胞壁,加０．７μｇ／ｍＬ质粒ＤＮＡ,５ｋＶ电压电击,转化后细胞在完全培养基中培养６０ｍｉｎ后,涂布选择培养基,转化率可达４．８×１０５个转化子／μｇ质粒ＤＮＡ,细胞的存活率为３９．２％,比完整细胞转化的效率高,存活率偏低     

玻璃粉创伤棉花茎尖分生组织遗传转化的研究

评估玻璃粉创伤棉胚茎尖分生组织的转化效率及初步建立其遗传转化体系。高速涡旋的玻璃粉创伤棉胚茎尖分生组织,利用农杆菌介导法将报告基因gusA导入棉花,GUS组织化学染色后观察棉胚转化情况,探讨不同转化条件对转化的影响。结果表明：0。2g玻璃粉创伤棉胚,茎尖分生组织的较多细胞被转化,成活12株幼苗,较适宜。涡旋90S转化条件下获得2株GUS阳性苗,涡旋时间越长茎尖分生组织创伤程度越严重,能提高转化效率,但成苗量降低。此外．转化效率受菌液浓度及菌种的影响,OD600为0．8的农杆菌LBA4404菌液侵染棉胚,较多细胞能表达gusA的活性且表达水平较高,而被农杆菌GV3101侵染后的棉胚染色效果较差。     

水生能源植物浮萍中抑菌成分对酵母乙醇发酵的影响

研究了水生能源植物浮萍中黄酮类成分对酵母生长和乙醇发酵的抑制作用,并提出了水提去抑制的处理方法.采用酸水解和酶水解2种方法对浮萍进行水解,水解物的乙醇发酵效率为13.3%～48.1%,远低于对照发酵效率.水解物经添加氢氧化钙等脱毒处理后未提高发酵效率;经水提取后发酵效率达74.3%～85.3%.采用高效液相色谱法(HPLC)检测发现浮萍渣的醇提物中存在黄酮类物质木犀草素,该物质在350 nm具有特征吸收光谱,在乙醇发酵过程中使酵母细胞变小且易破碎,无法将底物转化为乙醇.抑菌试验结果表明,浮萍渣的醇提物对酿酒酵母的生长有明显的抑制作用.     

羟基聚合氯化铝铁的化合形态分布转化模型

采用改进的Al-Fe-Ferron逐时络合比色法定量研究了HPAFC的化合形态分布与转化,结合酸解聚实验和酸反滴定实验结果,描述了其形态分布特征.结果表明HPAFC的化合形态主要决定于n(Al):n(Fe)比值、碱度值和陈化时间,并且可划分成三个主要化合形态分布区,即单体和二聚体[Al+Fe]a、中间多核羟基络合物[Al+Fe]b和溶胶态[Al+Fe]c,而且它们之间可相互直接转化.当n(Al):n(Fe)＞5:5时,[A1+Fe]a和[A1+Fe]b为主要化合形态;除了[A1+Fe]b之外,[Al+Fe]a和[Al+Fe]c随n(Al):n(Fe)减小而增大.最后提出了HPAFC的化合形态分布与转化模型.     

流感病毒RNA聚合酶重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的实验研究

目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.     

CaCl2浓度对感受态细胞转化效率的影响

对于E.coli菌株用8种不同浓度的CaC l2制备感受态细胞,然后转化各浓度的感受态细胞。实验结果表明,不同浓度CaC l2溶液处理所得到的感受态细胞,其转化效率有很大的不同。随着CaC l2浓度增高,转化效率也随之提高,在80m mol/L~100m mol/L时达到峰值,进一步提高CaC l2的浓度,转化效率急剧下降。还探讨了-70℃贮存时间对转化效率的影响。     

杉木炭疽菌遗传转化及附着孢发育过程的细胞核行为观察

[目的]建立高效的杉木炭疽菌遗传转化体系,并观察附着胞发育过程中的细胞核行为.[方法]通过菌丝体酶解的方法制备原生质体,PEG介导的原生质体转化法将含有伯莱霉素抗性的细胞核表达质粒NL1::GFP转入受体材料杉木炭疽菌SMCG1#C菌株,通过荧光显微镜跟踪观察附着胞发育过程中的孢子、芽管和附着胞等结构中的细胞核行为.[结果]获得了稳定表达NL1::GFP质粒的杉木炭疽菌阳性转化子;杉木炭疽菌附着胞发育过程伴随着细胞的有丝分裂与细胞核的转移;附着孢发育成熟后,孢子和芽管菌丝中的细胞核仍然保持完整.[结论]建立了高效的杉木炭疽菌遗传转化体系;杉木炭疽菌与稻瘟病菌、希金斯炭疽菌的附着胞发育过程的细胞生物学特性显著不同.     

