人端粒酶逆转录酶调控的CD基因对卵巢癌细胞株的选择性杀伤作用研究

[目的]构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的自杀基因—胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶(CD-TK/5-FC)系统对人卵巢细胞及正常细胞株的体外杀伤作用。[方法]应用脂质体转染法将hTERT核心启动子启动质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC系统对上述3种细胞不同的杀伤作用;利用RT-PCR技术检测转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的不表达情况。[结果]卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为23.2%,与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显著增强,对于端粒酶阴性正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;pBTdel-279-TK转染后,3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性。[结论]人端粒酶逆转录酶启动子调控下的CD自杀基因对卵巢癌细胞株选择性杀伤作用治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗方式。     

促性腺激素释放激素对人卵巢癌细胞系OVCAR3体外生长调控作用的研究

目的观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系OVCAR3中的表达,并研究促性腺激素释放激素激动剂（Triptorelin）对卵巢癌细胞体外生长调控作用。方法采用免疫组化SP法检测卵巢癌细胞系OVCAR3 GnRH I受体的表达;分别应用不同浓度Triptorelin作用于细胞,MTT法检测细胞生长抑制率。结果人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRH I受体,Triptorelin可明显抑制GnRH I受体阳性的OVCAR3细胞生长。结论促性腺激素释放激素激动剂Triptorelin通过与人卵巢癌OVCAR3细胞株GnRH I受体结合,发挥抗增殖的作用。     

人体肺癌端粒酶表达的研究

目的 :研究肺癌端粒酶活性和临床特征的相关性 ,评价端粒酶作为肺癌诊断标记物的可行性 ,初步探讨吸烟和端粒酶激活在肺癌发病机制中的作用。方法 :组织标本取自 2 0 0 0年 6月～ 2 0 0 1年 1月华西医大附一院胸外科住院手术病人 ,其中原发性肺癌 2 7例 ,结核瘤 2例 ,炎性假瘤 1例。用 TRAP- EL ISA法检测端粒酶活性。结果 :2 7例组织病理学确诊的肺癌有 81.4 8% (2 2 / 2 7)端粒酶活性检测阳性。在不同组织病理学分型中 ,阳性率由高到低依次为 SCL C (小细胞肺癌 )、鳞癌、复合性腺鳞癌、细支气管肺泡腺癌、腺癌。肺癌组织端粒酶活性明显高于癌旁 (P=0 .0 0 0 )和良性组织 (P=0 .0 13)。结论 :端粒酶是一种较理想的诊断性肿瘤标志物。吸烟可能通过端粒酶激活途径促发鳞癌。     

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。     

甘薯花青苷色素的抗氧化活性及抑肿瘤作用研究

目的:为在食品中应用甘薯花青苷色素(SPAC),研究其抗氧化活性及抑肿瘤作用。方法:采用体外实验测定SPAC清除??O2和?OH及抑制丙二醛(MDA)生成的能力。测定SPAC对小鼠血清及皮肤超氧化物歧化酶(SOD)活性、抑制S180生长和血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与MDA生成的作用。结果:在体外实验中SPAC能清除??O2和?OH,与同浓度VC相比,清除率分别提高30.63%和20.57%;小鼠灌胃SPAC后的血清和皮肤细胞中SOD活力分别提高27.30%和13.50%;SPAC对小鼠肉瘤S180有抑制作用,最高抑瘤率达到43.12%;与对照组相比,在用SPAC的抑瘤组小鼠血清中GSH-Px和SOD活性明显提高,MDA降低。结论:SPAC具有抗氧化及抑肿瘤作用,在食品和化妆品中有开发潜力。     

黑米花色苷抑制人乳腺癌细胞促血管生成因子表达的机制

目的探讨黑米花色苷抑制HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453促血管生成因子表达的分子机制。方法以黑米花色苷和表皮细胞生长因子(EGF)单独或联合处理MDA-MB-453细胞株,Western blot检测HER-2/neu及MAPK信号通路关键蛋白ERK-1/-2的磷酸化水平改变,免疫荧光检测NF-κB p65的细胞内定位,RT-PCR检测肿瘤细胞促血管生成因子(包括VEGF、MMP-2/-9和uPA)在mRNA水平的表达变化。结果黑米花色苷能够显著抑制HER-2/neu和ERK-1/-2蛋白的磷酸化,阻止NF-Κb p65向细胞核内转位,并在mRNA水平抑制各促血管生成因子的表达。结论黑米花色苷可能通过对HER-2/neu及其下游EGFR/Ras/MAPK信号通路的阻断最终实现对肿瘤细胞促血管生成因子表达的抑制作用。     

