补肾化痰法经APN信号通路调控肥胖型PCOS雌鼠糖脂代谢的机制研究

目的探究补肾化痰法通过调控APN/p38MAPK信号通路,改善肥胖PCOS雌鼠糖脂代谢的机制。方法来曲唑联合高脂制备肥胖PCOS雌鼠模型,补肾化痰方进行干预,采用ELISA法检测血清APN含量,免疫组织化学染色法检测卵巢组织AdipoR2,FATP1的表达水平,Realtime PCR检测卵巢颗粒细胞p38MAPK的mRNA表达水平,酶法检测血清FBG、TC、TG等含量。结果与模型组比较,(1)中药高、中剂量组雌鼠血清FBG、TC、TG、LDL、FFA含量显著低于模型组(P0.05或P0.01),HDL含量显著高于模型组(P0.05或P0.01);(2)中药高、中剂量组血清中APN含量升高(P0.05或P0.01);(3)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞膜AdipoR2的平均黑度值增高(P0.05);(4)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞p38MAPKmRNA表达增高(P0.05);(5)中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞中FATP1平均黑度值增高(P0.05)。结论肥胖型PCOS雌鼠出现以生殖内分泌紊乱,排卵障碍为主要表现的病理改变,并伴随全身的糖脂代谢异常。补肾化痰法能有效改善肥胖PCOS雌鼠的糖脂代谢紊乱,其机制可能与补肾化痰法激活APN/p38MAPK信号通路相关。     

补肾化痰方调控大鼠卵巢GC中APN信号通路机制的研究

目的:通过分析补肾化痰方对大鼠颗粒细胞脂联素受体1/2(AdipoR1/2)蛋白表达水平及下游分子相关基因表达的差异,探讨该复方激活卵巢GC中APN信号通路的机制。方法:采用雌性SD大鼠,体外培养卵巢颗粒细胞,Western-blotting测定AdipoR1/2的蛋白表达量,Real-time PCR测定AMPK、PPAR-α/β/γ、Cyp19a的mRNA表达。结果:与空白组比较,罗格列酮组、中药中低剂量组大鼠GC的AdipoR1/2含量均明显上升且差异有统计学意义;GC中AMPK、PPAR-α/β/γ、Cyp19a的mRNA表达量亦有明显的变化趋势,与空白组比较,罗格列酮组、中药中低剂量组的mRNA表达差异有统计学意义。结论:补肾化痰方能激活大鼠GC中APN信号通路的机制,可能与该方调节卵巢生殖激素转化及卵巢局部糖脂代谢相关。     

补肾化痰法经Sphk1通路调控肥胖PCOS雌鼠子宫内膜容受性的研究

目的:观察补肾化痰法调控肥胖多囊卵巢综合征(PCOS)雌鼠子宫内膜容受性(ER)的作用机制。方法:采用7～8周龄SD雌鼠,来曲唑加高脂乳剂建立肥胖PCOS模型以补肾化痰法治疗,结合阴道脱落细胞涂片、体质量、血清性激素和子宫形态学进行模型验证。取子宫内膜进行苏木精-伊红(HE)染色,ELISA法检测血清雌二醇(E_2)、孕激素(PROG)及睾酮(T)的表达,免疫组织化学法检测孕激素受体(PR)、雌二醇受体(E_2R)的表达水平,RT-PCR法检测雌鼠子宫鞘氨醇激酶1(Sphk1)、1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1Pr1)、蛋白激酶(Akt)、细胞周期蛋白1(CyclinD1) mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组动情周期紊乱,体质量显著增加,腺体个数明显减少,子宫内膜发育受损,血清T浓度及子宫内膜PR、E_2R表达升高,血清PROG、E_2浓度及子宫内膜Sphk1mRNA、S1Pr1mRNA、AktmRNA、CyclinD1mRNA表达显著降低;与模型组比较,中药高剂量组体质量增长得到抑制,腺体个数明显增加,子宫内膜发育改善,血清PROG、E_2浓度及子宫内膜Sphk1mRNA、S1Pr1mRNA、AktmRNA、CyclinD1mRNA表达升高,血清T浓度及子宫内膜PR、E_2R表达降低。结论:补肾化痰法可能通过纠正肥胖PCOS雌鼠生殖性激素紊乱,调控PR、E_2R,激活Sphk1信号通路,促进子宫内膜血管生成,从而发挥改善子宫内膜容受性的作用。     