氧化硅-锗系统中缺陷的形成及转换

应用光吸收和电子顺磁共振等方法,对溶胶-凝胶法制得的氧化硅一锗玻璃的异常光吸收现象进行了实验研究,分析了掺铝氧化硅一锗玻璃光敏中心及其转化过程,并对紫外光辐照条件下氧化硅一锗玻璃中顺磁中心[GeO-4/Li ]0的形成及其性质进行了探讨.结果表明,在掺铝样品中发生了从锗相关的氧缺陷中心到E'中心的光化学转换.     

生物法处理电镀铬废水的研究

主要研究生物法处理电镀铬 [Cr6 ]废水 .采用生物技术从电镀淤泥中分离出高效还原杆菌——脱硫孤菌 ,探讨菌量、铬离子浓度、溶液值、作用温度和时间等因素对还原杆菌去除溶液中铬离子效率 .结果表明 :在菌废比为 1∶ 1 .4 ,温度控制为 2 0～ 3 5℃ ,p H控制在5～ 7,最佳作用时间 1 6～ 2 0 h,[Cr6 ]=75 mg/L时 ,Cr6 去除率可达 99.9%.     

游荡型河流转化控制因素的二维数值模拟

改进已有平面二维水沙模型,进一步考虑弯道二次流及河床结构对泥沙输运的影响以及河岸植被影响;并提出新的非黏性土崩岸模拟方法,使其能模拟边滩的形成.利用改进后模型模拟游荡小河的形成,并在此基础上通过模拟流量、边岸植被、来沙量等控制因素变化后游荡小河的平面形态发展过程;分析讨论其对游荡河型转化的影响,并将结论与现有河型转化理论对比,说明改进后的数值模型能反映游荡河流的形成与转化,为深入研究其转化及成因机理提供新的技术手段.     

基于原位转化 2 +1 型配体的铜配位聚合物:合成、结构及催化性质

本文选用含有氰基的配体3,5-di-[1,2,4]triazol-1-yl-benzonitrile (DTCN),借助水热合成的方法,与Cu~(2+)离子结合,成功地构筑了一个金属-有机配合物[Cu(DTBA)2](1)(HDTBA=3,5-di-[1,2,4]triazol-1-yl-benzoic acid),通过X-ray、IR等手段,对它的结构进行了初步的表征.结构分析表明,DTCN配体中氰基发生了原位转化,生成了羧基,并与Cu~(2+)离子形成了配位,同时,通过配体中的三氮唑的连接作用,进一步形成了具有格子状特征的2D层.另外还研究了这个配合物,对亚甲基蓝(MB)光催化降解性能.     

弱电磁脉冲对完整酵母及原生质体的电转化研究

电转化法 ( electrotransformation)是利用电脉冲使细胞膜形成微孔 ,造成膜的通透性瞬时增强 ,使外源基因通过膜的穿孔进入细胞 ,并插入细胞的基因组 ,从而建立起合适的遗传转化系统的一种有效的物理方法 .这种方法转化率高 ,操作简便省时 ,在生物、医学等领域应用广泛 .由于酵母是真核生物的参考模型 ,具有其他生物所不具有的优点 ,成为表达外源基因的重要工具 ,而被国内外许多研究者广泛用于电转化的研究 .许多研究者在电转化操作中 ,都是采用场强在 ( 1～ 1 0 ) k V/ cm,脉宽数 1 0 μs～ms量级的单个或数个强脉冲电场作用于细胞 ,从而…     

酵母胞内海藻糖微波破细胞提取与传统提取比较

酵母胞内海藻糖大都采用 50 %乙醇 -水溶液回流提取得到 .但酵母经微波破细胞处理后 ,以水为溶剂在室温下提取 1 0 min,就能把海藻糖充分溶出 .与传统浸取相比较 ,微波破细胞提取具有提取时间短、不需有机溶剂、不需加热、海藻糖收率高、杂质溶出少等优点     

短小芽孢杆菌质粒pCJ转化枯草杆菌的研究

本文采用我国自己分离的短小芽孢杆菌抗四环素质粒pCJ3转化枯草杆菌的各种突变体.质粒DNA经氯化铯—溴化乙锭密度梯度离心纯化后转化枯草杆菌的感受态细胞.结果表明枯草杆菌BR151,SB202,168,QB1130及QB1133都可作为质粒pCJ3的受体,转化效率在10~3左右,其中以SB202这株突变体为最高,从各种转化体中提取的质粒及经BamHI消化后的质粒的电泳图均与原质粒pCJ3及其BamHI酶切片段相同,并具有pCJ3的抗四环素转化活性.将pCJ3DNA经BamHI酶切后重新用T_4-DNA连接酶连接再转化枯草杆菌细胞,其转化效率比原质粒高1—2个数量级.研究了二价金属离子、pH及培养基成分对转化的影响,结果证明:Ca~(++)对枯草杆菌转化有促进作用,Cu~(++),Zn~(++)则有抑制作用,转化的最适pH在7.2—7.5之间;营养丰富培养能提高转化效率.