吡格列酮对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的作用

目的 探讨吡格列酮在重症急性胰腺炎发病机制中与凋亡激活的关系.方法 将80只SD大鼠按随机表法分为急性坏死性胰腺炎组（ANP组）、假手术组、二甲基亚砜溶剂对照组（DMSO组）、吡格列酮干预组（吡格列酮组）,每组20只.采用胰胆管逆行注射5％牛磺胆酸钠1 ml/kg体质量的方法制作ANP模型,吡格列酮组在造模前30 min腹腔注射吡格列酮40 mg/kg体质量.术后1、3、6、12 h分批处死大鼠,收集胰腺组织.采用常规HE染色进行胰腺组织病理评分,采用TUNEL染色方法检测大鼠胰腺细胞凋亡,免疫组化法和蛋白质印迹法检测胰腺组织PPARγ的表达变化,同时检测胰腺组织caspase3的表达变化.结果 吡格列酮干预后大鼠胰腺组织病理损伤较ANP组大鼠有所减轻,差异有统计学意义（P＜0.05）.吡格列酮组胰腺组织PPARγ表达水平为2.69 ±0.46,显著高于ANP组的0.75 ±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）.吡格列酮3h组大鼠胰腺细胞凋亡指数为8.35 ±0.95,显著高于同时点ANP组的4.37±1.22;caspase 3的活性为9.24±1.78,显著高于ANP组的5.04±0.86,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 吡格列酮干预后大鼠胰腺炎症减轻,PPARγ和caspase 3表达升高,胰腺细胞凋亡率升高.     

吡格列酮预处理对急性坏死性胰腺炎大鼠模型的影响

目的 探讨吡格列酮预处理对ANP大鼠的影响.方法 54只大鼠采用经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备ANP模型.大鼠按随机数字法分为ANP组、吡格列酮组和假手术组,各18只.吡格列酮组在制模前2 h腹腔注射0.2%吡格列酮20 mg/kg体重.分别在术后3 h、6 h、12 h处死动物,取血检测血淀粉酶,取胰腺组织观察胰腺大体及组织学变化,分别按Hushes和Kusske标准评分.结果 术后3 h、6 h、12 h,ANP组及吡格列酮组血淀粉酶、胰腺大体病理的Hughes评分和胰腺组织学Kusske评分比假手术组明显升高;吡格列酮组大鼠术后12 h血淀粉酶、胰腺Hughes评分和Kusske评分分别为(2 980±1 080)U/L、4.50±2.07和7.50±1.05,均明显低于ANP组的(7 598±1 072)U/L、7.17±1.47和11.33±1.75(P＜0.01).结论 吡格列酮预处理可降低ANP大鼠血清淀粉酶,减轻胰腺大体、组织学病理改变,说明吡格列酮具有预防ANP的效应.     

吡格列酮对大鼠缺血再灌注心肌p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察临床用于降糖治疗的噻唑烷二酮类药物吡格列酮对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用及对p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响。方法将24只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、吡格列酮10mg/(kg·d)组(P组)、吡格列酮10mg/(kg·d)+过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)特异性阻断剂GW9662组(P+G组),每组6只;利用结扎左前降支的方法建立缺血再灌注损伤模型,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口原位末端标记法检测心肌细胞凋亡,Western blot方法检测心肌组织磷酸化p38(p-p38)蛋白的变化。结果与I/R组比较,Sham组、P组心肌细胞凋亡指数(AI)显著降低[(8.6±4.3)%、(21.4±8.8)%vs(40.1±12.3)%,P0.05];P+G组心肌细胞AI显著高于P组[(37.0±10.5)%vs(21.4±8.8)%,P0.05]。与I/R组比较,Sham组、P组p-p38蛋白表达下调,差异有统计学意义(P0.05),与P组比较,P+G组p-p38蛋白表达上调,差异有统计学意义(P0.05)。结论吡格列酮抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡,可能与下调p-p38表达有关,这2种作用是由PPARγ介导的。     