澳洲茄胺盐酸盐对体外HeLa细胞培养生长抑制作用的研究

[目的]探索SBHL对体外培养HeLa细胞生长抑制影响,了解SBHL抗肿瘤活性. [方法]用细胞生长计数法观察SBHL对HeLa细胞生长抑制作用;MTT法测定SBHL抗肿瘤活性;流武细胞仪检测HeLa细胞DNA合成率和凋亡率. [结果]细胞生长计数法证实SBHL对HeLa细胞生长有抑制作用,且随药物浓度增加给药时间延长,其抑制作用增强;MTT法证实SBHL对HeLa细胞集落形成有抑制作用,并随SBHL浓度增加其抑制率也随之增强;流式细胞仪检测证实不同浓度SBHL对HeLa细胞DNA合成抑制率和凋亡率产生不同影响,且随药物浓度增加和给药时间延长,其抑制作用增强. [结论]SBHL能抑制HeLa细胞生长增殖作用,能抑制HeLa细胞DNA合成和诱导HeLa细胞凋亡.     

生长激素联合肝动脉化疗栓塞治疗肝癌的临床观察

目的：对比分析单用肝动脉化疗栓塞（TACE）和TACE联合重组人生长激素（γ-hGH）治疗原发性肝癌的近期疗效。方法：24例原发性肝癌病例随机分为两组，单用TACE组（对照组）12例和TACE联合γ-hGH组（研究组）12例。对照组接受TACE，表阿霉素35-40mg/m^2，加碘化油栓塞剂。而研究组接受以上治疗外，于治疗的1-5d接受γ-hGH治疗。监测治疗前、治疗的不同时间的生化指标、氮平衡、整体营养状况评分、生活质量评分和近期疗效。结果：2组病例的肝肾功能无差异；治疗的d3、d8研究组的白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白水平高于对照组；治疗的d3、d7，研究组的氮平衡高于对照组；治疗的14d、28d，研究组的营养状况较对照组好；接受TACE治疗后1周、2周的生活质量评分，研究组明显高于对照组（P〈0．05）；TACE后4周的疗效评价2组之间无差异。结论：-hGH联合TACE治疗原发性肝癌，能提高病人的营养状况、病人的生活质量和病人的氮平衡。肝肾功能不受影响，联用γ-hGH不降低疗效。     

山东地区汉族健康人群N-乙酰基转移酶基因多态性分布

[目的]探讨山东地区健康汉族人群N-乙酰基转移酶2(NAT2)基因多态性分布规律。[方法]采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),检测200名山东地区汉族健康人群NAT2基因多态性,并与其他地区人群进行比较。[结果]NAT2等位基因频率分别为:NAT2*4(56.0%)、NAT2*5B(12.0%)、NAT2*6A(16.5%)、NAT2*7B(15.5%),与浙江健康汉族人群NAT2等位基因频率分布比较差异无统计学意义(χ2=7.54,P﹥0.05);NAT2各基因型频率分别为:NAT2*4/*4(36.0%),NAT2*4/*7B(15.0%),NAT2*4/*6A(14.0%),NAT2*4/*5B(11.0%),NAT2*6A/*7B(6.0%),NAT2*6A/*6A(5.0%),NAT2*5B/*7B(4.0%),NAT2*5B/*5B(3.0%),NAT2*5B/*6A(3.0%),NAT2*7B/*7B(3.0%),符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=13.35,0.10﹤P﹤0.25);基因型分类:快乙酰化基因型(36%)、中间乙酰化基因型(40%)、慢乙酰化基因型(24%);表型:快型乙酰化(76%)、慢型乙酰化表型(24%)。[结论]山东地区汉族健康人群中频率最高的等位基因是NAT2*4,频率最低的等位基因是NAT2*5B,与中国浙江地区相近,与其他地区不同。最常见基因型为NAT2*4/*4,其次是NAT2*4/*7B,NAT2*4/*6A,NAT2*4/*5B,其他少见。表型以快型乙酰化为主。     

P-糖蛋白和肺耐药蛋白表达与上皮性卵巢癌预后因素分析

[目的]探讨影响原发性上皮性卵巢癌的预后因素.[方法]分析56例POEC患者的临床分期、病理类型、术前化疗、P-m蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及肺耐药蛋白(Lung resistance protein,LRP)表达与预后的关系.[结果]56例POEC患者均行肿瘤减灭术,平均存活43.06个月,3年及5年生存率分别为67.90%和35.71%.临床分期是影响上皮性卵巢癌预后的最重要因素,临床分期Ⅰ～Ⅱ期生存时间长干Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05),有腹水的术前化疗患者生存时间大于直接手术患者(P＜0.05),LRP表达阳性者生存时间少干LRP阴性者(P＜0.05),P-gp与LRP共表达阳性者平均生存时间是29月,低于非共表达阳性的60月(P＜0.05).而不同病理类型的POEC患者生存时间差异无统计学意义.Cox比例风险回归模型回归分析显示,临床分期、LRP的表达及有腹水患者的术前化疗是影响POEC预后的独立因素.[结论]临床分期,有腹水的术前化疗以及LRP表达与POEC患者的预后生存有关.