加味温胆汤对湿热证大鼠水通道蛋白表达的影响

目的 通过建立湿热证外因模型及内外因模型,观察水通道蛋白(aquaporins, AQPs)的表达水平,探讨湿热证本质,从调控“水液代谢”角度明确加味温胆汤对湿热证的防治作用,进一步阐明加味温胆汤防治湿热证的分子机制。方法 将雄性SPF级SD大鼠随机分为7组,即正常组、外因模型组、外因香连丸组、外因加味温胆汤组、内外因模型组、内外因香连丸组、内外因加味温胆汤组,每组10只。采用人工气候箱+高脂高糖饮食双重作用与人工气候箱单独作用的对比造模法复制湿热证模型,造模10d后开始灌胃给药,分别给药4周,正常组及模型组均给予同体积的水。经末次给药后,麻醉取材,采集腹主动脉血、胃、肺、肾和肝组织。微板法检测血清甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C);酶联免疫吸附测定试验(ELISA)法检测大鼠不同组织中的AQPs。结果 与...     

湿热因素对大鼠胃黏膜水通道蛋白3、4基因表达的影响

目的探讨湿热因素对大鼠胃黏膜水通道蛋白（AQP）3、4基因表达的影响。方法30只大鼠随机分成3组，造模20d。对照组正常喂饲；脾虚组隔日喂饲，非喂饲日灌喂番泻叶水煎液；模型组20％蜂蜜水自由饮用，隔日灌服油脂，造模开始后第16～20日每日20时-次日8时将大鼠置入人工气候箱中，造模结束后，采用FQ-PCR方法测定各组胃黏膜AQP3、AQP4基因表达。结果模型大鼠在造模过程中出现湿热证的特征性表现；模型组AQP3、AQP4基因表达水平高于对照组、脾虚组（P〈0．05）。结论通过对大鼠施加内、外湿因素的造模方法可复制出湿热证的证候特征；AQP3的异常表达可能是湿热证的发生机制之一。     

脾胃湿热证大鼠湿偏重、热偏重模型尿液AQP2的变化及其在肾组织的表达

目的:研究脾胃湿热证湿、热偏重型之间AQP2在尿液中的变化及在肾脏组织中表达的变化规律,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用Bradford方法测定尿液中AQP2含量,采用SABC免疫组化法检测肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2的表达。结果:湿偏重组尿液AQP2含量明显减少,热偏重组尿液AQP2含量明显增加,而且热偏重组尿液AQP2含量更高。AQP2在肾脏的表达中,湿偏重组肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2表达明显比正常组、白虎加苍术汤组及清香散组减少,热偏重组表达最多。结论:AQP2对于脾胃湿热证"湿"的形成,湿、热的量化,判断湿、热的偏重具有重要的作用。白虎加苍术汤及清香散祛湿的作用可能是通过调节AQP2对细胞内外体液平衡的功能而达到的。     

肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA表达的研究

目的：观察肾气虚模型大鼠肾脏水通道蛋白2（AQP2）表达的情况。方法：将SD大鼠20只随机分为模型组和对照组，用RT—PCR方法检测肾脏AQP2mRNA的表达。结果：肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA的表达较对照组减少（P〈0．01）。结论：肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA的表达减少，从而导致肾脏AQP2表达减少，引起尿量增多。本实验为中医学“肾主水”理论提供了实验依据。     

肺气虚证模型大鼠肾组织水通道蛋白2表达的变化

目的观察肺气虚证模型大鼠肾组织水通道蛋白2（AQP2）表达的变化,为机体水液代谢过程中肺肾相关理论提供依据。方法20只大鼠随机分为模型组和对照组,用免疫组化、Western blot、RT-PCR方法测定肾组织AQP2蛋白及mRNA表达。结果肺气虚证模型组肾组织AQP2表达增加,AQP2mRNA表达增高,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〉0．01）。结论肺气虚证模型大鼠肾组织AQP2表达增强,提示肺主“通调水道”功能可能与影响肾小管AQP2表达有关。     