补肾化痰法调节PCOS卵泡基底膜分子筛功能的研究

目的:从分子生物学水平研究补肾化痰中成药灵术颗粒调控多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵泡基底膜分子筛功能,调节两细胞间信息交换,促进卵泡发育的可能作用靶点,阐明其疗效的分子机制;为灵术颗粒治疗PCOS的临床应用提供科学依据。方法:应用Poresky方法制造PCOS大鼠,采用随机对照实验的方法,分为灵术颗粒组、二甲双胍组、空白对照组及正常对照组,各组连续灌胃14d。测定各组大鼠治疗后卵泡基底膜厚度及颗粒细胞、卵泡内膜细胞数目及卵泡基底膜蛋白(Ⅳ型胶原、层连接蛋白及串珠养蛋白聚糖)表达含量。结果:4组大鼠治疗后卵泡基底膜厚度均数比较,空白对照组基底膜厚度显著高于其他3组,而灵术颗粒组与二甲双胍组基底膜厚度接近正常对照组。4组间大鼠卵泡基底膜Ⅳ型胶原、连接蛋白及串珠养蛋白聚糖的表达有显著差异。Ⅳ型胶原的比较,空白对照组表达最多,灵术颗粒组次之,正常对照组再次之,二甲双胍组最少。而层连接蛋白和串珠养蛋白聚糖的比较,以空白对照组表达最多,灵术颗粒组与二甲双胍组效果无差别,正常对照组层连接蛋白表达最少。结论:补肾化痰中成药灵术颗粒和二甲双胍均可通过减少PCOS卵泡基底膜蛋白表达,改变卵泡基底膜厚度,改善卵泡基底膜分子筛功能,调节两细胞间信息交换,促进卵巢排卵;灵术颗粒和二甲双胍效果相当。     

补肾化痰活血法治疗PCOS不孕不育76例

目的 探讨补肾化痰活血法治疗PCOS不孕不育的临床治疗效果.方法选取我院在2011年1月至2013年3月收治的114例多囊卵巢综合征（PCOS）不孕不育患者随机分为观察组和对照组,对照组患者给予克罗米芬治疗,观察组患者在西药治疗基础上联合补肾化痰活血法治疗,对比观察两组PCOS不孕不育患者的临床治疗效果.结果观察组患者在临床疗效、周期排卵率、总妊娠率上明显优于对照组患者,存在显著差异性（P＜0.05）.结论中西结合治疗PCOS不孕不育疗效显著,值得广泛推广和使用.     

补肾化痰活血法治疗PCOS不孕不育的临床效果

目的探讨补肾化痰活血法治疗多囊卵巢综合征不孕不育的临床效果。方法选取我院2012年2月—2014年4月收治的60例PCOS不孕不育患者,随机分为观察组和对照组各30例,对照组采用克罗米芬治疗,观察组在此基础上采取补肾化痰活血法选取中药治疗,对比观察两组PCOS不孕不育患者临床治疗效果。结果观察组临床治疗总有效率达到93.33%,明显优于对照组80.00%(P0.05);观察组周期排卵率(85.00%)明显高于对照组(65.00%)(P0.05);观察组总妊娠率(66.67%)明显高于对照组(40.00%)(P0.05)。结论采取补肾化痰活血法治疗PCOS不孕不育具有较好的临床治疗效果,临床推广性高。     