内质网应激相关蛋白在阿霉素诱导的急性心肌损伤中的表达及意义

目的探讨内质网应激(ERS)相关葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和增强子结合蛋白环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在阿霉素诱导的急性心肌损伤中的表达及意义。方法将8~10周雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为对照组与阿霉素组,每组20只,阿霉素组小鼠腹腔注射大剂量阿霉素(20mg/kg)诱导急性心肌损伤模型,对照组小鼠给予腹腔注射等量生理盐水。检测2组小鼠LVEF以及左心室短轴缩短率(LVFS)等心功能指标,记录体质量、心质量,心肌组织行苏木精-伊红染色。采用Real time-PCR和Western blotting法检测小鼠心肌组织GRP78、CHOP、Bax及Bcl-2mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,阿霉素组小鼠体质量、心脏质量、LVEF及LVFS明显降低,差异有统计学意义[(19.92±0.80)g vs(24.34±1.29)g,(96.58±8.37)mg vs(122.37±6.72)mg,(68.67±3.39)%vs(84.20±2.91)%,(27.10±1.24)%vs(39.96±3.53)%,P0.01]。组织病理结果显示阿霉素组小鼠心肌细胞排列紊乱,细胞质空泡化,心肌纤维扭曲,断裂。与对照组比较,阿霉素组小鼠心肌组织中GRP78、CHOP及Bax表达明显上调(P0.05),Bcl-2表达明显降低(P0.05),Bax/Bcl-2显著升高(P0.05)。结论 ERS可能通过调控心肌细胞凋亡,参与阿霉素诱导的急性心肌损伤过程。     

受体相互作用蛋白140对吡格列酮改善胰岛β细胞糖脂毒性损伤的影响

目的探讨过氧化物酶增殖活化受体-γ(PPAR-γ)激动剂吡格列酮对胰岛β细胞糖脂毒性损伤的保护及受体相互作用蛋白140(RIP140)在其中的介导机制。方法将胰岛β细胞株MIN6细胞分为NC组、高糖高脂组、吡格列酮干预组。稳定过表达RIP140的MIN6细胞(O-RIP140-MIN6)和过表达绿色荧光蛋白(GFP)的MIN6细胞(GFP-MIN6)。分别予高糖高脂(25 rmmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸)和/或10/μmol/L吡格列酮干预。利用MTT分别检测各组细胞增殖率、流式细胞仪检测凋亡率、RT-PCR检测RIP140 mRNA、Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平及黄嘌呤氧化酶法检测超氧化合物歧化酶(SOD)含量。结果 NC组、高糖高脂组及吡格列酮干预组MTT吸光值分别为:24 h(1.80±0.04)、(0.95±0.04)及(0.97±0.03);48 h(2.70±0.11)、(1.04±0.06)及(1.30±0.03)。NC组与高糖高脂组比较,差异有统计学意义(24 h:t=25.94,P0.01,48 h:t=24.00,P0.01)。高糖高脂组与吡格列酮干预组比较,差异有统计学意义(48 h:t=9.37,P0.01)。各组间的24 h凋亡率分别为(2.93±0.66)%、(48.08±3.95)%(vs NC组,t=19.54,P0.01)及(31.38±3.92)%(vs高糖高脂组,t=5.20,P0.01)。Bcl-2相对表达量分别为(1.14±0.06)、(0.42±0.02)(vs NC组,t=20.52,P0.01)及(0.86±0.04)(vs高糖高脂组,t=17.71,P0.01)。RIP140表达量分别为(1.13±0.11)、(2.34±0.21)(vs NC组,t=9.69,P0.01)及(1.63±0.13)(vs高糖高脂组(t=5.03,P0.01);高糖高脂组与NC组比较,MDA[(10.13±0.47vs(5.00±0.26)nmol/mg,t=16.57,P0.01]、SOD[(5.15±1.07)协(12.25±1.25)nmol/mg,t=7.51,P0.01]比较,差异均有统计学意义。高糖高脂组与吡格列酮干预组比较,MDA[(10.13±0.47)vs(7.83±0.36)nmol/mg,t=6.77,P0.01]、SOD[(5.15±1.07)v5(8.74±0.59)nmol/mg,t=5.16,P0.01)差异有统计学意义。O-RIP140-MIN6和GFP-MIN6细胞分别给予高糖高脂及吡格列酮处理后,两组MTT吸光值:24 h(1.04±0.07)vs(1.40±0.16)(t=5.01,P0.01),48 h(1.16±0.13)vs(1.98±0.14)(t=10.73,P0.01)。凋亡率为(41.95±4.88)%vs(31.26±2.86)%(t=2.97,P0.05)、Bcl-2相对表达为(0.22±0.04)vs(0.76±0.03)(t=21.54,P0.01),SOD为(7.53±0.71)vs(9.62±0.43)nmol/mg(t=4.36,P0.05),MDA为(10.23±0.28)vs(8.15±0.38)nmol/mg(t=7.63,P0.01)。结论高糖高脂促进胰岛β细胞损伤,吡格列酮通过下调RIP140表达来抑制高糖高脂对胰岛β细胞的损伤。     