湿阻中焦证模型胃肠水通道蛋白2的表达分布谱及平胃散的干预作用

目的探讨平胃散对湿阻中焦证模型的干预作用机制。方法 SD大鼠50只,随机分空白组、空白给药组、模型组、平胃散组和自然恢复组,每组10只。模拟外湿过盛、饮食不节、情志不遂三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。空白给药组和平胃散组给予平胃散汤剂灌胃10ml/kg,空白组和自然恢复组给予0.9%生理盐水灌胃10ml/kg,3天后取材。用免疫组化技术测定胃肠组织AQP2的分布,用酶联免疫法测定胃肠组织AQP2的含量。结果模型组大鼠AQP2在胃体中间黏膜、大肠中段黏膜下组织表达减少,在小肠中段组织、大肠黏膜、大肠末端黏膜下组织表达增加。平胃散增强湿阻中焦证胃体中间黏膜、大肠中段的黏膜AQP2的表达,抑制湿阻中焦证大肠中段黏膜下组织AQP2的表达。结论 AQP2在湿阻中焦证胃肠特征性表达分布谱可能是湿阻中焦证的分子基础之一;平胃散对其表达的干预可能是该方治疗湿阻中焦证的分子机理之一。     

湿阻中焦证模型胃肠水通道蛋白9(AQP9)的病理特征性表达分布谱以及平胃散干预的研究

目的以前期较成熟湿阻中焦证动物模型为研究平台,研究湿阻中焦证动物模型胃肠组织AQP9的分布和含量以及平胃散的干预,揭示湿阻中焦证动物模型水通道蛋白病理特征性表达分布谱。从蛋白水平揭示湿阻中焦证在水液代谢失调病机方面以及平胃散治疗湿阻中焦证的科学内涵;搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法模拟外湿过盛、困阻脾胃,饮食不节、湿从内生,情志不遂、气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用免疫组化技术测定胃肠组织AQP9的分布,用酶联免疫法(ELISA)测定胃肠组织AQP9的含量。结果湿阻中焦证AQP9在胃贲门粘膜、胃体中间组织、小肠中段粘膜下组织表达减少,AQP9在胃贲门粘膜下组织表达增加。平胃散增强湿阻中焦证胃体中间组织AQP9的表达。结论 AQP9在湿阻中焦证胃肠特征性表达分布谱可能是湿阻中焦证湿邪困阻脾胃,阻遏气机,散输水津失调所表现证候的分子基础之一。平胃散对湿阻中焦证胃肠AQP9表达的增强可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证湿邪困阻脾胃,阻遏气机,散输水津失调所表现证候的分子机理之一。平胃散增强正常大鼠胃肠AQP9的表达,可能是平胃散苦燥虽可祛湿但也可伤津液的分子机理之一。平胃散治疗湿阻中焦证的疾病临床疗效确切,但也不能乱服多服。     

从平胃散干预前后水通道蛋白0(AQP0)的定性定量表达研究湿阻中焦证的水液代谢机制

目的观察并分析水通道蛋白0(AQP0)在大鼠消化段(胃贲门、胃体中部、大肠中段、大肠末段)的差异性表达,推测其与消化道生理功能的相关性及平胃散对消化道水液代谢的干预机制。方法通过对三大致湿因素的联合应用(外湿过盛,碍胃困脾;饮食不节,内生湿邪;情志不遂,水湿失布),建立湿困中焦的动物病理模型,采用免疫组织化学技术检测AQP0在消化段的分布及表达情况。结果 AQP0主要在消化道的黏膜层表达,黏膜下层、肌层和外膜处可有疑似表达。空白组与模型组相较而言:AQP0在胃贲门黏膜层表达有增加的趋势。自然恢复3 d后,相较于模型组:AQP0在胃贲门黏膜层,大、小肠中段表达有增加的趋势,胃体中间有降低的趋势。经平胃散干预3 d后,相较于模型组:AQP0在胃贲门和大肠中段黏膜层有增加的趋势,胃体中部和小肠中段黏膜的表达略有降低。且平胃散干预组与自然恢复组比较,AQP0在胃贲门、胃体中部、小肠中段黏膜层的表达有所降低。同时,空白给药组相较于空白组而言:AQP0在消化道各段黏膜层的分布有增加的趋势。结论①AQP0在消化道黏膜层表达,可能与水分吸收,腺体分泌的调控机制相关;②AQP0在胃和肠的表达有差异,内环境pH可能是影响因素之一;③平胃散能促进AQPO的表达,可以通过AQP0维持水液代谢的平衡,这可能是平胃散燥湿健脾、散满和胃在分子水平的机制之一。     