补肾利湿法中药复方对大鼠痛风性关节炎NALP6信号传导通路调控作用的研究

目的探讨补肾利湿法中药复方对痛风性关节炎大鼠NALP6信号传导通路的调控作用。方法将84只SD大鼠随机分成空白对照组、模型组、中药痛风舒组、西药秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。每天1次进行药物灌胃。在第7天给药1 h后,采用改良复合氧嗪酸钾和尿酸钠造模方法制作痛风性关节炎大鼠模型。造模4 h后取材,观察各组大鼠滑膜组织病理变化,采用ELISA法检测血清血尿酸、caspase-1、IL-1β、IL-18的含量,并以Western blot法检测滑膜组织内NALP6蛋白的表达水平。结果经补肾利湿中药复方干预的中药中剂量组,其大鼠滑膜组织病理学改变减轻,体内血尿酸值明显下降,血清caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平显著下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);经补肾利湿中药复方干预的中药高剂量组,Western blot检测滑膜组织内NALP6蛋白的表达明显下调,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论阻断NALP6-caspase-1-IL-1β这一炎症信号通路是补肾利湿中药复方防治痛风性关节炎的重要机制之一。     

补肾化痰法对肾虚痰湿型肥胖PCOS雌鼠子宫内膜CyclinD1mRNA表达的影响

目的:观察补肾化痰法对模拟肾虚痰湿型肥胖PCOS雌鼠血清性激素及子宫内膜CyclinD1mRNA表达的影响,探讨其改善子宫内膜容受性的作用及机制。方法:选取SD雌鼠,制备肥胖型PCOS雌鼠模型,采用Elisa法检测雌鼠血清T水平,Real-time PCR检测雌鼠子宫内膜CyclinD1mRNA表达水平。结果:与空白对照组相比,模型对照组雌鼠血清T浓度升高,子宫内膜CyclinD1mRNA表达显著降低(P0.01);与模型对照组相比,阳性药物组、中药高剂量组雌鼠血清T浓度降低(P0.05),子宫内膜CyclinD1mRNA表达显著升高(P0.01)。结论:补肾化痰法可能通过上调雌鼠子宫内膜CyclinD1mRNA的活性从而抑制T水平,改善肥胖PCOS高雄状态,改善子宫内膜容受性,从而提高妊娠率。     

健脾化痰中药联合有氧运动对肥胖型PCOS大鼠胰岛素抵抗及胰岛素信号通路的影响

目的:建立多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)动物模型,观察健脾化痰中药联合有氧运动对PCOS-IR大鼠胰岛素、性激素及卵巢组织PI3K/PKB/mTOR蛋白表达的影响。方法:大鼠造模成功后随机分为有氧运动组、中药加有氧运动组、模型对照组,经不同干预治疗28天后,检测大鼠体重、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(Homa IR);检测大鼠血清LH、FSH、T;Western Blot法检测大鼠卵巢组织PI3K/PKB/mTOR蛋白水平的表达。结果:中药加有氧运动组体重、FPG、FINS、胰岛素抵抗(IR)、LH、FSH、T、PI3K/PKB蛋白表达量较模型对照组显著升高(P0.05),mTOR蛋白表达量显著降低(P0.05)。中药加有氧运动组FINS、IR、T、mTOR蛋白表达量较有氧运动组显著下降(P0.05),PI3K/PKB蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论:健脾化痰中药联合有氧运动能减轻肥胖型PCOS-IR大鼠体重,改善IR及性激素异常,其机制可能通过影响胰岛素信号通路PI3K/PKB/mTOR的活性来发挥作用。     

补肾化痰祛瘀类中药对PCOS模型大鼠生殖内分泌系统影响的实验研究

目的:观察PCOS模型大鼠血清性激素T、FSH、LH及卵巢重量、面积的变化,探讨补肾化痰祛瘀类中药对PCOS模型大鼠生殖内分泌系统的影响.方法:用Poresky法诱导多囊卵巢综合征大鼠,并分别以补肾化痰祛疼类中药、西药(罗格列嗣)、中西药联合用药治疗.观察治疗后对血清性激素T、FSH、LH的影响以及卵巢重量和面积的变化.结果:补肾化痰祛瘀类中药能降低降低血清T、LH水平,以及降低LH/FSH比值,降低卵巢重量及卵巢平均面积.结论:补肾化痰祛瘀类中药能改善PCOS大鼠的生殖内分泌功能.     