吡格列酮和罗格列酮对兔血脂异常的作用

目的 比较吡格列酮和罗格列酮对兔血脂异常的作用.方法 40只白兔随机分为4组:空白对照组、血脂异常组、罗格列酮组、吡格列酮组.除空白对照组外,其余3组高脂饮食.8 w后,罗格列酮组、吡格列酮组开始用药,用药最分别为罗格列酮1.5 mg/(kg·d),吡格列酮5mg/(kg·d),用药6 w.取血,检测血脂、血糖、瘦素、TNF-α等指标.结果 血清总胆固醇吡格列酮组[(6.68±1.89)mmol/L)]低于罗格列酮组[(8.40±0.18)mmol/L](P＜0.05),吡格列酮组甘油三酯较罗格列酮组降低39.4%,高密度脂蛋白罗格列酮组[(4.73±2.27)mmol/L]高于吡格列酮组[(2.30±1.52)mmol/L](P＜0.05).二者TNF-α低于血脂异常组(P＜0.05)、瘦素高于血脂异常组(p＜0.05).吡格列酮组进食量、血糖较血脂异常组减低(P＜0.05).载脂蛋白A较血脂异常组增高(p＜0.05);罗格列酮亦有上述作用,但与血脂异常组比较无统计学差异.结论 二者均有降血糖、改善血脂、抗炎症、促进瘦素分泌的作用,但在降低胆固醇和甘油三酯的作用上吡格列酮较罗格列酮强,而罗格列酮升高高密度脂蛋白的作用最强.     

吡格列酮对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺PPARγ mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ)激动剂吡格列酮对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠PPARγ mRNA表达的影响.方法 54只SD大鼠按完全随机法分成假手术组、ANP组、吡格列酮组.采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管内注射建立ANP模型,于造模后3、6、12 h检测血清淀粉酶含量,观察胰腺病理学改变,并采用RT-PCR法检测胰腺组织PPARγ mRNA的表达.结果 ANP组6 h点的血清淀粉酶及胰腺组织病理学评分分别为(7171±1636)U/L和13.00±2.36,均较假手术组的(523±166)U/L和1.67±2.34显著增高(P<0.01),而PPARγ mRNA在两组中表达均较弱,无显著差异(0.18±0.05对0.22±0.03,P>0.05);吡格列酮组6 h的血清淀粉酶水平、胰腺病理学评分分别为(4504±1901)U/L和9.00±0.89,均较ANP组明显下降(P<0.05),PPARγmRNA表达较ANP组增强(0.56±0.05对0.18±0.05,P<0.05).结论 吡格列酮对ANP大鼠的保护作用可能与上调PPARγ基因的表达密切相关.     