肺气虚大鼠肺、肾组织AQP1表达及血浆ET水平变化

目的观察肺气虚模型大鼠肺、肾组织水通道蛋白1(AQP1)表达及血浆中内皮素(ET)水平的变化,为中医学肺肾相关理论提供实验依据。方法20只大鼠随机分为模型组和对照组,应用放射免疫方法测定血中ET含量;应用Western blot方法测定AQP1蛋白含量的变化。结果肺气虚模型组肾组织AQP1表达高于对照组,而肺组织AQP1表达低于对照组;模型组血浆ET明显升高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论肺气虚模型大鼠肾组织AQP1表达增强,而肺组织AQP1表达降低,ET可能促进肾组织AQP1表达、抑制肺组织AQP1表达。     

基于“心肾相关”探讨水通道蛋白在心衰中的作用

心力衰竭（简称心衰）指因心脏结构或者功能异常导致心室射血或充盈受损,从而引起的一组临床综合征。中医学提出了“心肾相关”理论,并认为肾者主水,肾脏在维持水液代谢平衡中具有重要的作用。因此,对于心衰中水潴留的状态,可从心肾论治。心衰的基本病机是肾虚血瘀、水液内停,治法包含交通心肾、温阳利水、补肾活血和疏通经络。水通道蛋白（AQPs）是水液代谢的关键分子基础,与精氨酸加压素系统（AVP）、肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）、利尿剂抵抗共同参与心衰水潴留的发病。研究表明,调补心肾中药通过靶向AQPs改善心衰水潴留状态,从而延缓甚至逆转心衰进程。笔者从心肾相关理论出发,探讨了心衰的中医病名及病机,论述了AQPs在心衰水潴留发病中的作用,诠释了调补心肾法治疗心衰的现代内涵,旨在为中医药防治心衰水潴留提供思路。     

慢性肾脏病肾虚证患者尿液渗透压状况分析

目的:研究尿渗透压与慢性肾脏病(CKD)患者的肾虚的关系。方法:121例CKD患者按慢性肾炎(前期)中医辨证标准积分分为肾阴虚组63例和肾阳虚组58例,30例无肾脏疾病,中医无肾虚证者为对照组,检测肝肾功能、尿常规、尿渗透压。结果:CKD患者中,尿渗透压结果与中医症状积分有显著的相关,即在肾阴虚病人中医症状积分越高,尿渗透压结果越高,肾阳虚病人,中医症状积分越高,尿渗透压结果越低。结论:尿渗透压可以作为CKD的中医辨证的客观化指标之一。     

脾胃湿热证大鼠模型的尿液代谢组学分析

目的 以脾胃湿热证模型大鼠为研究对象,基于尿液代谢组学寻找潜在生物标志物及相关代谢通路,从内源性小分子代谢物层面探究脾胃湿热证候本质。方法 将16只SD大鼠随机分为正常组及模型组,正常组给予普通饲料喂养,模型组在此基础上每日增加200 g·L^-1蜂蜜水自由饮用,猪油与白酒隔日交替灌服,共喂养17 d,第10天起每日相同时间将大鼠置于温度30~34 ℃、相对湿度95%的环境中2 h,共7 d,建立脾胃湿热证大鼠模型,并通过观察一般体征,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆胃动素（MTL）、胃泌素（GT）含量及胃肠组织病理学检查对模型进行评价;利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行尿液代谢组学分析,检测条件为ACQUITY? UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）梯度洗脱（0~3 min,1%~18%B;3~8 min,18%~40%B;8~10 min,40%~100%B）,流速0.4 mL·min^-1,电喷雾离子源（ESI）,正、负离子模式检测,扫描范围m/z 50~1 000。利用单变量与多变量统计分析筛选组间差异离子,根据精确相对分子质量计算其元素组成,将碎片离子信息与人类代谢组数据库（HMDB）等数据库匹配以鉴定生物标志物。通过京都基因和基因组百科全书（KEGG）数据库获得代谢物的生物信息,采用MetaboAnalyst 5.0软件分析其相关代谢通路。结果 与正常组比较,模型组肛温显著上升（P<0.01）,血浆MTL和GT水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,胃及结肠组织出现充血、出血及炎性浸润等病理性变化;尿液代谢组学研究发现L-组氨酸、柠檬酸、异柠檬酸等25个差异代谢物可作为脾胃湿热证的生物标志物,其中13个代谢物为内源性物质的Ⅱ相代谢产物（葡萄糖醛酸结合物、硫酸结合物和乙酰基结合物）,涉及组氨酸代谢、三羧酸循环、乙醛酸和二羧酸代谢等代谢通路。结论 脾胃湿热证主要引起组氨酸代谢、三羧酸循环、乙醛酸和二羧酸代谢3条代谢通路的紊乱,以及内源性代谢物的活性/失活状态失衡,可能涉及机体免疫应答、物质及能量代谢、炎症反应和肠道菌群等方面,可为脾胃湿热证模型的建立和应用提供依据。     