补肾化痰法经VEGF/Akt通路调控肥胖型多囊卵巢综合征雌鼠子宫内膜的影响

目的观察补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)雌鼠子宫内膜VEGF/Akt通路相关分子表达的影响,探讨该法对子宫内膜的影响。方法采用7～8周龄SD雌鼠,来曲唑加高脂乳剂建立肥胖型PCOS模型,以补肾化痰法经典方治疗,结合阴道脱落细胞涂片、血清性激素和卵巢形态学进行模型验证,ELISA法检测子宫匀浆VEGF含量,免疫组织化学染色法检测子宫组织E_2R、VEGFR2,Western blotting检测子宫组织p-PDK1、p-Akt蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠孕激素显著下降(P0.01),VEGF、VEGFR2、p-PDK1显著升高(P0.01),E_2R升高(P0.05),p-Akt表达上调,提示造模成功,子宫内膜可能与VEGF/Akt通路相关;与模型对照组相比,中药高剂量组大鼠P升高(P0.05),E_2R显著下降(P0.01),VEGF、VEGFR2、p-PDK1下降(P0.05),p-Akt表达降低。结论 VEGF/Akt通路可调控肥胖型PCOS雌鼠的子宫内膜,补肾化痰法能有效下调相关分子的表达,抑制VEGF/Akt通路进而改善肥胖型PCOS子宫内膜微环境。     

补肾化痰法对肥胖型PCOS雌鼠AdipoR1、AMPK的影响及其调控胰岛素抵抗的作用

目的:观察补肾化痰法经APN/AMPK通路调节肥胖型PCOS大鼠胰岛素抵抗的作用及机制。方法:选取7~8周龄SD雌性大鼠,来曲唑联合高脂灌服制备肥胖型PCOS模型,以补肾化痰法治疗,放射免疫法检测大鼠血清FSH、LH、E、P、T,免疫组织化学染色法检测AdipoR1、InR,Western blotting检测p-AMPK蛋白表达水平。结果:(1)与模型对照组比较,各治疗组排卵率显著升高;中药高剂量组、中剂量组大鼠体质量增长率显著低于模型组(P0.05);(2)与模型对照组比较,中药高、中剂量组血清FSH、P、E2含量显著增高(P0.05或P0.01),中药中剂量组血清LH显著降低(P0.01),中药高、中剂量组血清T含量降低(P0.05);(3)模型对照组卵巢颗粒细胞AdipoR1、p-AMPK表达显著低于空白对照组(P0.01),而中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞AdipoR1表达明显高于模型对照组(P0.05或P0.01),中药各剂量组p-AMPK均高于模型对照组(P0.01);(4)与模型对照组比较,中药高、中剂量组FBG、Fins、HOMA-IR、INR显著下降(P0.05或P0.01),中药高、中剂量组卵巢组织胰岛素受体表达显著增高(P0.05)。结论:肥胖型PCOS雌鼠出现排卵障碍,生殖内分泌紊乱的表现,并伴随全身的糖代谢异常及胰岛素抵抗。补肾化痰法可能经APN/AMPK通路改善肥胖型PCOS的肥胖状态、生殖内分泌紊乱及胰岛素抵抗。     