吡格列酮预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制研究

目的 探讨吡格列酮预防非肥胖糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的机制.方法 (1)将4周龄NOD雌鼠分为吡格列酮(21只)及对照(21只)组,分别摄食含0.02％吡格列酮的混合饲料和普通营养饲料.观察52周龄的累积糖尿病发病率.(2)各组取12周龄未发病NOD鼠(n=15)胰腺,HE染色观察胰岛炎;TUNEL+SABC法检测胰岛β细胞凋亡.(3)ELISA法测定血清、脾细胞培养上清IFN-γ和IL-4水平及培养脾细胞核因子PPARγ、NF-κB活性.结果 (1)30、52周龄时,吡格列酮及对照组发病率分别为57.1％和76.2％ 、76.2％和90.5％(均P＞0.05);15周龄时,吡格列酮及对照组发病率分别为4.8％和33.3％(P=0.045).(2) 12周龄时,吡格列酮组正常胰岛和胰岛周围炎比例(14.73％,26.02％)高于对照组(5.69％,15.72％;均P＜0.01),胰岛内炎比例(59.25％)则低于对照组(78.59％,P＜0.01);吡格列酮组胰岛β细胞凋亡率(6.17％±3.62％)低于对照组( 10.62％±4.43％,P=0.008).(3)12周龄NOD鼠吡格列酮组血清IFN-γ水平[(561.05 ±78.61) pg/ml]显著低于对照组[(666.43±28.42) pg/ml,P=0.045];在培养的脾细胞上清中,吡格列酮组IFN-γ水平[(605.84±65.60) pg/ml]显著低于对照组[(692.20±44.98)pg/ml,P=0.041].(4)在培养的脾细胞中,吡格列酮组PPARγ活性(0.06±0.01)高于对照组(0.03±0.01,P=0.013),NF-κB活性(0.03±0.01)较对照显著降低(0.08±0.01,P=0.001).结论 吡格列酮活化PPARγ,抑制NF-κB活性,血清和脾细胞上清IFN-γ下降,Th细胞向Th1方向分化减少,NOD鼠胰岛炎减轻、胰岛β细胞凋亡减少.     

CUE结构域蛋白2对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究

目的探讨CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法肾小管上皮细胞HK-2分为高糖处理组(HG)、转染对照载体后给予高糖处理组(NC+HG)、转染过表达CUEDC2载体后给予高糖处理组(CUEDC2+HG)及对照组(Con)。流式细胞仪测定细胞凋亡;试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平和培养液中TNF-α、IL-8水平。结果与Con组比较,HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8升高[(6.23±0.65)%vs(18.56±3.14)%,(0.06±0.01)vs(0.15±0.02)nmol/mg,(29.54±3.56)vs(56.10±6.30)mg/L,(10.42±1.23)vs(19.59±1.68)mg/L;P0.05],SOD活性降低[(36.20±2.78)vs(20.17±1.45)U/mg,P0.05];与NC+HG、HG组比较,CUEDC2+HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8降低[(17.14±2.98)%vs(18.56±3.14)%vs(11.47±1.20)%,(0.14±0.01)vs(0.15±0.02)vs(0.10±0.02)nmol/mg,(55.49±5.97)vs(56.10±6.30)vs(41.20±3.75)mg/L,(19.59±1.68)vs(20.12±2.35)vs(14.65±1.42)mg/L,P0.05],SOD活性升高[(20.17±1.45)vs(19.64±1.37)vs(25.96±3.26)U/mg,P0.05]。结论过表达CUEDC2可减少高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症因子释放,降低细胞氧化应激,减少细胞凋亡,保护高糖诱导损伤的肾小管上皮细胞。     

吡格列酮对不稳定型心绞痛合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

目的探讨吡格列酮对不稳定型心绞痛(UAP)合并2型糖尿病患者内皮祖细胞(EPCs)数量及脂联素水平的影响。方法入选自2010年6月至2011年5月在湖北医药学院附属太和医院住院的有UAP合并2型糖尿病患者57例,随机分为吡格列酮组(n=28)和对照组(n=29),吡格列酮组应用吡格列酮(30 mg/d)治疗,对照组患者不使用噻唑烷二酮类药物。治疗前及治疗12周时通过流式细胞技术双色分析法检测所有患者外周血中EPCs占有核细胞的百分比,其中EPCs用CD34+/KDR+双标记定位,比较两组患者在干预前后内皮祖细胞数量的变化及血清脂联素水平的变化。结果两组患者在治疗前EPCs的数量无统计学差异(P0.05)。治疗12周时,吡格列酮组患者EPCs数量较治疗前明显增加(0.023±0.010 vs.0.051±0.012,P0.01);对照组患者EPCs数量在治疗前后无统计学差异(P0.05);12周时,吡格列酮组患者EPCs数量高于对照组患者(P0.028)。吡格列酮组血清脂联素水平在治疗前、后有统计学差异(P0.05);对照组患者血脂联素水平在治疗前、后无统计学差异(P0.05);12周时,吡格列酮组患者血清脂联素水平高于对照组患者(P0.05)。结论吡格列酮能够促进冠心病合并糖尿病患者EPCs的动员,提高患者血清脂联素水平。     