脾肾气虚证2型糖尿病大鼠模型的复制

目的:观察通过饮食劳倦所伤复合腹腔注射丁胺卡那霉素及链脲佐菌素作为造模要素能否成功复制出脾肾气虚证2型糖尿病病证结合动物模型。方法:健康雄性SD大鼠60只,体质量(180±20)g,按体质量随机分成二组:空白对照组(n=20)和模型组(n=40)。模型组大鼠单日用200%的大黄浓煎液灌胃,4 m L/只,游泳至耐力极限;双日高糖高脂膳食持续喂养,共计12周,第4周后给予丁胺卡那霉素及链脲佐菌素腹腔注射。结果:模型组大鼠造模4周后出现游泳耐力逐日下降,体毛光亮度减退,倦怠,懒动,喜聚堆、弓背蜷缩,粪便时软、时塘,血糖增高;第6周后体质量开始显著增加;甘油三酯和高密度脂蛋白分别从第2周后表现出异常;实验结束后模型组出现高胰岛素血症、胰岛素抵抗,符合本研究拟建立的脾肾气虚证、2型糖尿病的评估标准。结论:通过饮食劳倦所伤复合腹腔注射丁胺卡那霉素及链脲佐菌素造模方法可成功复制出脾肾气虚证2型糖尿病病证结合动物模型。     

肺气虚证大鼠模型溶菌酶含量变化的实验研究

目的 通过测定肺气虚证大鼠气管冲洗液、肺匀浆、血清中溶菌酶含量,为肺气虚证客观定量化诊断和深入研究肺气虚证本质提供依据.方法 通过烟熏、铜绿假单胞菌感染,复制大鼠肺气虚证模型,分组检测其气管冲洗液、肺匀浆、血清中溶菌酶含量.结果 模型组与对照组相比,气管冲洗液、肺匀浆中溶菌酶含量显著下降.结论 肺气虚证大鼠,气管冲洗液、肺匀浆中溶菌酶含量变化可作为肺气虚证重要的客观指标之一.     

慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型的对比研究＊

目的 通过动物实验，在诱导大鼠慢性肾脏病基础上分别施加不同复合因素，比较研究不同“病证结合”模型特点及筛选构建与评价最优慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型。方法 将106只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养2周，随机分为正常组10只、模型组96只，模型组大鼠分别于第3周、第4周尾静脉注射阿霉素3 mg·kg^-1、4 mg·kg^-1，建立慢性肾脏病动物模型，将成模大鼠随机分为阿霉素组、羟基脲组（300 mg·kg^-1灌胃）、氢化可的松组（10 mg·kg^-1肌肉注射）、雌二醇组（4 mg·kg^-1腹腔注射）、甲硫咪唑组（2 mL·kg^-1灌胃）、氨鲁米特组（20 g·L^-1灌胃），每组各16只，再施加复合因素，建立慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”动物模型。记录大鼠一般状态、体质量、体温和游泳耐力；检测大鼠24 h尿蛋白；造模24周后，股动脉取血并处死大鼠，测量大鼠肾脏、脾脏、睾丸、肾上腺和甲状腺的脏器指数；采用HE和Masson染色法，观察大鼠肾脏病理变化；用比色法检测大鼠Scr、UA、BUN、TP、ALB、TC、TG的含量，用酶联免疫法检测大鼠FSH、LH、T、E2、T3、T4、TSH、SOD、CORT的含量。结果 与正常组比较，慢性肾脏病肾阳虚证各模型组大鼠一般情况均较差，出现不同程度的毛发干枯、弓背蜷缩、消瘦、精神萎靡等，其中氢化可的松组大鼠症状最为严重；各模型组游泳耐力减弱，尾根部温降低，24 h尿蛋白明显增加，部分大鼠出现腹水症状，其中，甲硫咪唑组大鼠体温最低，氢化可的松组大鼠游泳耐力最低；各模型组大鼠的甲状腺、睾丸和肾上腺指数降低，而肾脏指数不同程度的升高（P < 0.01），其中氢化可的松组大鼠脾脏指数明显上升（P < 0.01）；HE、Masson染色结果显示，各模型组大鼠出现肾小管上皮细胞疏松变、空泡变，肾小管扩张，肾小球纤维化、球囊壁增厚，肾间质出现淋巴细胞浸润。与正常组相比，各模型大鼠出现不同程度的Scr、UA、BUN、TC、TG的升高，而TP和ALB不同程度降低，其中，氢化可的松组大鼠TP和ALB明显降低（P < 0.05，P < 0.01）；各模型组的CORT均明显升高，内源性T3、T4、FSH、LH、T、E2和SOD不同程度的降低（P < 0.05，P < 0.01）；而TSH不同程度的升高（P < 0.01），其中，雌二醇组大鼠T最低，甲硫咪唑组大鼠SOD最低。结论 本实验中5种慢性肾脏病肾阳虚证大鼠均出现下丘脑-垂体-靶腺轴的紊乱，但在“性腺轴”“甲状腺轴”“肾上腺轴”上各有特点，其中氢化可的松组大鼠模型符合人类慢性肾脏病肾阳虚证证候特点和“肾阳虚三轴”改变，是理想的慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”模型，是中西医结合范式研究的有益尝试。     