补肾化痰方对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗Akt通路调控的实验研究

目的探讨补肾化痰方对多囊卵巢综合征（polycysticovariansyndrome,PCOS）模型大鼠卵巢内胰岛素信号传导分子的调控。方法Wistar雌鼠50只,随机分为溶媒对照组、模型组、中药低剂量组（5．406g／kg）、中药中剂量组（10．812g／kg）、中药高剂量组（21．624g／kg）,每组10只。测定大鼠空腹血糖及胰岛素水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA．IR）;RT—PCR技术检测糖原合成酶激酶－3β（GSK-3β）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）、胰岛素受体底物-1（IRS-1）以及过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPAR-1）表达,Westernblot法检测卵巢内胰岛素信号传导分子蛋白激酶B（Akt）表达。结果与溶媒对照组比较,模型组HOMA-lR及PPAR-1mRNA表达明显升高,卵巢GSK-3β、GLUT-4、IRS-1mRNA表达及Akt、p-Akt蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较,中药高剂量组HOMA-IR明显降低,GSK－3β、GLUT-4、IRS-1 mRNA表达及Akt蛋白表达均显著升高,p-Akt蛋白表达尤为显著,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;中药低、中剂量组GSK-3β、GLUT-4mRNA显著升高,PPAR-1mRNA明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;中药低剂量组p-Akt蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PCOS模型鼠存在胰岛素抵抗,并存在卵巢组织信号通路传导异常。补肾化痰方能够改善PCOS大鼠胰岛素抵抗,与胰岛素信号传导分子蛋白表达的调控有关。     

补肾化痰方治疗胰岛素抵抗PCOS的临床研究

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期妇女最常见的生殖障碍、代谢异常并存的内分泌紊乱综合征,其发病率达6%~21%。胰岛素抵抗是多囊卵巢综合征远期并发症的决定因素。本研究旨在通过前瞻性随机对照试验,观察第五批全国名老中医学术经验继承工作指导教师侯丽辉教授诊治PCOS经验方剂"补肾化痰方"治疗胰岛素抵抗PCOS的临床疗效,探讨其可能作用机制。结果:两组治疗PCOS胰岛素抵抗女性3个月经周期后,组间比较各临床血清学指标、体格检查无明显差异,但在痰湿证候评分方面,与二甲双胍组比较,补肾化痰方组可显著降低PCOS女性痰湿证候评分;但补肾化痰方组组内比较存在明显差异,治疗后,其血清SHBG水平显著升高、OGTT试验空腹血糖、60 min血糖和HOMA-IR显著下降;血清CHOL、LDL-C和Apob水平显著下降;体重、BMI、臀围、腰围和黑棘皮评分显著下降,具有显著性差异。二甲双胍组组内比较存在明显差异:二甲双胍组治疗后,其血清LH、FSH水平显著下降,空腹胰岛素和HOMA-IR显著下降;血清TG水平显著下降;体重、BMI、臀围、腰围和F-G多毛评分显著下降,具有显著性差异。结论:补肾化痰方对PCOS胰岛素抵抗女性有较好的疗效,可改善PCOS女性胰岛素抵抗,降低血清高血脂症,降低体重,改善痰湿证候,提高排卵和妊娠率,其作用机制可能是调节PCOS脂质代谢紊乱,改善其胰岛素抵抗。     