吡格列酮保护缺氧复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的离子通道机制

目的观察吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨保护作用与ATP敏感性钾通道开放的关系。方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,分为8组:溶媒组、缺氧复氧组、0.1μmol/L吡格列酮组、1 μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098组、2μmol/L吡格列酮+0.5mmol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098+0.5 mmol/L 5-HD组。利用膜联蛋白-V与碘化丙啶双染法及Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡。结果缺氧复氧组乳鼠心肌细胞发生明显凋亡,经吡格列酮预处理后减少心肌细胞凋亡(P<0.05);与0.1μmol/L、1μmol/L及2μmol/L吡格列酮组比较,5-HD削弱吡格列酮抑制心肌细胞凋亡的作用(P<0.05),HMR-1098无作用(P>0.05)。结论吡格列酮对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,线粒体ATP敏感性钾通道的开放可能介导了吡格列酮的保护作用。     

应用~(18)F-FDG PET/CT活体成像探讨吡格列酮对兔动脉粥样硬化斑块易损性与钙化的影响

目的应用18氟-氟代脱氧葡萄糖(18F-fluorodeoxyglucose,18F-FDG)正电子发射型计算机断层显像(positron emission computed tomography,PET)/计算机断层扫描(computed tomography,CT)探讨吡格列酮对实验性兔动脉粥样硬化斑块易损性及钙化的作用,及钙化与易损性之间的相关关系。方法 20只雄性新西兰大白兔随机分为吡格列酮组(n=10)和对照组(n=10)。制作动脉粥样硬化模型,吡格列酮组给予每日吡格列酮灌胃。两组大白兔在第8周和第18周抽血检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC),三酰甘油(triglyceride,TG),低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C),高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP),基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的浓度,并各进行一次PET/CT扫描,测量标准摄取值(standardized uptake value,SUV)(SUVmax、SUVmean)。实验动物处死,主动脉组织行病理免疫组化,比较两组斑块面积、斑块纤维帽厚度、纤维帽厚度与斑块面积比值、钙化面积百分比。结果两组间第8周与第18周TC、TG、LDL-C浓度比较,差异无统计学意义(P0.05)。第18周,吡格列酮组hs-CRP[(4.67±0.46)ng/mL vs.(6.21±0.93)ng/mL,P0.01)]、MMP-9[(43.50±1.94)ng/mL vs.(60.24±3.62)ng/mL,P0.01]、SUV值(P0.01)较对照组下降。吡格列酮组第18周时的TG[(1.48±0.85)mmol/L vs.(1.70±0.90)mmol/L,P0.01]、hs-CRP[(4.67±0.46)ng/mL vs.(6.08±0.75)ng/mL,P0.01]、MMP-9[(43.50±1.94)ng/mL vs.(50.44±2.05)ng/mL,P0.01)]、SUV值(P0.01)均低于第8周时,差异有统计学意义。吡格列酮组相应动脉的斑块面积、钙化面积百分比较对照组低,斑块纤维帽厚度,纤维帽厚度/斑块面积比值较对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。结论18F-FDG PET/CT可以用于评估动脉粥样硬化斑块的易损性,并可以对于血管早期钙化做出提示;吡格列酮可以用于改善动脉粥样硬化斑块的易损性,并可以控制血管早期钙化的发展进程。     