脾阳虚大鼠模型尿木糖、尿淀粉酶及整体状况变化的观察

复合因素造模法是目前文献使用较多的脾阳虚造模方法:通过饮食失节伤脾气-交替喂饲甘蓝和精炼猪脂,劳倦过度伤脾气-每日跑步或游泳至疲劳,苦寒泻下伤脾阳-灌服冰番泻叶浸液,达到先伤脾气后损脾阳的目的.     

丹芪颗粒干预干燥综合征模型大鼠颌下腺水通道蛋白-5的表达研究

目的: 以干燥综合征(SS)模型大鼠颌下腺水通道蛋白-5(AQP5)的表达为靶点,探讨丹芪颗粒对SS的作用机制。 方法: 自身同种鼠抗原合并百白破疫苗加强免疫法免疫模型动物;离体颌下腺灌流法测试中药丹参、黄芪对唾液腺刺激程度;用Western blot分析SS大鼠颌下腺AQP5的表达。 结果: 免疫动物颌下腺出现类似SS的病理改变,存在大量淋巴细胞浸润,提示免疫造模成功。颌下腺中药灌流提示丹参、黄芪有不同程度促进唾液腺分泌的作用。Western blot 检测显示实验各组均出现相对分子质量为42×10³的条带。空白对照组AQP5表达数值正常1.35±0.13,与空白对照组比较,造模生理盐水组AQP5表达数值1.03±0.08明显减少(P<0.05)。造模丹芪高、低剂量组AQP5表达数值较造模生理盐水组明显增强1.31±0.15,1.27±0.10,P<0.05。 结论: 离体颌下腺中药灌流提示丹参有轻度对唾液腺直接促进作用,黄芪也有类似的作用,但两者促进唾液分泌的图形是不同的。丹芪颗粒可能通过增强颌下腺水分子通道的释放,上调AQP5的表达,从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量,缓解干燥综合征口腔干燥的症状。     

肾病湿热的辨治经验

湿热是肾病迁延难愈和持续发展的重要病机 ,病情复杂 ,辨治困难。从肾病湿热的辨识、主要治疗方法等方面 ,结合临床经验进行了探讨。     

络脉绌急模型大鼠炎症相关细胞因子的变化研究

目的:探讨络脉绌急模型大鼠血清中TNF-α、IL-2、IL-6和IL-10等炎症相关细胞因子的变化规律,为阐明络脉绌急病理变化奠定理论基础。方法:模型组大鼠每天灌服L-蛋氨酸(1 g/kg),分别于第10 d、第20 d、第30 d腹腔注射垂体后叶素(10 U/kg),正常组大鼠则注射生理盐水。注射后1 h左颈总动脉采血,室温凝固后于4℃,2000转/min,离心15m in,分离血清检测TNF-α、IL-2、IL-6和IL-10的含量;结果:造模10 d时,模型组大鼠血清的TNF-α、IL-2、IL-6水平均升高,并且20 d、30 d时继续升高,与正常对照组比较差异有统计学意义,而IL-10水平在开始时升高(造模10 d、20 d),随后下降。结论:利用喂食蛋氨酸损伤血管内皮细胞,复制络脉绌急大鼠模型时可能引发炎症反应病理过程。