补肾化痰复方对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢内胰岛素信号传导分子的调控

目的观察补肾化痰复方对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠糖脂代谢及卵巢内胰岛素信号传导分子表达的影响。方法 Wistar雌性大鼠孕16天时分别在颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5 mg/kg（其子代雌鼠随机分为给药组与模型组,每组10只）或等剂量中性茶油（其子代雌鼠为对照组,10只）,每天1次,连续3天。给药组给予补肾化痰复方灌胃,模型组及对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每天1次,连续20天。称大鼠体重、卵巢重量,计算脂体比;采用口服葡萄糖耐量试验（OGTT）测定大鼠0、0.5、1、2 h血糖水平;检测血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）、空腹血糖及胰岛素水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）;采用Western blot法检测卵巢内胰岛素信号传导分子蛋白激酶B（AKT2）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和细胞外信号调节激酶1（ERK1）的蛋白表达以及AKT2、GSK3β、ERK1磷酸化（P-AKT2、P-GSK3β、P-ERK1）的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组脂体比、OGTT试验0.5、2 h血糖水平及HO-MA-IR均明显升高,HDL-C水平明显降低（P〈0.05）。与模型组比较,给药组脂体比、OGTT试验2 h血糖水平明显降低,HDL-C水平明显升高（P〈0.05）。模型组卵巢组织中AKT2、P-AKT2、GSK3β、P-GSK3β、GLUT4及ERK1的表达明显低于对照组（P〈0.05）;给药组GSK3β、P-GSK3β及GLUT4的表达较模型组明显增高（P〈0.05）。结论 PCOS雌鼠存在胰岛素抵抗及糖脂代谢功能异常,并存在卵巢组织信号传导通路的异常。补肾化痰复方能够改善胰岛素抵抗及糖脂代谢功能,可能与胰岛素信号传导分子蛋白表达的调控有关。     

补肾活血化痰方对COPD大鼠Wnt/β-catenin信号通路及气道重塑的影响

目的 观察补肾活血化痰方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠Wnt/β-catenin信号通路及气道重塑的影响。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组及阳和平喘颗粒低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组大鼠采用烟熏加气管内滴入脂多糖方法建立COPD模型。造模成功后,桂龙咳喘宁组给予桂龙咳喘宁3.5 mL/100 g灌胃,平喘颗粒低、中、高剂量组分别给予阳和平喘颗粒1.75 g/(kg·d)、3.5 g/(kg·d)、7 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,均连续12周。HE染色和Masson染色观察肺组织病理学形态,ELISA法检测血清转化生长因子β₁(TGF-β₁)和血小板衍生生长因子(PDGF)水平,Western blot法检测肺组织中β-catenin、CyclinD1和Axin蛋白表达情况,RT-PCR法检测肺组织中wnt3a、wnt5a、β-catenin、Axin、CyclinD1 mRNA表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺泡壁断裂,肺泡间隔增厚,炎性细胞浸润明显,气道壁、...     

补肾化痰法调控肥胖型PCOS-IR的临床疗效分析

目的观察补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)患者血清性激素水平、胰岛素抵抗(IR)、体质量指数(BMI)等的影响。方法纳入符合肥胖型PCOS-IR诊断标准的患者86例,其中治疗组采用补肾化痰法干预46例,对照组采用罗格列酮干预40例,均连续口服用药3个月经周期。观察两组治疗前后中医证候积分、LH/FSH、T、FINS、BMI等相关疗效指标变化情况。结果治疗前、后的两组间及组内中医证候积分比较,差异均有统计学意义(P0.05),治疗组优于对照组;两组治疗前后组内比较,LH/FSH、T、INS0、BMI等疗效指标降低(P0.05),治疗后组间比较无统计学意义(P0.05)。结论补肾化痰法可显著改善肥胖型PCOS-IR患者的肾虚痰湿型证候,具有下调LH/FSH、T等血清性激素水平及FINS、BMI值的趋势。     

补肾中药通过调控MAPK信号通路防治骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症（osteoporosis,OP）是一种与衰老相关的全身代谢性骨病。中医学认为,“肾虚髓空,髓减骨枯”是骨质疏松症发病的关键病因病机,补肾方药被广泛应用于OP的防治且安全有效。近年来随着分子生物学技术在中医药研究中的广泛应用,发现丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路与OP的发病密切相关,许多补肾方药可通过干预该通路中相关信号分子的表达,进而调节骨代谢,发挥防治OP的作用。该文基于MAPK信号通路在骨代谢中的调节机制,就补肾单味中药及复方调控MAPK信号通路防治OP相关研究展开综述,以期为中医药防治OP的研究提供参考。