吡格列酮联合胰高血糖素样肽-1治疗对db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞的影响

目的 评价胰高血糖素样肽类似物利拉鲁肽与胰岛素增敏剂吡格列酮联合治疗db/db小鼠糖尿病的效果.方法 35只8周龄,体重(35.3±2.5)g的雄性db/db小鼠分为(1)对照组(n=8):给予生理盐水0.1 ml,2次/d;(2)吡格列酮组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+生理盐水0.1 ml,2次/d;(3)利拉鲁肽组(n=9):给予利拉鲁肽300 mg/kg,2次/d;(4)联合治疗组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+利拉鲁肽300mg/kg,2次/d.利拉鲁肽用灭菌生理盐水稀释后皮下注射,每天8:00和16:00给药,持续4周.行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),评价胰岛β细胞的增殖.采用单因素方差分析进行数据统计分析.结果 干预4周后,联合治疗组糖化血红蛋白(4.5±0.6)%,糖耐量试验血糖曲线下面积(1814±91)mmol·min·L-1,游离脂肪酸(202.0±20.4)μmol/L,TG(0.81±0.28)mmol/L均明显低于对照组[(7.3±0.4)%,(4042±183)mmol·min·L-1,(272.5±21.7)μmol/L,(1.35±0.21)mmol/L],P值均＜0.05;胰岛素曲线下面积(1639±372)μg·min·L-1,脂联素(16.7±2.0)mg/L,胰岛组织切片胰岛素阳性面积(59.5±1.5)%和胰岛新生β细胞比例(2.4±0.5)%均显著高于对照组[(834±201)μg·min·L-1,(10.2±1.8)mg/L,(22.4±1.5)%和(0.8±0.3)%],P值均＜0.05.且联合治疗组上述指标均低于或高于单药治疗组.联合治疗显著改善胰岛β细胞和α细胞分布,恢复正常的胰岛形态.结论 吡格列酮联合利拉鲁肽治疗相比单药更好地改善db/db小鼠糖脂代谢,保护胰岛β细胞功能并促进其增殖.

Abstract：

ObjectivesTo evaluate the effect of combination of liraglutide,a glucagon-like peptide-1 analogue and pioglitazone,an insulin sensitizer,on diabetic db/db mice.Methods Thirty-five 8-week old male db/db mice were divided into control group (n = 8 ),pioglitazone group (n =9 ),liraglutide group (n =9) and combined therapeutic group (n =9),which was given normal saline 0.1 ml,2/d,pioglitazone 24 mg· kg-1 · d-1 (feed contained 0.02％ pioglitazone) + normal saline 0.1 ml,2/d,liraglutide 300 mg/kg,2/d,and pioglitazone 20 mg · kg-1 · d -1 ( feed contained 0.02％ pioglitazone) +liraglutide 300 mg/kg,2/d,respectively.Liraglutide were given at 8:00 and 16:00 via subcutaneous injection after having been diluted with sterilized normal saline.Effect on glucose,lipid metabolism and islet β-cell preservation were assessed after 4 weeks.Oneway ANOVA was adopted for statistical analysis.Results Combination therapy displayed promising anti-hyperglycemic[glycosylated hemoglobin Alc: (4.5 ± 0.6)％vs.(7.3 ±0.4)％,P ＜ 0.001].Glucose tolerance were improved assessed by area under curve(AUC) of glucose by intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT)[(1814 ±91 ) mmol · min · L-1 vs.(4042 ±183) mmol · min · L-1,P ＜0.001];insulin release response to glucose were also preserved as AUC of insulin by IPGTT was higher[( 1639 ±372) μg · min · L-1 vs.(834 ±201 )μg · min · L-1].Combination therapy also reduced circulated free fatty acids and TG[( 202.0 ± 20.4 ) μmol/L vs.( 272.5 ± 21.7 )μmol/L,(0.81 ± 0.28) mmol/L vs.( 1.35 ± 0.21 ) mmol/L],and increased plasma adiponectin [(16.7±2.0)mg/L vs.(10.2±1.8)mg/L].All P value ＜0.05.Islet immunohistochemistry showed that combination therapy significantly increased insulin positive area were[( 59.5 ± 1.5 ) ％ vs.( 22.4 ±1.5) ％]and ratio of Brdu positive β-cells was three folds than vehicle-treated mice[( 2.4 ± 0.5 ) ％ vs.(0.8 ±0.3)％],both greater than each single treatment.Combined therapy significantly improved islet β cell/α cell distribution,which led to islet recovery.Conclusions Combined therapy improves glucose and lipid metabolism,preserves islet β-cell function and stimulates β-cell proliferation,greater than either liraglutide or pioglitazone treatment alone.     

糖尿病大鼠心钠素水平的动态观察及依那普利的调节作用

目的观察糖尿病大鼠心钠素心肌及循环水平的动态变化及依那普利对其表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠分为:1月对照组和糖尿病组(各7只);3月对照组和糖尿病组(各7只);5月对照组、糖尿病组和依那普利治疗组(各8只)。分别于病程1、3、5月经心脏采血,放免法测定血浆ANP水平;记录心脏重量指数;采用半定量RT-PCR分析1、5月程左心室ANPmRNA水平。结果糖尿病大鼠血浆ANP水平(pg/mL)于病程1月(1528.5±354.2vs1134.1±368.3,P=0.064)及3月(1747.8±346.2vs1220.1±355.1)pg/mL,(P<0.05)明显升高,5月(1047.9±317.4vs914.1±205.0)pg/mL,(P=ns)与对照组无差异,且显著低于3月组(P<0.05);其左室ANPmRNA含量与对照组比较,病程1月(1.559±0.501vs1.041±0.404)pg/mL,(P=0.051)升高,5月(1.317±0.362vs1.177±0.472)pg/mL,(P=ns)无差异。依那普利治疗组大鼠左室ANP表达无明显增强,但血浆ANP浓度显著高于未治疗组(1405.9±360.7vs1047.9±317.4)pg/mL,(P<0.05)及对照组(1405.9±360.7vs914.1±205.0)pg/mL,(P<0.05)。结论糖尿病大鼠ANP心脏表达及循环水平呈现先升高后降低的变化趋势;依那普利干预明显提高糖尿病大鼠血浆ANP水平,可能是其发挥抗心衰及心脏保护作用的机制之一。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响 .方法 分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24 h后,再加用Ang Ⅱ作用24 h.采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平.结果 与Ang Ⅱ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P＜0.05),而 Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P＜0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P＞0.05),非诺贝特组的PPARα mRNA和吡格列酮组的PPARγ mRNA表达增高.结论 PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应.     

吡格列酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞内质网应激致凋亡途径的影响

目的 观察吡格列酮对大鼠心肌细胞缺血再灌注(I/R)损伤(MIRI)后GRP78和caspase - 12蛋白表达的影响,探讨吡格列酮内质网应激途径的心肌保护.方法 Wistar大鼠30只随机分为I/R+ Pio组[灌服5 mg/(kg·d)]、I/R组及假手术组,各10只.制作大鼠心肌再灌注损伤模型.TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和caspase - 12表达变化.结果 吡格列酮预处理组大鼠心肌细胞凋亡及GRP78、caspase - 12蛋白表达水平明显比I/R组减少(P＜0.05).结论 通过内质网应激途径可能是吡格列酮对心肌再灌注损伤的保护作用机制之一.     

血糖和糖化血红蛋白对缺血性脑损伤的影响

目的探讨血糖和糖化血红蛋白(HbA1c)水平对脑梗死的影响。方法收集脑梗死患者80例,根据空腹血糖和糖尿病史分为糖尿病1组58例、非糖尿病1组22例。选取本院健康体检者40例(对照1组)。另选择SD大鼠60只,随机分为糖尿病2组,非糖尿病2组,对照2组,吡格列酮组,联合组(吡格列酮+GW9662),每组12只。通过TTC染色法观察大鼠脑组织坏死程度,采用血糖仪和ELISA法分别检测大鼠血糖和糖化血红蛋白水平,ELISA法检测大鼠血清白细胞介素6和TNF-α水平,Western blot法检测大鼠脑组织过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)和NF-κB蛋白表达。结果糖尿病1组血糖和HbA1c较非糖尿病1组和对照1组明显升高[(11.65±3.41)mmol/L vs(5.69±0.59)mmol/L、(4.23±0.52)mmol/L,(9.13±2.21)%vs(5.57±0.27)%、(4.03±0.53)%,P0.05]。非糖尿病1组血糖和HbA1c明显高于对照1组(P0.05)。与对照2组比较,非糖尿病2组和糖尿病2组脑梗死面积明显增加(P0.05)。与非糖尿病2组比较,糖尿病2组脑梗死面积明显增加(P0.05)。与糖尿病2组比较,吡格列酮组脑梗死面积明显降低(P0.05)。结论高血糖、高HbA1c与脑梗死密切相关,并且高血糖可能会加重脑梗死,其作用机制可能与PPARγ-NF-κB信号通路有关。     

吡格列酮干预对糖尿病肾病患者尿单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的 探讨吡格列酮对糖尿病肾病(DN)患者尿单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响.方法 80例患者随机分为吡格列酮组和对照组(完成71例).吡格列酮组加服吡格列酮15 mg/d连续6个月.服药前、服药后3个月、6个月分别留取空腹血测定血糖、糖化血红蛋白(HbA1c);留取晨尿液测定MCP-1、微量白蛋白/肌酐(Alb/Cr).结果 吡格列酮组血糖、HbA1c较治疗前有所下降,但无统计学意义(P＞0.05),尿MCP -1、Alb/Cr显著降低(均P＜ 0.05).结论 吡格列酮除具备降糖作用外对肾脏还有保护作用.     

吡格列酮对载脂蛋白E~(-/-)小鼠动脉粥样硬化中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨吡格列酮对载脂蛋白E(Apo E)-/-小鼠主动脉粥样硬化病变中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶(TLR4/MAPKs)信号通路的影响。方法取8只10周龄雄性C3H小鼠作为对照组,用普通饲料喂养;另取24只同周龄雄性Apo E-/-小鼠用高脂饲料喂养,复制动脉粥样硬化模型成功后按随机数表法分成3组:模型组、吡格列酮低剂量(5 mg·kg-1·d-1)组和高剂量(10 mg·kg-1·d-1)组各8只。干预4周后,HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。应用Western Blot技术检测对照组和干预组动脉粥样硬化中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2、JNK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果与对照组比较,各组Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中TLR4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(均为P<0.05),但p38MAPK水平变化不明显(均为P>0.05);与模型组比较,吡咯列酮低剂量组和高剂量组小鼠动脉粥样硬化斑块中ERK1/2与JNK磷酸化水平均降低(ERK1/2:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0438比0.8800±0.0436,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0236比0.8800±0.0436;JNK:吡咯列酮低剂量组比模型组:0.5037±0.0437比0.7900±0.0308,吡咯列酮高剂量组比模型组:0.3843±0.0237比0.7900±0.0308,均为P<0.05)。结论吡格列酮可能通过影响TLR4/MAPKs/ERK1/2与TLR4/MAPKs/JNK信号通路,延缓动脉粥样硬化的发生与发展。     

吡格列酮和瑞舒伐他汀对血脂紊乱兔模型脂代谢及炎症因子的影响

目的 比较吡格列酮和瑞舒伐他汀对兔血脂紊乱的作用.方法 40只白兔随机分为空白对照组、血脂紊乱组、瑞舒伐他汀组、吡格列酮组,除空白对照组外,其余3组高脂饮食.8 w后,瑞舒伐他汀组、吡格列酮组开始用药,用药量分别为瑞舒伐他汀1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1),吡格列酮5 mg·kg~(-1)·d~(-1),用药6 w.取血,检测血脂、血糖、TNF-α等指标.结果 吡格列酮组和瑞舒伐他汀组总胆固醇低于血脂紊乱组(P＜0.05).吡格列酮组TG最低,但与各组比较无统计学差异(P＞0.05).ApoA在瑞舒伐他汀组和吡格列酮组均增高,吡格列酮组高于血脂紊乱组(P＜0.05).瑞舒伐他汀组LDL-C较血脂紊乱组降低40%,与血脂紊乱组和吡格列酮组比较均降低(P＜0.05).二者TNF-α低于血脂紊乱组(P＜0.05).吡格列酮组进食量、血糖较血脂紊乱组减低(P＜0.05),瑞舒伐他汀可降低血糖,与吡格列酮组血糖水平接近(P＞0.05).结论 二者均有降血糖、改善血脂、抗炎症的作用,但在降低甘油三酯的作用上吡格列酮较瑞舒伐他汀强,而瑞舒伐他汀降低低密度脂蛋白最强.